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Gibco 大鼠胚胎神经干细胞
即用型神经干细胞，具有优良的增殖和多能分化潜能。每个样品瓶含有 2 x 106 个细胞，分离自妊娠期第 14 天 (E14) 的 Sprague-Dawley 大鼠胚胎皮质。
Gibco 大鼠胚胎神经干细胞试剂盒的组分
试剂盒组分如下：
- 大鼠胚胎神经干细胞（2 x 106 个细胞）
- StemPro NSC SFM培养基（KnockOut DMEM/F-12、StemPro NSC SFM 补充剂、重组碱性 FGF 蛋白和重组 EGF 蛋白）
图1.在贴壁和神经球细胞培养中扩增大鼠胚胎神经干细胞。（左）使用 StemPro NSC SFM 培养基进行贴壁细胞培养的第 3 代 (P3) 大鼠胚胎神经干细胞。（右）使用 StemPro NSC SFM 培养基进行神经球悬浮培养的 P3 大鼠胚胎神经干细胞。
Gibco 大鼠胚胎神经干细胞可在 StemPro NSC SFM 培养基中扩增至三代而不分化，超过 75% 的大鼠胚胎神经干细胞保留其未分化表型。（图2）
图2.保留未分化表型。在 StemPro NSC SFM 中培养 10 天并使用荧光偶联抗体染色的 P3 大鼠胚胎神经干细胞的荧光图像 (20X)。所有图中的细胞核用 DAPI 染色（蓝色）。大约 90% 的细胞对未分化的神经干细胞标志物巢蛋白 (Nestin) 染色呈阳性（A 图），但只有不到 10% 的细胞对分化细胞类型标志物 (B) Dcx（B 图）、GalC（C 图） 和 GFAP（D 图） 呈阳性。
大鼠胚胎神经干细胞增殖后，细胞数量从 2 x 106 个扩增至 300 x 106 个，并分化成不同的多能谱系。从培养基中去除 bFGF 后，大鼠胚胎神经干细胞自发分化为神经元、少突胶质细胞或星形胶质细胞。下图显示了在StemPro NSC SFM 中培养至 P3 的 Gibco 大鼠胚胎神经干细胞的分化潜能（图3）。
图3.Gibco 大鼠胚胎神经干细胞的分化潜能。大鼠胚胎神经干细胞在 StemPro NSC SFM 中培养至 P3，并诱导分化成神经元、少突神经胶质细胞或者星形胶质细胞的荧光图像 (20X)。分化后，细胞开始丧失未分化 NSC 标志物 Nestin 的表达（A图），但对分化细胞类型标志物 Dcx（B 图）、GalC（C 图）和 GFAP（D 图）染色呈阳性。所有图中的细胞核用 DAPI 染色（蓝色）。
1. 这些细胞分离自哪个大鼠品系和哪个组织？
神经干细胞分离自 Sprague Dawley 的皮质
2. 这些细胞来源于多少岁龄的大鼠？
这些细胞来源于妊娠期第 14 天 (E14) 的大鼠胚胎。
3. 这些细胞在第几代冻存？
这些细胞从胚胎中分离出来，未进行传代培养，并在第 0 代冻存。
4. 这些细胞能够扩增多少代？
这些大鼠神经干细胞在解冻后已经过增殖和分化潜能测试，而我们在经第 3 次传代后的 1 个样品瓶中观察到大约 3 亿个细胞。在第三次传代后我们没有继续对细胞进行扩增，但我们建议您可以尝试进一步扩增。
5. 如何确定这些细胞就是神经干细胞？
我们根据两个标准来评估细胞。其一是表达 Nestin 表型标记物，不表达 GFAP、Dcx 或 GalC 等分化表型标记物。
第二个标准是证明它们对所有三个下游谱系（如神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞）的分化潜力。
6. 这些细胞的纯度百分比是多少？
细胞纯度通过 Nestin 的神经干细胞标志物的表达来测定，并且没有分化标志物的表达。超过 75% 的细胞对 Nestin 呈阳性，分化标志物的表达低于 10%。
7. 解冻后的细胞活力如何？
解冻后，样品瓶的细胞活力应超过 50%，可提供超过 200 万个活细胞。
8. 细胞的倍增时间是多长？
细胞的倍增时间约为 20-30 小时，并且通常会随着细胞传代次数的增加而延长。
9. 细胞不附着在 CELLstart 包被培养板上，而是悬浮形成一个球体。这是否正常？
