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Invitrogen SYBR Safe DNA 凝胶染料是一种高灵敏度核酸染料,适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中的 DNA 染色SYBR Safe 核酸染料采用独特配方,作为溴化乙锭(EB)的替代物,使用更为安全,可使用蓝光或紫外光进行激发。该染料也适用于凝胶上的 RNA 染色。
SYBR Safe 核酸染料可以浓缩液形式提供,也可以即用型溶液形式提供。
SYBR Safe DNA Gel Stain, 10,000X
SYBR Safe DNA Gel Stain in 0.5X TBE
SYBR Safe DNA Gel Stain in 1X TAE
研究证明,使用 SYBR Safe 核酸染料进行核酸染色并通过 Invitrogen Safe Imager 蓝光透射仪观察 DNA 片段,与使用溴化乙锭染色并通过紫外光观察相比,克隆效率得到明显提升。
研究表明,使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料染色并通过 Safe Imager 蓝光透射仪观察处理的 DNA 构建体,其转化效率明显高于使用 EB 染色并使用紫外光透射仪观察处理的 DNA 构建体 (图 1)。
此外,随着紫外光照射时间的增加,使用 EB 染色构建体的转化效率下降了 30 倍。相比之下,使用 SYBR Safe DNA 凝胶染色的构建体,当长时间暴露于蓝光下,不会影响其转化效率 (图 1)。
使用 SYBR Safe 核酸染料染色并使用蓝光透射仪观察的 PCR 产物,其细菌转化效率几乎保持 100%,无论在蓝光下暴露多久 (图 2)。相比之下,与未暴露的 DNA 或 SYBR Safe 染色 DNA 相比,使用 EB 染色并在紫外光下暴露 30 秒的 PCR 产物,其成功转化的菌落数量减少了 80%。
图2.更高的 Gateway 克隆效率。使用 attB1 和 attB2 引物对 1.25 kb 的基因进行 PCR 扩增,取等量扩增产物在两块琼脂糖凝胶上分别进行分离。分别使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料或 EB 进行凝胶染色,然后分别使用 Safe Imager 蓝光透射仪或紫外光透射仪观察 DNA 片段。利用 Gateway BP 重组克隆 PCR 产物并转化至化学感受态细菌中。接种连续稀释三次的稀释物,计数集落。
多项关于 SYBR Safe DNA 核酸染料安全性的研究由独立实验室完成。
一项关于 SYBR Safe DNA 凝胶染料诱导叙利亚地鼠胚胎 (SHE) 细胞形态转化能力的研究明确表示,该染料是非致癌性的;与对照培养物相比, SYBR Safe DNA 凝胶染料不会诱导 SHE 细胞的原代培养物发生转化。相比之下,溴化乙锭(EB)在 SHE 形态转化分析中的结果为阳性,从而证实 EB 的确是很强的致突变物质。
一项关于 SYBR Safe DNA 凝胶染料诱导外周血淋巴细胞培养物染色体畸变的能力的研究表明,在使用或不使用 S9 代谢激活的条件下,SYBR Safe DNA 凝胶染料不会在 TK 位点引起小鼠淋巴细胞突变,也不会在人外周血淋巴细胞培养物中诱导染色体畸变。
研究显示,在几种不同的Salmonella typhimurium菌株中,与溴化乙锭(EB)相比,SYBR Safe DNA 凝胶染料在标准 Ames 测试中的致突变效应更低。在该测试中,SYBR Safe DNA 凝胶染料在七种菌株中的四种中出现了弱阳性,仅使用哺乳动物 S9 组分激活(图 3)。
图3.SYBR Safe DNA 凝胶染料和溴化乙锭(EB)的致突变性试验结果。
下表汇总了哺乳动物遗传毒性分析数据。
体外检测* | 细胞类型 | 使用 S9 激活的结果† | 未使用 S9 激活的结果† |
---|---|---|---|
转化1 | 叙利亚地鼠胚胎(SHE)细胞 | NA | 阴性 |
染色体畸变2 | 人外周血淋巴细胞培养物 | 阴性 | 阴性 |
正向突变3,4 | L5178YTK +/-小鼠淋巴细胞 | 阴性 | 阴性 |
* In vitro检测由位于弗吉尼亚州维也纳的 Covance Laboratories Inc. 完成。
†哺乳动物 S9 组分提取于经 Aroclor 1254 诱导的大鼠肝脏。NA = 不适用。
1Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis 356, 1 (1996); 2Evans, H.J., in Chemical Mutagens, Principles and Methods for Their Detection, A. Hollaender, Ed., Vol. 4, (1976) pp. 129; 3Mutation Res 72, 447 (1980); 4Mutation Res 59, 61 (1979).
