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数十年来,从经常难以捉摸、耗时的 Western Blot 实验中获取期望的结果比较困难,而使用 Invitrogen iWestern Workflow 简化 Western Blotting 流程正好创造性地解决了这个难题。iWestern 工作流程中的每台仪器都经过精心开发,以较大限度地缩短手动操作时间,从而产生优秀的 Western Blot 结果。iWestern 工作流程的核心是四种创新型 Western Blotting 仪器,重点关注处理效率、数据重现性和操作简便性(图 1)。
图 1:iWestern 工作流程仪器组件从左至右分别是 Invitrogen Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽、Invitrogen iBind Western 装置、Invitrogen iBlot 3 Western Blot 转印装置以及 Invitrogen iBright FL 1500 成像系统。
Invitrogen Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽是一种更易使用的蛋白质电泳槽,采用并排设计,朝前的上样孔,便于上样操作,并在电泳过程中同时显示两种凝胶。由于其具有两个独立缓冲液槽,所以当只运行单块凝胶时,需要的电泳缓冲液更少。Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽可兼容 180 多种不同规格和凝胶组成的凝胶,为您的手头实验工作带来更多选择。
每种蛋白凝胶迎新装均配有 Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽(图 2)。蛋白凝胶迎新装包括两盒凝胶和进行电泳所需的缓冲液。标准 iWestern 工作流程解决方案包括 Invitrogen Bolt 凝胶迎新装,包括 Bis-Tris 电泳胶,可实现较佳的 Western Blotting 结果。您还可以通过选择凝胶组成与靶蛋白的丰度和大小以及下游应用兼容的其他蛋白凝胶迎新装来定制 iWestern 工作流程解决方案(表 1)。
图 2.配有 Mini Gel Tank 小型垂直电泳槽的蛋白凝胶迎新装。
iBlot 3 Western Blot 转印系统结合了可提供优异性能和便利性的创新型耐用设计和成熟的 iBlot 技术。iBlot 3 系统是真正的独立式即插即用系统,配备集成电源、预组装即用型转印膜组。与湿式转印所需的繁琐手动步骤相比,组装、拆卸和清理只需几分钟即可完成。
两个独立控制的转印工作舱能够在短短 3 分钟内一次性转印两块中型凝胶或四块小型凝胶。该装置拥有优秀的转印效率,配有内置冷却装置,可实现一致、可重现的转印结果。
图 3. iBlot 3 迎新套装。
Invitrogen iBind Western 装置是一种简单且无需电力的仪器,可自动化完成许多繁琐的 Western Blot 日常处理过程并提高印迹条带间的一致性。 iBind Western 装置一次可处理一块小型印迹膜,而 iBind Flex Western 装置可处理多达一块中型印迹膜、两块小型印迹或六个垂直剪切的印迹膜条。这两种系统均与显色法、化学发光法和荧光检测法兼容。
只需加入一抗、二抗和漂洗缓冲液,即可开始运行,无需看护。采用顺序侧向流动技术,不再需要托盘、计时器或摇床。整个免疫印迹过程在不到 3 小时内完成,与传统方法相比,一抗使用量可减少 80% 以内。标准 iWestern 工作流程解决方案配有 iBind 迎新套装(图 4),其包含入门所需的耗材,但如果需要增加通量,可以定制,以包含 iBind Flex 迎新套装。
图 4. iBind Flex Western 迎新套装。
Invitrogen iBright 成像系统(图 5)是一款高性能一体式仪器,用于采集图像并分析来自 Western Blot 和凝胶的条带以及数据。iBright 成像系统配备了功能强大的 910 万像素相机(图 6)、专有的 Smart Exposure™ 采集技术、易于使用的界面和自动化功能,各种不同经验水平的研究人员均可快速、轻松地进行 Western Blot 成像。
有三种 iBright 仪器可供选择——iBright CL1500 系统,iBright CL750 系统和 iBright FL1500 系统(图 5);前者用于成像和记录化学发光的 Western Blot 与染色的蛋白质和核酸凝胶,而后者拥有与前者相同的成像模式,同时还可在可见光和近红外激发和发射通道中提供 5 通道荧光印迹成像功能。标准 iWestern 工作流程解决方案包含 iBright FL1500 成像系统。
图 5. iBright FL1500 成像系统。
图 6. iBright 成像系统具有功能强大的 910 万像素相机,可用于检测敏感信号。加入经过两倍连续稀释的 HeLa 细胞裂解物(从 80 μg/泳道开始)上样,在 Invitrogen Novex Tris-甘氨酸凝胶上和运行、转印,并采用靶向 DDX3 或 Ku80 蛋白的抗体标记。然后用相应的 HRP 偶联二抗标记印迹,接着用 Thermo Scientific SuperSignal West Pico PLUS 化学发光底物进行显影,并在 Invitrogen iBright FL1500 成像系统或另一个带有稍低质量 410 万像素摄像头的成像装置上进行可视化(曝光 10 秒)。
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仅供科研使用,不可用于诊断目的。