适用于定制抗体生产的蛋白表达

我们提供蛋白表达和生产服务，此服务完全集成到我们的定制抗体生产服务中，可为定制抗体开发项目带来便利和效率。

我们的整套蛋白表达服务包括：从多种来源进行基因合成（扩增）和亚克隆，以创建含有合适 N 端或 C 端标记的优化载体；将重组构建体转染或转化到适当的细胞系中；进行严格测试，以鉴定表达靶蛋白的细胞；大规模细胞培养（生产）；以及使用适当的标记特异性亲和柱对重组蛋白进行最终纯化。

我们使用多种蛋白表达系统，包括细菌细胞（带 PET 载体的大肠杆菌）、昆虫细胞（带 pIB/V5-Histadine 载体的 Sf9 细胞）和哺乳动物细胞（带 pLOC 载体的 HEK293 细胞）。我们可以帮助您设计和使用较适合所需抗体生产类型的方法。

• 蛋白抗原生产 — 使用我们的表达服务为定制抗体生产项目生成和制备蛋白抗原，并获取要保留的载体
• 优化载体设计 — 我们将向您推荐较为有效的设计和表达系统，以确保生产出能有效用于抗体生产的抗原
• 几乎可以处理任何基因 — 我们可以通过我们广泛的 cDNA 文库和载体集进行扩增和/或亚克隆，也可使用或从您提供的载体中获得序列
• 表达系统和亲和标签 — 可从细菌、昆虫和哺乳动物蛋白表达系统中进行选择并加入常用的亲和标签
• 蛋白和载体将保留 — 抗体生产项目完成后剩余的任何纯化蛋白抗原都会与构建的载体一样供您保留

适用于抗原生产的蛋白表达

尽管我们提供多个不同物种和细胞系统的蛋白表达，但是，若要为抗体生产项目制备足量的蛋白抗原，细菌蛋白表达是较简单、较快速、较便宜的选择。

因此，除非需要考虑下列某个因素，否则我们通常建议使用细菌表达：

• 重组蛋白必须具有只有哺乳动物或昆虫细胞表达才能提供的比活度或翻译后修饰 (PTM)
• 抗体的预期目标和应用是检测大肠杆菌蛋白  
• 客户（无论出于什么原因）特别需要哺乳动物或昆虫细胞载体作为最终交付物

一般程序

我们的默认细菌蛋白表达程序通常需要六周才能完成，具体如下所示：

• 计划 — 为了避免产生歧义，我们要求您同时提供蛋白和核苷酸序列，并指明要用哪个物种来检测最终抗体。我们喜欢使用 C 端 His 标记，但如有需要，我们可以使用其他融合标记。
• 构建 — 在大多数情况下，我们的文库都含有适当的 cDNA，我们会将其用作克隆或亚克隆的起始材料。不然，我们可以从您提供的质粒中获得序列，也可以合成基因（成本增加）。对于您提供的质粒，我们需要载体和质粒序列、载体图谱以及任何相关信息。
• 转化和选择 — 我们将重组构建体转化到高效表达细菌菌株中，诱导靶蛋白过度表达，选择阳性菌落，并通过检测来验证蛋白的表达。
• 培养和纯化 — 最后，我们使用 IPTG（收获物）诱导一升细菌培养物，然后用 Ni-NTA（对于带有 6xHis 标记的蛋白）或谷胱甘肽（对于带有 GST 标记的蛋白）微珠在天然或变性条件（视情况而定）下对蛋白进行纯化。
• 交付 — 此过程通常可产生 3 - 5 mg 蛋白，这个数量足以用于抗体生产项目。如果需要，我们可以在开始抗体生产之前提供一小份蛋白和/或细胞储备液样本供您检测。完成后，我们可以将抗体生产项目中剩余的所有蛋白交给您。