RNA 分离方法是发现科学过程中至关重要的一步。在过去二十多年中，我们的科研人员已开发出创新且功能强大的 RNA 提取技术，以便实现更快速且更可靠的提取步骤。

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RNA 提取的目的是什么？

RNA 提取的目的是从生物样本中获得高质量的纯化 RNA，用于测序、转录组分析和传染性病原体检测等应用。

对于基于 RNA 的许多分子技术（例如，RT- 和 qRT-PCR、dPCR、RNA 测序、阵列分析、Northern 印迹分析以及 cDNA 文库构建）而言，获得高质量 RNA 是开展这些技术的第一步，通常也是很关键的一步。

有几种常用的 RNA 提取方法可作为试剂盒供您选择。RNA 提取试剂盒或 RNA 分离试剂盒的选择取决于您的样本类型、所需通量或者实验室中可用的设备。
 

RNA 提取和分离方法比较表

 有机提取粗裂解物硅胶膜离心吸附柱磁珠
描述苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液含有酶和洗涤剂的裂解缓冲液用于通过选择性硅胶结合进行 RNA 分离的离心柱和试剂用于通过选择性微珠结合进行 RNA 分离的磁珠和试剂
样本类型细菌、血液、细胞、植物样本、组织、病毒样本、酵母菌培养细胞细菌、血液、细胞、植物和动物组织、血清、酵母菌可灵活用于许多样本类型
程序通过有机提取和 RNA 沉淀实现 RNA 分离在裂解缓冲液中培养，然后添加终止液；无需分离将均质化样本上样至柱上；使用台式离心机或真空多联器洗涤并洗脱至柱上将均质化样本与磁珠混合；用洗涤缓冲液洗涤磁珠，然后将 RNA 从磁珠中洗脱出来
纯度中等不适用高最高
通量低中等到高中等到高中等到高
优点
  • 有效率的裂解和分离
  • 可扩展规格
  • 非常适合高脂和软骨样本
  • 流程非常快
  • 仅需添加型工作流程
  • 单一方案处理 10–100,000 个细胞
  • 较高的重现性和灵敏度
  • 兼容逆转录酶和 qPCR 预混液反应
  • 易于使用
  • 处理多种样本类型和体积
  • 不需要专用设备
  • 高得率和高纯度
  • 分离真正的总 RNA，包括 miRNA
  • 通过磁珠移动进行更有效率的清洗
  • 无色谱柱意味着无堵塞的风险
  • 可扩展，可处理低样本输入量和高样本输入量
  • 高得率和高效率
  • 轻松实现高通量自动化

如需了解有关这些方法的更多信息，请参阅“核酸提取”

简单来说实验室常用的 RNA 提取方法包括三种：

  • TRIzol 法为代表的有机萃取法：适用范围广，操作体系大，得率高，成本低；
  • 离心柱法：可以更有效的保护 RNA，提取纯度高，可以进行微量 RNA 的提取；
  • 磁珠分离法：操作简单，耗时短、安全无毒、对操作人员伤害小，纯度高，灵敏度高。

 

查找合适的 RNA 提取试剂盒或试剂来支持您的研究

无论您的样本类型、RNA 类型或是下游应用如何，我们的产品组合均可助力您加快研究。

按样本类型的 RNA 提取按应用程序的 RNA 提取按 RNA 类型的 RNA 提取

您的工作流程需要散装试剂或需要定制化配置？只需咨询我们的 RNA 定制服务团队！ 
 

MagMAX 磁珠法纯化试剂盒

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使用磁珠提取纯化的完整 RNA

提取高质量 RNA-5大关键要素

  1. RNA 单链易断裂，需温和提取：
    • 由于单链的 RNA 没有中间的氢键，空间结构简单，稳定性差，也容易造成突变和断裂所以提取一定要温和，除特殊要求外请勿剧烈震荡。
    • 由于 RNA 的片段大小不一，不同的实验需要，RNA 分离程序也不同，因此，选择最佳的 RNA 分离方法是非常重要的。

    2. 小赛建议，实验前请根据样本和后续实验要求选取适合的产品。尤其现阶段，不少实验室正进行病毒核酸提取实验，研究人员用的比较多的柱法提取试剂盒是PureLink™ 病毒 RNA/DNA 小量提取试剂盒②。

  2. 保证环境中不含 RNase：
    • 实验室最好设置专门的 RNA 操作区，定期消毒和清洁；
    • 操作台、离心机、移液枪、试剂等均应专用；
    • 若因条件限制无法做到专项专用，可使用 RNaseZap 喷雾③，轻轻一喷，彻底清除 RNase；
    • 使用无 RNase 的枪头，EP 管，试剂，无核酸酶水和 DEPC 水④ 最大程度减少污染源。

    3. 实验过程中经常因为 RNase 的存在导致提取实验失败，提取的 RNA 被不断降解。细胞、空气、物品表面、手汗、唾液、水等都存在大量的 RNase，为了保证分离出高质量的 RNA，控制 RNase 是关键，以下注意事项要做好：

  3. 样本组织的立即处理或冻存：

    4. 样本收集后立即液氮研磨样本加入裂解液（如 TRIzol）或直接液氮处理后 -80 ℃ 保存，若面临多变的取样环境，难以保证低温和冻存条件（如野外采集样本或突发状态下获取样本），使用 RNAlater ⑤ 将是一种较为理想的选择，迅速灭活 RNase，固定并稳定组织和细胞中的 RNA，37 °C 下可稳定 1 天, 25 °C 下 1 周, 4 °C 下 1 个月, -20 °C 下无限期。

  4. 不能忘记的低温操作：
    • 冰盒和离心机提前预冷，提取后避免 RNA 样品的反复冻融。
    • 样品或者组织不及时提取，最好在超低温条件下研磨成粉或匀浆处理，加入裂解液后 -80 °C 储存，如果样品短期储存，应放置于-20°C；长期储存，放置于 -80 °C。
    • RNA 使用次数较多的情况可提前分装至多个 EP 管中，避免反复冻融损伤 RNA，预防 RNase 污染。
    • 除了低温操作防止 RNA 降解外，核酸酶抑制剂（如 SUPERase•In™ RNase Inhibitor1⑥）的加入更能在操作中提前预防 RNase 的存在，减少上下游污染。
  5. 如何增加 RNA 产量：
    • OD260/280 比值在 1.8-2.0，代表提取的 RNA 正常，接近 2.0，纯度较好；
    • OD260/280＜1.8 时，表明有蛋白质或酚等其他有机物污染；
    • OD260/280＞2.0 时，表明可能有异硫氰酸残余；
    • OD260/280＞2.2 时，表明 RNA 已经发生降解。

    6. RNA 提取过程中，经常会遇到产量低的问题（样品裂解或匀浆不够彻底，使用的组织或者样品没有做到很好的低温保存，组织本身 RNA 含量低，使用提取方法不当等等），导致后续实验难以继续。我们可以根据 RNA OD260/280 的比值来判断问题出在哪里：

    此外，针对产量少的 RNA 可以选择核酸助沉剂（如 GlycoBlue™ Coprecipitant⑦）促进核酸的得率，加入后不仅不会影响后续的 RT-PCR，还具有增加产率和可视化功能，一举多得。

RNA 提取试剂盒和 RNA 分离试剂的资源和支持

仅供科研使用，不可用于诊断目的。