对三只雌性大鼠进行 SYBR Safe DNA 凝胶染料(0.5X TBE 稀释)单剂量口服给药,限定剂量为 5,000 mg/kg,无死亡或毒性症状。针对胖头鱼的水生生物毒性研究也证实了 0.5X TBE 中的 SYBR Safe DNA 凝胶染料无毒性 (LC50 >750 mg/L)。下表中列出了两项口服毒性研究的汇总数据。
分析 | 方法 | 结果 |
---|---|---|
水生生物毒性‡ | 按照加利福尼亚州法规第22章针对胖头鱼进行急性毒性筛选 | 对水生生物无危害或毒性 |
口服毒性§ | EPA 急性口腔毒性测试 OPPTS 870.1100 | LD50 > 5000 mg/kg |
‡ 由位于加利福尼亚州圣地亚哥的 AMEC 地球与环境圣地亚哥生物分析实验室完成。
§ 由位于加利福尼亚州赫拉克勒斯的 Northview Pacific Laboratories, Inc. 完成。
一项关于 SYBR Safe DNA 凝胶染料诱导叙利亚地鼠胚胎 (SHE) 细胞形态转化能力的研究明确表示,该染料是非致癌性的;与对照培养物相比, SYBR Safe DNA 凝胶染料不会诱导 SHE 细胞的原代培养物发生转化。相比之下,溴化乙锭(EB)在 SHE 形态转化分析中的结果为阳性,从而证实 EB 的确是很强的致突变物质。
一项关于 SYBR Safe DNA 凝胶染料诱导外周血淋巴细胞培养物染色体畸变的能力的研究表明,在使用或不使用 S9 代谢激活的条件下,SYBR Safe DNA 凝胶染料不会在 TK 位点引起小鼠淋巴细胞突变,也不会在人外周血淋巴细胞培养物中诱导染色体畸变。
研究显示,在几种不同的Salmonella typhimurium菌株中,与溴化乙锭(EB)相比,SYBR Safe DNA 凝胶染料在标准 Ames 测试中的致突变效应更低。在该测试中,SYBR Safe DNA 凝胶染料在七种菌株中的四种中出现了弱阳性,仅使用哺乳动物 S9 组分激活(图 3)。
图3.SYBR Safe DNA 凝胶染料和溴化乙锭(EB)的致突变性试验结果。
下表汇总了哺乳动物遗传毒性分析数据。
体外检测* | 细胞类型 | 使用 S9 激活的结果† | 未使用 S9 激活的结果† |
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转化1 | 叙利亚地鼠胚胎(SHE)细胞 | NA | 阴性 |
染色体畸变2 | 人外周血淋巴细胞培养物 | 阴性 | 阴性 |
正向突变3,4 | L5178YTK +/-小鼠淋巴细胞 | 阴性 | 阴性 |
* In vitro检测由位于弗吉尼亚州维也纳的 Covance Laboratories Inc. 完成。
†哺乳动物 S9 组分提取于经 Aroclor 1254 诱导的大鼠肝脏。NA = 不适用。
1Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis 356, 1 (1996); 2Evans, H.J., in Chemical Mutagens, Principles and Methods for Their Detection, A. Hollaender, Ed., Vol. 4, (1976) pp. 129; 3Mutation Res 72, 447 (1980); 4Mutation Res 59, 61 (1979).
