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虽然细胞增殖调控为正常生长和发育提供了基础，但细胞周期失调是癌症和自身免疫性疾病的特征。使用高通量、以荧光为基础的方法，如流式细胞术是研究细胞增殖最重要的方法。增殖分析的关键是能够用荧光染料均匀地标记活细胞，然后随时间推进，细胞增殖，子代细胞荧光信号减少，通过这种子代细胞中的荧光稀释，清晰地识别不同代细胞。如果没有足够的分裂峰分辨率（图1），即使使用拟合算法，也很难使用染料稀释法准确评估定量细胞增殖数据。
细胞示踪染料羧基氟烷二乙酸酯琥珀酰亚胺酯（CFDA SE, 或CFSE）是细胞周期研究中最早和最流行的试剂之一[1]。随着无需488nm激发的CFSE替代品的发展，细胞增殖分析现在更易于与其他荧光探针进行多重分析。Filby及其同事最近发布了一种评估和比较五种市售荧光细胞追踪试剂性能的方法：三种基于琥珀酰亚胺酯的染料（Invitrogen™ CellTrace™ Violet、CellTrace™ Far Red和Affymetrix™细胞增殖染料eFluor™670）和两种亲油性染料（CellVue™ Claret和PKH26），都无需488nm激发。Jurkat细胞用于本研究，因为这些转化的异质非静态细胞，较之相对均匀的原代T和B细胞，提供了一个更具挑战性的模型系统，并且，当标记时，总是表现出广泛的荧光分布。对于每种染料，性能测试包括：
- 通过测量染料标记后的细胞的活性、强度和均匀性，来标记效率
- 需要进行细胞分选来解析分裂峰
- 染料特异性对分选群体的re-spreading error的贡献
- 非特异性的“细胞对细胞”的染料转移
- 跨细胞因子平面的对称遗传
作者发现，尽管存在源于培养过程的误差，但与亲脂性染料相比，基于琥珀酰亚胺酯的染料在细胞增殖研究中具有优势。亲脂性染料需要更高的标记浓度，以达到可比的染色强度和均匀性，它们产生更多的培养过程依赖的变化，影响峰分辨率。然而，除CellTrace Violet染料外，琥珀酰亚胺酯基染料也表现出各种次优特性。CellTrace Violet是培养过程中唯一不在细胞间转移的染料；此外，CellTrace Violet以高度对称的方式分布在细胞因子平面上，导致了很清晰的分裂峰。作者指出，“总的来说，这些数据支持我们目前的观点，即在我们所测试的染料中，CellTrace Violet仍然是通过荧光染料稀释和流式细胞术追踪任何适宜细胞类型增殖的最佳方法。”这一结论与Quah及其同事的早期研究[1]一致，他们还发现CellTrace Violet是“细胞分裂分析中最有效的CFSE替代品”。
总之，Filby和他的同事们认为，在进行细胞增殖实验时，选择标记染料以及在必要时使用细胞分选来缩小父群的宽度是关键步骤。这些步骤应确保能够很好地解析分裂峰，并且应用于数据的任何算法都将生成准确的细胞参数，包括分裂细胞的百分比和增殖指数。
图 1.用CellTrace Violet染料跟踪淋巴细胞中的细胞分裂。采集人外周血淋巴细胞并用CellTrace™ Violet dye.染色。紫色峰代表用抗人CD3抗体和白细胞介素-2（IL-2）刺激并培养7天的连续几代细胞。黑色轮廓的峰代表在无刺激条件下培养7天的细胞。在BD™ LSR II 细胞分析仪上收集数据，并使用Attune™细胞仪软件进行分析。摘自《Molecular Probes 手册》：A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies，第11版（2010年）。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。