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丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 信号通路是蛋白激酶级联反应的典型例子。MAPK是一个级联磷酸化过程,通常,激活的MAP3K磷酸化MAP2K。MAP3K包括P38,ERK1/2,JNK和ERK5 四个亚族。P38 MAPK信号通路通过调控下游多种酶和转录因子的表达活性,参与细胞凋亡,炎症等。接着激活的MAP2K磷酸化MAPK使其活化。与MAP3K不同,MAPK和MAP2K的激活机制相对简单。Invitrogen P38 MAPK信号通路抗体旨在可靠地检测主要的MAPK靶标。每种抗体都经过验证适用于各种应用。
Invitrogen MAPK信号通路抗体旨在可靠地检测主要的MAPK靶标。
免疫荧光分析HT-29 在细胞质和细胞核表达的ERK3(右,绿色),(左)表示阴性对照。经福尔马林固定的细胞用含0.1% Triton X-100 的TBS透化 5-10 分钟,在室温下用含 3% BSA的PBS 封闭 30 分钟,然后用含3% BSA的PBS对ERK3 单克隆抗体 (5E1) (货号 MA1-101)进行1:200 稀释,并在 4 °C 孵育过夜。再用 PBST 洗涤细胞,并在室温避光孵育 DyLight 488 偶联的山羊抗小鼠 IgG (H+L) 二抗。用荧光红色鬼笔环肽标记F-肌动蛋白(红色),DAPI标记细胞核(蓝色),避光孵育 5-10 分钟。60 倍的放大倍率拍摄图片。
ERK1/2 (pTpY185/187) 的免疫组织化学分析显示石蜡包埋的人结肠癌组织的细胞质和细胞核中的染色(右)与没有一抗处理的阴性对照(左)。为了暴露靶蛋白,使用 10mM 柠檬酸钠 (pH 6.0) 进行抗原修复,微波加热 8-15 分钟。抗原修复后,组织在室温下用 3% H2O2-甲醇封闭 15 分钟,再用 ddH2O 和 PBS 洗涤,然后用 3% BSA-PBS对 Phospho-ERK1/2 (Thr185, Tyr187) 多克隆抗体(货号 44-680G)进行 1:20 稀释,在 4°C 孵育过夜。 PBST 中彻底洗涤组织,使用 HRP 二抗进行检测,然后使用 DAB 试剂盒进行比色检测。用苏木精复染组织并用乙醇和二甲苯脱水以准备上机检测。