对三只雌性大鼠进行 SYBR Safe DNA 凝胶染料(0.5X TBE 稀释)单剂量口服给药,限定剂量为 5,000 mg/kg,无死亡或毒性症状。针对胖头鱼的水生生物毒性研究也证实了 0.5X TBE 中的 SYBR Safe DNA 凝胶染料无毒性 (LC50 >750 mg/L)。下表中列出了两项口服毒性研究的汇总数据。
分析 | 方法 | 结果 |
---|---|---|
水生生物毒性‡ | 按照加利福尼亚州法规第22章针对胖头鱼进行急性毒性筛选 | 对水生生物无危害或毒性 |
口服毒性§ | EPA 急性口腔毒性测试 OPPTS 870.1100 | LD50 > 5000 mg/kg |
‡ 由位于加利福尼亚州圣地亚哥的 AMEC 地球与环境圣地亚哥生物分析实验室完成。
§ 由位于加利福尼亚州赫拉克勒斯的 Northview Pacific Laboratories, Inc. 完成。
基于全面的环境安全测试,根据美国联邦法规(资源保护及恢复法案(RCRA)),SYBR Safe DNA 凝胶染料不属于有害废物。SYBR Safe DNA 凝胶染料符合净水法和国家污染物排放消减系统(NPDES)的规定。
根据环境保护署(EPA)的指导原则,SYBR Safe DNA 凝胶染料不属于腐蚀性、易燃性或反应性物品。
分析‡ | 方法 | 结果 |
---|---|---|
腐蚀性 | EPA 150.1 | 无腐蚀性(pH = 8.25) |
腐蚀性(Corrositex 分析) | DOT-E 10904 | 2 类非腐蚀性 |
易燃性 | EPA 1010 | 不易燃 (< 212°F) |
物种反应性 | EPA 9010B/9030A | 无反应性 |
‡ 所有测试均由位于加利福尼亚州圣地亚哥的 AMEC 地球与环境圣地亚哥生物分析实验室完成。
按照国家污染物排放消减系统(NPDES)的检测指南,SYBR Safe DNA 凝胶染料与 0.5X TBE 缓冲液之间无明显差异。
检测项目†† | SYBR Safe 染料,0.5X TBE 稀释 | 0.5X TBE |
---|---|---|
pH (150.1) | 8.45 | 8.48 |
总氰化物(335.2) | 未检出 | 未检出 |
化学需氧量(COD;410.1) | 7020 | 6840 |
氨态氮(350.1) | 253 | 248 |
总有机碳(415.1) | 2480 | 2360 |
总酚化物 (420.1) | 未检出 | 未检出 |
有机氯农药和多氯联苯(608M) | 未检出 | 未检出 |
半挥发性有机物(625) | 未检出 | 未检出 |
挥发性有机物(624) | 未检出 | 未检出 |
优先级污染重金属(Sb、As、Be、Cd、Cr、Cu、Pb、Hg、Ni、Se、Ag、Tl、Zn)(EPA 200.7/200 系列) | 未检出 | 未检出 |
††所有测试均由位于华盛顿州凯尔索的 Columbia Analytical Services,Inc. 完成。所使用方法见美国联邦法典 (CFR) 第 40 章第 136 节。
对于有机污染物含量, 0.5X TBE 稀释的 SYBR Safe DNA 凝胶染料与单独的 0.5X TBE 缓冲液之间无差异。对于下列有机化合物检测,两份样品均为阴性结果。
有机氯农药和多氯联苯 (608M)‡‡ | ||||
---|---|---|---|---|
α-BHC | β-BHC | γ-BHC | δ-BHC(六氯化苯) | 七氯 |
艾氏剂 | 七氯环氧 | 硫丹 I | 狄氏剂 | 4,4'-DDE |
异狄氏剂 | 硫丹 II | 4,4'-DDD | 乙醛异狄氏剂 | 硫丹硫酸盐 |
4,4'-DDT | 毒杀芬 | 氯丹 | 多氯联苯 1016 | 多氯联苯 1221 |
多氯联苯 1232 | 多氯联苯 1242 | 多氯联苯 1248 | 多氯联苯 1254 | 多氯联苯 1260 |
乙苯 | 三溴甲烷 | 1,1,2,2,-四氯乙烷 | 1,3-二氯苯 | |
挥发性有机物(624)‡‡ | ||||
氯甲烷 | 氯乙烯 | 溴甲烷 | 氯乙烷 | 三氯氟甲烷 |
1,1-二氯乙烯 | 二氯甲烷 | 反式-1,2-二氯乙烯 | 1,1-二氯乙烷 | 氯仿 |
1,1,1-三氯乙烷(TCA) | 四氯化碳 | 苯 | 1,2-二氯乙烷(EDC) | 三氯乙烯(TCE) |
1,2-二氯丙烷 | 溴二氯甲烷 | 2-氯乙基乙烯醚 | 反式-1,3-二氯丙烯 | 甲苯 |
顺式-1,3-二氯丙烯 | 1,1,2-三氯乙烷 | 四氯乙烯(PCE) | 二溴氯甲烷 | 氯苯 |
1,4-二氯苯 | 1,2-二氯苯 | 丙烯醛 | 丙烯腈 | |
半挥发性有机物(625)‡‡ | ||||
