| | 您不必提取RNA来分析基因表达。采用Cells-to-CT™方法,您只需简单地将细胞裂解成裂解液(最少量的操作),然后就可用于下游的RT-PCR,而无需进行RNA纯化。 在本视频中,高级研发经理Richard Fekete博士将就与从直接裂解方法到RNA分析和RT-qPCR相关的典型问题进行简短的解答。 |
| | 在定量PCR前,可以直接在48孔、24孔或6孔培养板里直接裂解细胞吗?- 0:32 | | | | 可以用冻存的或保存在RNAlater里的细胞吗?-0:24
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| | 细胞裂解产物可以保存在-80度吗?能保存多长时间?- 0:22 | | | | 可以直接裂解未经培养的原代细胞或其它细胞系的细胞吗? - 0:32 |
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| | 可以自动化操作快速裂解步骤吗? - 0:27 | | | | 可以处理肝素或EDTA抗凝的血标本吗?- 0:27 |
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| | 这个试剂能同时提取DNA和RNA吗? - 0:26 | | | | 快速裂解法也可以用于裂解组织样品吗?- 0:20 |
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| | 怎么知道我的RT反应系统是不是被一些因子抑制? - 0:24 | | | | 怎么用裂解产物分析RNA的质量? - 0:24 |
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| | 快速裂解法适用于病毒RNA的提取吗? - 0:19 | | | | 快速裂解法适用于细菌RNA的提取吗? - 0:24
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在短视频中回答DNA/RNA分析直接裂解策略问题的是Life Technologies公司研发部的Mu Li, Ph.D Scientist III
| | 1.在定量PCR前,可以直接在48孔、24孔或6孔培养板里直接裂解细胞吗? | | | | 2.可以用冻存的或保存在RNAlater里的细胞吗? |
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| | 3.细胞裂解产物可以保存在-80度吗?能保存多长时间? | | | | 4.可以直接裂解未经培养的原代细胞或其它细胞系的细胞吗? |
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| | 5.可以自动化操作快速裂解步骤吗? | | | | 6.可以处理肝素或EDTA抗凝的血标本吗? |
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| | 7.这个试剂能同时提取DNA和RNA吗? | | | | 8.快速裂解法也可以用于裂解组织样品吗? |
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| | 9.怎么知道我的RT反应系统是不是被一些因子抑制? | | | | 10.直接裂解法对微量的样品是不是一个好的选择? |
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| | 11.怎么用裂解产物分析RNA的质量? | | | | 12.快速裂解法适用于病毒RNA的提取吗? |
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| | 13.快速裂解法适用于细菌RNA的提取吗? | | | | |
1). 已测试过哪些细胞系?
以下是与Cells-to-CT™系统兼容的细胞系简要清单:
细胞系 | 培养方式 | 种源 | 组织来源 |
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HeLa | 贴壁培养 | 人源 | 宫颈腺癌 |
HepG2 | 贴壁培养 | 人源 | 肝癌 |
Primary Hepatocytes | 贴壁培养 | 人源 | 肝脏 |
SK-N-AS | 贴壁培养 | 人源 | 脑成神经细胞 |
SK-N-SH | 贴壁培养 | 人源 | 脑成纤维细胞 |
U-87 MG | 贴壁培养 | 人源 | 脑胶质母细胞瘤 |
ME-180 | 贴壁培养 | 人源 | 宫颈表皮样癌 |
A549 | 贴壁培养 | 人源 | 肺癌 |
Jurkat | 悬浮培养 | 人源 | 急性T细胞白血病 |
PC-12 | 贴壁培养 | 褐家鼠(鼠) | 肾上腺嗜铬细胞瘤 |
PT-K75 | 贴壁培养 | 猪科动物(猪) | 鼻甲粘膜 |
NIH/3T3 | 贴壁培养 | 小家鼠(小鼠) | 胚胎成纤维细胞 |
Raji | 悬浮培养 | 人源 | B淋巴细胞 |
HEK-293 | 贴壁培养 | 人源 | 肾脏 |
COS-7 | 贴壁培养 | 绿猴(猴) | 肾脏 |
CHO-K1 | 贴壁培养 | 葛利斯鼠(仓鼠) | 卵巢 |
NCI-H460 | 贴壁培养 | 人源 | 肺 |
DU-145 | 贴壁培养 | 人源 | 前列腺 |
K562 | 悬浮培养 | 人源 | 骨髓 |
U-2 OS | 贴壁培养 | 人源 | 骨 |
Huh-7 | 贴壁培养 | 人源 | 肝脏 |
Neuro 2A | 贴壁培养 | 小家鼠 | 脑 |
BJ | 贴壁培养 | 人源 | 包皮 |
2).是否适用于我的特殊细胞系?
Cells-to-CT™系统没有理由不适用于某种细胞系。(请参阅上述已测试确认可兼容的细胞系表)。然而,由于在细胞大小和组成的差异,对于不同的细胞系,每次裂解反应的细胞的最大数量可能略有不同。可使用TaqMan Cells-to-CT™ Control Kit测试抑制效果及最小样品量.
3). 为什么说这是标准纯化方案的“绿色”替代方案?
浪费少,危险低 - 通过10个样品的比较
RNeasy™
35分钟
140 g 塑料垃圾
18 mL有害垃圾 | | Cells-to-CT™
7分钟
6.6 g 塑料垃圾
0 mL有害垃圾 |
4). 如何去除Cells-to-CT™中的痕量gDNA?
- 确保去除每个孔中的所有培养基.
- 除去培养基后,用等体积常温1X PBS冲洗.
- 确保所有反应在室温下进行(如果板子在冰上,或加入预冷的裂解溶液,则裂解反应可能不会达到室温,需要迅速移动到实验台).
- 加热裂解溶液至常温,再加入细胞.
- 让裂解反应进行8分钟.
- 在25°C下进行长达8分钟的裂解反应.