Countess II FL 全自动细胞计数 ＆ 荧光分析仪

使细胞分析工作流程趋于自动化

（参见本文中的产品列表。）

许多生物学研究需要精确和准确地测量细胞数量和存活率，然后再进行下游样本分析。Countess™ II FL 自动细胞计数仪是一个三通道（明场和两个可换荧光通道）的台式检测平台，配有先进的光学和图像分析软件，用于细胞自动计数。Countess™II FL 全自动细胞计数仪包含先进的全自动聚焦和自动光强度调整，以及多个门限设置（细胞大小、亮度、圆度、荧光强度），这个自动计数器允许研究人员分析悬浮细胞的一系列特征，包括细胞活力、细胞周期过程、凋亡过程和荧光蛋白表达能力。许多基于荧光的分子探针技术与 Countess II FL 相兼容，该仪器可以在细胞进行图像处理、流式细胞术检测和高内涵分析（HCA）工作流程之前，快速、简便地检查细胞的存活率。

降低计数差异

当使用玻璃制血球计数器及显微镜进行手动细胞计数时，经验丰富的细胞生物学家对单一样本进行多次计数的差异通常为 10% 或更高。当多位科学家对单一样本进行计数时，差异值通常超过 20%。使用自动细胞计数仪可以最大程度地消除手动计数的主观性，及用户之间的计数差异，帮助您减少时间。使用 Countess™II FL 全自动细胞计数仪，批间计数差异小于 5%，而且每批样本计数仅需 10 秒。

评估细胞存活率是日常细胞操作的关键步骤，也是准确且高效的下游处理所必需的。此外，在使用昂贵的试剂或预定核心设施时间之前，了解你的细胞样本可行性在当今快节奏的研究环境中是非常有价值的。自动细胞计数仪（Countess II FL）能够自动调整光线和焦距，获得最佳图像质量，常配合使用台盼蓝溶液，可快速评估细胞存活率。但多种荧光染料可用于显微镜及流式细胞仪上。通过 Countess II FL 全自动细胞计数 ＆ 荧光分析仪，在样本分析之前，您可直接从样本中获取细胞数量及存活率信息，简化了工作流程。

用单色荧光法检测细胞活力

根据您的实验需要，可以选择多种单色荧光活力测定方法。对于需要在固定步骤后区分活细胞和死细胞的检测，我们建议使用 LIVE/DEAD™ Fixable Dead Cell Stains 可固定死细胞染色试剂盒。LIVE/DEAD 可固定死细胞染色试剂盒只需要一个荧光通道，就可以根据细胞膜的通透性和胺基活性染料来区分活细胞和死细胞。活细胞中，染料只能与细胞表面胺基相互作用，因而荧光强度较低。而对于细胞膜受损的细胞，染料可与细胞内部及细胞表面的自由胺基相互作用而发出强烈的荧光。这种光强度的差异通常要比活细胞和死亡细胞之间的光强度差异大 50 倍，因而在配备标准 EVOS™ 光立方体的 Countess II FL 上很容易区分（图 1）。图 1B 显示使用 LIVE/DEAD 可固定死细胞染色试剂检测死细胞结果，不亚于传统台盼蓝法检测结果。

当不需要固定的死细胞指示物时，我们提供了其他几种单色荧光来鉴定细胞存活——包括细胞不渗透的碘化丙钠、乙二聚体和 SYTOX™ 核酸染色剂——这些染色剂可有选择地染色已经破坏了细胞膜的死细胞。这些不固定的核酸染色剂通常用于功能或结构荧光探针的多重分析，包括荧光蛋白表达或细胞表面标记分析。图 2展示了配备了 Cy5 EVOS 光立方体的 Countess II FL 仪器，用来计数经 SYTOX 红死细胞染色后的死亡细胞。使用明场成像可以获得细胞总数，为计算群体中活（未染色）细胞与死（SYTOX 红色染色）细胞的比例提供了一种简单的方法（图 3）。

图 1.用单色法检测细胞活力。将活细胞和乙醇杀死的 Jurkat 细胞混合（活细胞:死细胞约2:1），用台盼蓝或各种颜色的 LIVE/DEAD™ Fixable Dead Cell Stains 进行染色，然后在配备适当 EVOS™ 光立方的 Countess™ II FL 自动细胞计数器上分析。（A）使用配备 GFP EVOS Light Cube 的 Countess II FL 仪器，在 37℃条件下，使用LIVE/DEAD Fixable Green Dead Cell Stain染色剂染色 30 分钟后的细胞群进行分析。染色结果显示死亡细胞占细胞总数的 41%。（B）染色结果细胞总数是使用明场计数获得的。用台盼蓝染色试剂计数死亡细胞数可采用明场（BL）或荧光（FL）通道。LIVE/DEAD 可固定细胞死活染色试剂，是用荧光通道计数死细胞。所有染料所示的死细胞百分比一致，但与理论的 2:1 起始比（33%）不同，因为初始“活”种群中含有一些死细胞。

图 2.利用 Countess II FL 全自动细胞计数器鉴定细胞活性。将活的 Jurkat 细胞和甲醛致死的 Jurkat 细胞混合（比例约 1:1），用SYTOX™ Red 染色后，在配备 Cy5 EVOS™ Light Cube 的 Countess™II FL 上分析。使用明场计数获得细胞总数，使用荧光通道检测 SYTOX 红血球阳性细胞数，从而计算出死亡细胞的百分比。

图 3.用 SYTOX 红死细胞染色法测定细胞活力。将活的 Jurkat 细胞和甲醛致死的 Jurkat 细胞按指定比例混合，用SYTOX™ Red 染色，并使用配备 Cy5 EVOS™ Light Cube 的 Countess™ II FL 仪器进行分析（见图 2 中的示例）。

用双色荧光法检测细胞活力

通过同时测量细胞健康的两个不同参数的检测方法，可以更可靠地测定细胞活力。我们建议使用 Countess II FL 自动细胞计数器的 LIVE/DEAD™ 存活率/细胞毒性试剂盒。这种活性测定依赖于两种荧光探针：溴乙啡锭二聚体-1，它是一种高亲和力的红色荧光核酸染色，只能穿过死细胞受损的膜；还有钙调素 AM 是一种细胞全氟化酯酶底物，在进入活细胞后，可被活性酯酶水解成绿色荧光产物（钙调素）。细胞经 LIVE/DEAD 存活率/细胞毒性试剂盒染色后，在配备了 Texas Red™ 和 GFP EVOS 光立方的 Countess II FL 仪器上进行细胞活性鉴定（图 4）。活性鉴定后，细胞样本就可以在其他成像平台或流式细胞术上进行进一步的功能分析了。

图 4.用 LIVE/DEAD 存活率/细胞毒性试剂盒进行细胞活力测定。活细胞和热致死细胞混合，用LIVE/DEAD™ 存活率/细胞毒性试剂盒中提供的双色荧光法检测细胞活力和溴乙啡锭二聚体-1 染色，并在配备 GFP 和 Texas Red™ EVOS™ 光立方的 Countess™ II FL 仪上分析。柱状图显示了种群中发出绿色荧光的活细胞数量，以及发出红色荧光的死细胞数量。