N-亚硝基二甲胺 | 双(2-氯乙基)醚 | 酚 | 2-氯酚 | 双(2-氯异丙基)醚 |
六氯乙烷 | N-亚硝基二丙胺 | 硝基苯 | 异佛乐酮 | 2-硝基酚 |
2,4-二甲基苯酚 | 4-硝基酚 | 2,4-二氯苯酚 | 1,2,4-三氯苯 | 萘 |
六氯丁二烯 | 4-氯-3-甲基苯酚 | 六氯环戊二烯 | 2,4,6-三氯苯酚 | 2-氯萘 |
苊烯 | 邻苯二甲酸二甲酯 | 2,6-二硝基甲苯 | 苊 | 2,4-二硝基酚 |
双(2-氯乙氧基)甲烷 | 2,4-二硝基甲苯 | 芴 | 邻苯二甲酸二乙酯 | 2-甲基-4,6-二硝基酚 |
N-亚硝基二苯基胺 | 4-溴联苯醚 | 六氯苯 | 五氯酚 | 菲 |
蒽 | 邻苯二甲酸二正丁酯 | 荧蒽 | 联苯胺 | 芘 |
邻苯二甲酸甲苯基丁酯 | 3,3'-二氯联苯胺 | 苯并(a)蒽 | 屈 | 双(2-乙基己基)邻苯二甲酸二酯 |
邻苯二甲酸二正辛酯 | 苯并(b)荧蒽 | 苯并(k)荧蒽 | 苯并(a)芘 | 茚并(1,2,3-cd)芘 |
二苯并(a,h)蒽 | 苯并(g,h,I)苝 | 1,2-二苯肼 | 2,3,7,8-四氯二苯并二恶英 | 4-氯二苯醚 |
‡‡ 分析样品为 0.5X TBE 和 0.5X TBE + 1X SYBR Safe DNA 凝胶染料;两种样品均未检测出上表所列化合物。*该测试由位于华盛顿州凯尔索的 Columbia Analytical Services, Inc. 完成。所使用方法见美国联邦法典 (CFR) 第 40 章第 136 节。
SYBR Safe 核酸染料的最大荧光激发波长为 280 nm 和 502 nm,最大发射光波长为 530 nm。SYBR Safe 染料与核酸结合后,经染色的 DNA 可通过配备有紫外光或 470 nm 至 530 nm 之间激发光源的成像系统进行观察。
下表列出了适用于特定凝胶成像系统的推荐滤光片。如果您的系统未列出,请联系制造商获取推荐信息。请注意,SYBR Safe DNA 凝胶染料的激发和发射光谱与 SYBR Green I、SYBR Green II 和 SYBR Gold 染料以及荧光素(FITC)极为相似。因此,亦可使用适用于这些染料的滤光片。使用Safe Imager 蓝光透射仪时,无需再单独使用滤光片,仪器内提供的琥珀色滤光片具有该功能。
仪器 | 制造商 | 激发光源 | 发射滤光片 |
---|---|---|---|
FCR-10 | Polaroid® | UV | #3-4218 |
AlphaImager | Alpha Innotech | 302 nm | SYB-500 |
AlphaDigiDoc RT | Alpha Innotech | UV transilluminator | |
Shroud, camera stand | Alpha Innotech | UV transilluminator | |
DE500 or DE400 light cabinet 2.17" diam. | Alpha Innotech | UV transilluminator | SYB-100 |
DE500 or DE400 light cabinet 2" diam. | Alpha Innotech | UV transilluminator | SYB-500 |
VersaDoc Imaging Systems | Bio-Rad | Broadband UV | 520LP |
Molecular Imager FX Systems | Bio-Rad | 488 nm | 530 DF 30 |
Gel Doc Systems | Bio-Rad | 302 nm | 520DF30 (#170-8074)† |
Typhoon 9400/9410 | GE Healthcare | 488 nm | 520 BP 40 |
Typhoon 9200/9210/8600/8610 | GE Healthcare | 488 nm | 526 SP |
FluorImager | GE Healthcare | 488 nm | 530 DF 30 |
Storm | GE Healthcare | Blue (fluorescence mode) | |
ImageMaster VDS-CL | GE Healthcare | Transmission | UV Low |
UltraCam/gel imager | Ultra-Lum | UV | Yellow Filter (#990-0804-07)† |
Omega Systems | Ultra-Lum | UV | 520 nm |