请确保用于 CELLstart 的缓冲液含有钙和镁。请查阅我们推荐的缓冲液的产品说明书。如果的确使用了合适的缓冲液，请将 CELLstart 的浓度增加到 1:50 的稀释率。如果 CELLstart 与我们推荐的缓冲液无法兼容，一些用户使用添加了 StemPro NSC-SFM 的多聚-L-鸟氨酸包被培养板获得了成功。如果您使用多聚-L-鸟氨酸，请进行过夜孵育。
10.是否可以使用 Neurobasal/B27 或 DMEM 来取代 NSC-SFM？
为了将细胞维持在神经干细胞 (NSC) 状态，我们建议使用 NSC-SFM。我们已经验证并优化了 NSC-SFM 中的培养条件，以确保这些细胞的优良生长和性能。
11.胚胎来源 NSC 与成年来源 NSC 相比如何？
与胎儿来源的 NSC 相比，成人来源的 NSC 倾向于定域化且可塑性有限。
12.这些细胞有哪些关键应用？
NSC 是非常有用的细胞资源，其不仅可用于神经科学科研，还可临床应用于治疗神经退行性疾病或神经障碍。这些细胞还可用于广泛的分化研究。
13.在哪里可以找到更详细的定向分化实验方案？
有关详细信息，请联系我们的技术支持团队。此外，我们的产品手册也可为您提供自发分化实验方案指南。所有三个谱系均可从自发分化中获得。然而，各种细胞类型（神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞）的百分比将较少，具体取决于传代次数。
14.建议使用哪种尺寸的容器进行培养？
任何形式的培养容器均可使用，例如烧瓶、6 孔板等。细胞接种密度为 5 x 104 个细胞/cm2。根据培养容器的表面积计算所需的细胞数量。示例：对于一个 60 mm 的培养皿，您将需要 5 x 104 个细胞/cm2 x 20 cm2 = 1 x 106 个细胞（总计）。
15.这些细胞是否来源于特定性别的大鼠？
Gibco 大鼠胚胎 NSC 来源于混合胚胎库；因此，这些细胞来源于两种性别的大鼠。
16.分离自皮质和海马体的 NSC 之间是否有任何区别？
皮质 NSC 包含更多的细胞混合物和不同的神经递质，因此其应用范围更广泛。从海马组织中获得的 NSC 数量较少，但细胞纯度更高，主要由少数重点放在海马体研究的人员采用。
17.与定向分化方案相比，使用自发分化方案时可获得的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的预计百分比分别是多少？
| 标志物 | 自发分化 （阳性百分比） | 定向分化 （阳性百分比） |
|---|---|---|
| Dcx（神经元） | 10 | 40 |
| GFAP（星形胶质细胞） | 30 | 40 |
| O4（少突胶质细胞） | 2 | 32 |
18.是否可以在盖玻片上培养细胞？
如果您在盖玻片上培养细胞进行免疫细胞化学染色，我们建议使用 Permanox 腔室载玻片：
- Permanox 腔室载玻片、4 孔、16 个/包（VWR、目录号 62407-330）
- Permanox 腔室载玻片、8 孔、16 个/包（VWR、目录号 62407-335）
如果您出于其他目的在盖玻片上培养细胞并需要包被，请使用此程序对盖玻片进行双层包被：
- 使用多聚-L-鸟氨酸溶液在室温下将盖玻片孵育过夜（细胞培养用水中的终浓度 = 100 mg/ml）
- 用无菌水冲洗两次
- 使用层粘连蛋白溶液在 4℃ 下对盖玻片孵育过夜（细胞培养用水中的终浓度 = 15 mg/ml）
19.这些细胞可以使用哪些相关产品？
- Temple, S. 神经干细胞的发育.Nature 414, 112–117 (2001).
- Gage, FH et al.成人神经发生的机制和功能意义.Cell 132, 645–660 (2008).
- Shin S 和 Vemuri M. 神经细胞培养实验方案（第 4 版）.(eds.Laurie Doering, in press 2009).
- Wu YY, Mujtaba T, Rao MS.从胎儿组织中分离干细胞和前体细胞.Methods Mol Biol 198:29-40 (2002).
- Bjorklund A, Lindvall O. 中枢神经系统疾病的细胞替代疗法.Nat Neurosci 3:537-44 (2000).
- Gage FH.哺乳动物神经干细胞.Science 287:1433-8 (2000).
仅供科研使用，不可用于诊断目的。