SuperScript One-Cycle cDNA 试剂盒 | Thermo Fisher Scientific

结合使用 SuperScript One-Cycle cDNA 试剂盒和 Affymetrix One-Cycle 分析，可以消除 Affymetrix GeneChip 工作流程中的停工时间，从而可以保持一致性

含有Affymetrix GeneChip工作流程中双链cDNA合成所需的所有试剂

现在，可从 Invitrogen 购得 SuperScript One-Cycle cDNA 试剂盒与 Affymetrix One-Cycle 分析试剂盒一起使用，前者包含 Affymetrix GeneChip 工作流程中合成双链 cDNA 所需的全部试剂。

含有 Invitrogen 专有的、低 RNase H 活性的 SuperScript II 反转录酶，可获得更高产率的全长 cDNA
包含进行双链 cDNA 合成所需的全部组分，包括经验证的 T7-oligo (dT) 启动子引物（表 1）
从制造商直接购买可以降低成本并保证供应。在 Affymetrix One-Cycle 工作流程中，使用经验证的 T7-Oligo (dT) 启动子引物和 SuperScript II 反转录酶可以产生更多的全长双链 cDNA ， SuperScript II 反转录酶 (RT) 是一种专有的、低 RNase H 活性的 RT，仅可以从 Invitrogen 购得（图 1）。

在获得 cDNA 产物后，可以直接按照 Affymetrix 实验方案进行操作，进行纯化和体外转录，然后，将生物素标记的 cRNA 与 Affymetrix GeneChip 芯片杂交。

获取最高产量的全长产物

分别用 SuperScript One-Cycle cDNA 试剂盒 (Invitrogen) 与 GeneChip One-Cycle cDNA 合成试剂盒 (Affymetrix) 对等量的总 HeLa RNA 进行处理，cRNA 的产量相当（图 2）。此外，采用SuperScript One-Cycle cDNA试剂盒 (Invitrogen) 和GeneChip One-Cycle cDNA合成试剂盒 (Affymetrix) 均可获得全代表性的cDNA，主要表现为GAPDH探针组的3´与5´比例相当 (图3)。

图2. SuperScript One-Cycle cDNA试剂盒具有产量一致性。 取等量的HeLa总RNA (1 μg或15 μg)，加入T7-oligo(dT) 引物，于42°C下与SuperScript II逆转录酶 (两个试剂盒均有) 孵育一小时以合成cDNA，随后进行RNA酶H介导的第二链合成。然后，对每个反应取等量的 cDNA，使用样品净化模块 (Sample Cleanup Module) 和 IVT 标记试剂盒进行处理，再在标准条件下合成 cRNA (Affymetrix)。结果表明，在标准条件下从 Affymetrix 和 Invitrogen cDNA 试剂盒获得的 cRNA 产量相等。

图3. SuperScript One-Cycle cDNA试剂盒可提供全代表性的cDNA产物。 芯片分别与1 μg和15 μg cDNA在GeneChip杂交炉 (Affymetrix) 中于45˚C、60 rpm下杂交16小时，随后采用GeneChip洗涤工作站450冲洗 (Affymetrix，使用实验方案EukGEWS2v5_450)。用 GeneChip 扫描仪 3000 7G (Affymetrix) 扫描芯片，获取 532 nm 的荧光信号。使用 GeneChip 操作软件确定每个探针的信号。在标准条件下，采用Affymetrix与Invitrogen cDNA试剂盒可获得相当的GAPDH信噪比。