FOTO/Analyst Express/Investigator/Plus/Luminary | Fotodyne | UV | Fluorescent Green (#60-2034)† |
FOTO/Analyst Express/Investigator/Plus/Luminary | Fotodyne | UV | Fluorescent Green (#62-4289)† |
FOTO/Analyst Minivisionary | Fotodyne | UV | Fluorescent Green (#62-2535)† |
FOTO/Analyst Apprentice | Fotodyne | UV | Fluorescent Green (#60-2056)† |
Fuji Fla-3000 | FUJI Film | 473 nm | 520LP |
BioDocIt/AC1/EC3/BioSpectrum | UVP | 302 nm | SYBR Green (#38-0219-01)† 或 SYBR Gold (#38-0221-01)† |
Gel Logic | Kodak | UV 535 | 535 nm WB50 |
Mini BIS/Mini BIS Pro | DNR Bioimaging | UV 320 | 黄色 |
Compact BIS | DNR Bioimaging | UV 320 | 橙色 |
Syngene Instruments | Syngene | UV | 500–600 nm shortpass filter |
†各个制造商可提供的可选滤光片
一些研究机构和市政当局已批准可将 Invitrogen SYBR Safe DNA 凝胶染料直接排放到其废水系统中。但是,各地处置法规各不相同。有关处置指南,请联系您相关的安全办公室或当地市政当局。
在由授权许可的独立检测实验室进行的诸多测试中, SYBR Safe DNA 凝胶染料几乎没有遗传毒性,并且没有急性毒性。该染料不属于美国联邦法规所规定的危险废物。尽管如此,使用该试剂时仍然建议按照日常实验室安全操作规范。
所有 Invitrogen SYBR 染料都具有相似的光谱特性,但具有不同的化学组成。SYBR Safe DNA 凝胶染料经特殊开发设计,作为更为安全的溴化乙锭(EB)替代物。Invitrogen SYBR Green I 核酸凝胶染料是一种针对 dsDNA 的超灵敏染料, Invitrogen SYBR Green II RNA 凝胶染料是一种针对 RNA 和 ssDNA 的高灵敏度染料。所有 SYBR 染料均可使用 Invitrogen Safe Imager 蓝光透射仪得到最佳激发。
可以。融化琼脂糖时,只需简单地用 SYBR Safe DNA 凝胶染液替换缓冲液即可。如果使用 10,000X SYBR Safe DNA 凝胶染料浓缩液,则在琼脂糖凝胶缓冲液中 (如 1X TBE 或 1X TAE) 以 1:10,000 的比例进行稀释,然后向琼脂糖粉末中加入缓冲液/染色液。琼脂糖/SYBR Safe DNA 凝胶染料混合物可在微波炉中进行短暂加热。
SYBR Safe DNA 凝胶染料的 1X 溶液中染料含量低于 1 ppm。
水和 70% 乙醇可去除洒出的大部分染料。对于持久性染料,可使用漂白剂。在暗室中使用手持式紫外灯检查是否有任何剩余的染料。
可使用 蓝光透射仪 (如 Invitrogen Safe Imager 或常规紫外透射仪) 观察经 SYBR Safe DNA 凝胶染料染色的 DNA。如果您接下来计划使用 DNA 进行分子克隆,请避免将经 SYBR Safe 染色的 DNA 暴露于紫外光下。
与紫外光不同,蓝光对 DNA 损伤较小,因此对您的 DNA 样本来说更安全,对 DNA 样本更好。使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料和Safe Imager蓝光透射仪,与使用溴化乙锭(EB)染色并暴露于紫外光下相比,DNA 克隆效率更高。
使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料染色的条带可在 300 nm 透射仪上观察到。但是,使用 CCD 或胶片相机和 UV 兼容的发射滤光片对凝胶进行成像,可获得最佳检测结果。紫外灯泡可能还会发射一些红外光;如果您的相机镜头没有专门涂层以阻隔红外光,则需要使用红外滤光片来防止凝胶后面的紫外光灯泡出现模糊图像。 如需获得最佳检测效果并提高安全性,请使用Safe Imager 蓝光透射仪。
Invitrogen SYBR Safe 拍照滤光片可直接安装在 Polaroid® 相机镜头前面,适用于使用 Polaroid® B&W film (#667) 对凝胶进行成像。
