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福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)组织是疾病机制的回顾性临床研究中使用最为广泛的标本。 这些归档材料提供了一个稳定的基因表达分析核酸的重要来源,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)或微阵列分析。 PCR技术已经成为分子检测领域中较为普遍的技术,它已经提高了FFPE组织的临床应用;例如:档案组织的回顾分析能利用分子之间的联系进行治疗并得出临床结果。
FFPE标本中高质量的RNA恢复可能相当具有挑战性。 固定过程会引起除甲基组到基底外的核酸、蛋白质及共价修饰RNA之间的交联。 因此,分子是刚性的,容易受到机械剪切,并且交叉链接可能会危及RNA逆转录基板的使用。 因此,为了充分利用FFPE组织作为基因表达分析的来源,一种可靠的方法是需要通过交联矩阵来提取的RNA。
有许多因素会影响FFPE组织的RNA分离整体质量和产量。 这里有几条建议,以解决几个关键因素:
MagMAX™ FFPE核酸(NA)分离试剂盒是专为快速、高效、自动化的Total RNA分离和使用的MagMAX™磁性粒子技术的FFPE样本的DNA。 MagMAX™ FFPE 核酸(NA)试剂盒在整个过程中能在保证质量的前提下提供更快的工作流程并使用毒性较低的试剂。 相比核酸的产量和纯度,这些试剂盒帮助提供最佳的RecoverAll™过滤系统。 MagMAX™ FFPE核酸(NA)试剂盒超越了具有类似实验方案的产品,并且实现了与更长、更危险、较低吞吐量的实验方案相媲美的RNA和DNA产量。
RecoverAll™总核酸分离试剂盒的过程需要大约45分钟的动手时间,当分离RNA时可以很容易地在不到1天的时间内完成。 FFPE样本是使用二甲苯和乙醇洗涤系列进行脱蜡的。 接下来,在RNA或DNA恢复定制的孵化时间内,他们都受到了严格的蛋白酶消化。 使用快速玻璃过滤器的方法进行核酸纯化,包括一个过滤器上的核酸处理,并提供被洗脱进入水或低盐缓冲中。
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