请参考"使用 SYBR Safe 核酸染料的滤光片推荐"。请注意,SYBR Safe DNA 凝胶染料的激发和发射光谱与 SYBR Green I、SYBR Green II 和 SYBR Gold 染料以及荧光素(FITC)极为相似。因此,亦可使用适用于这些染料的滤光片。 当使用 Safe Imager 蓝光透射仪时,无需再单独使用滤光片;仪器随附的琥珀色滤光片具有该功能。
由于成像系统和发射滤光片种类太多,因此很难推荐特定的拍照设置。可根据经验确定适合的拍照曝光设置。凝胶成像系统的制造商可提供更详细的指南。
一些溴化乙锭(EB)滤光片允许透过 500 nm 以上的所有光。这些滤光片 (通常为黄色) 及其相关的相机设置可用于 SYBR Safe DNA 凝胶染料,通常只需对曝光或增益进行较少调整。其他溴化乙锭滤光片 (通常为红色) 仅能透过 600 nm 或以上的光;这些滤光片及其相关的相机设置不适合与 SYBR Safe DNA 凝胶染料搭配使用。
SYBR Safe DNA 凝胶染料有两个主要激发峰:紫外光区 280 nm;可见光区 502 nm。因此, 254 nm 或 300 nm 紫外光可以进行激发, 488 nm 激光、470 nm LED 和蓝色激发光 (如 Safe Imager 蓝光透射仪) 也可进行激发。最大激发波长为 502 nm;因此Safe Imager 蓝光透射仪是激发 SYBR Safe DNA 凝胶染料的最佳选择。 SYBR Safe DNA 凝胶染料的完整激发和发射光谱可在线查阅,也可查看染料随附提供的说明书。
一些衣物中使用的美白剂以及某些真菌和细菌,其荧光波长与 SYBR Safe DNA 凝胶染料相同。凝胶里或者凝胶表面如果有这些污染物就可能会产生这种“斑点”。
SYBR Safe DNA 凝胶染料与我们迄今为止测试的所有下游实验应用兼容,包括从凝胶中切割 PCR 产物、凝胶纯化、Invitrogen Gateway 和 TOPO 克隆以及限制性内切酶克隆。如果您发现有一项 SYBR Safe DNA 凝胶染料兼容的特殊实验应用,欢迎将详细信息发送至 techsupport@thermofisher.com。
使用前,在 TAE 或 TBE 缓冲液中将 SYBR Safe DNA 凝胶染料浓缩液稀释 10,000 倍。对于大多数小型凝胶, 50 mL 1X 染液已足够 (例如,使用 50 mL 缓冲液稀释 5 μL 浓缩液)。对于更大的凝胶,可按比例增加使用量,以确保整个凝胶在染色过程中被完全浸没。
SYBR Safe DNA 凝胶染料的灵敏度与溴化乙锭类似—在小型凝胶中,通过 300 nm 透射仪观察大于 200 bp 的片段,可检测大约 500 pg/ 条带。
我们建议勿重复使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料,其会显著降低灵敏度。
SYBR Safe DNA 凝胶染料可短暂进行微波加热,性能不会损失。如果进行反复或长时间微波加热,我们暂不知道会产生什么样的结果。
我们建议在存储和凝胶染色过程中将 SYBR Safe DNA 凝胶染料进行避光。然而,它足够稳定,能够承受 >30 分钟的紫外照射。实际上,需要数小时的持续紫外光或明亮的室内光照才会导致信号出现明显损失。
我们发现,当从凝胶中纯化 DNA 以供下游实验使用时,使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料和蓝光透射,相比使用 EB 和 UV,具有明显的优势。使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料和带有蓝光灯座的 Invitrogen E-Gel 成像仪系统发出的非紫外蓝光进行 DNA 切胶回收纯化,不会出现紫外诱导的切割或交联,从而显著提高克隆效率。
目前已经有多种 Invitrogen E-Gel 预制琼脂糖凝胶使用 SYBR Safe DNA 凝胶染料。这些凝胶的使用方式与含有溴化乙锭凝胶的使用方式相同。如需了解 Invitrogen E-Gel 预制琼脂糖凝胶的更多信息,请访问 www.thermofisher.com/egels。
SYBR Safe DNA 凝胶染料可轻松通过乙醇沉淀从核酸中去除。
与溴化乙锭(EB)类似, SYBR Safe DNA 凝胶染料的迁移方向与 DNA 的迁移方向相反。不过这对 SYBR Safe DNA 凝胶染料所灌制凝胶的使用没有实际影响,因为只有凝胶底部的染料浓度才会低一些。凝胶中染料浓度有多低最终取决于琼脂糖浓度、所使用的缓冲液和电泳条件(包括电压、瓦数和电泳距离等)。向电泳缓冲液中添加 SYBR Safe DNA 凝胶染料,可以部分抵消这种影响。
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