Lipofectin 试剂 - 用于将 DNA - RNA - 寡核苷酸转染至哺乳动物细胞中和将 DNA 转染至植物原生质体中

Lipofectin 试剂适用于将 DNA (1,2)、RNA (3,4) 和寡核苷酸 (5) 转染至哺乳动物细胞中和将 DNA 转染至植物原生质体 (6,7) 中。特别建议使用 Lipofectin 进行内皮细胞转染 (8)。有关成功转染的其他细胞类型的列表，请参阅我们的细胞系数据库。Lipofectin 是阳离子脂质体 N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-n,n,n-三甲基氯化铵 (DOTMA) 和二油酰磷脂酰乙醇胺 (DOPE) 溶于膜过滤水的 1:1 (w/w) 脂质体制剂。

转染重要指南

1. 使用推荐的 DNA 和 Lipofectin 用量形成复合物。必要时进行优化。注：我们建议在 Opti-MEM I 减血清培养基（货号 31985-062）中稀释 DNA 和 Lipofectin®，然后形成复合物。
2. 在推荐的汇合度或细胞密度下转染细胞。必要时进行优化。在实验之间保持相同的接种条件。
3. 请勿在转染期间向培养基中添加抗生素，因为这会导致细胞死亡。
4. 为获得出色结果，请在不含血清的培养基中进行转染。如需要，可以在含血清的情况下转染细胞；然而，必须在无血清培养基中形成复合物。
5. 检测无血清培养基与 Lipofectin® 的兼容性，因为一些无血清制剂（例如，CD 293、293 SFM II、VP-SFM）可能会抑制阳离子脂质体介导的转染。
6. 提供了以 6 孔规格（60 mm 规格，用于稳定的哺乳动物细胞转染）转染细胞的程序。对于其他规格，根据组织培养容器的相对表面积按比例改变 DNA、Lipofectin、细胞和培养基的用量。
   

使用以下程序瞬时或稳定转染哺乳动物细胞。所有用量和体积均按每孔给出。

1. 转染前一天，在不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，确保转染时细胞处于推荐的汇合度下。



条件	细胞数	生长培养基体积	规格	转染时的汇合度
瞬时	1-2 x 105	2 mL	6 孔	40-60%
稳定	1-2 x 105	4 mL	60 mm	30%-50%



2. 对于每份转染样本，按下列步骤制备复合物：
   
   • a.  使用 100 μL 不含血清的 Opti-MEM I 减血清培养基（或其他培养基）稀释 1-5 μg DNA。
   • b.  使用前混匀 Lipofectin，然后使用 100 μL 不含血清的 Opti-MEM® I 培养基（或其他培养基）稀释 2-25 μg Lipofectin。在室温下静置 30-45 分钟。
   • c.  混合稀释的 DNA 和稀释的 Lipofectin（总体积 = 200 μL）。轻轻混匀并在室温下孵育 10-15 分钟（溶液可能变得浑浊）。
3. 将 200 μL 复合物添加至细胞中。通过来回摇动平板轻轻混匀。
4. 在 CO₂ 培养箱中于 37°C 下孵育细胞 5-24 小时。
5. 次日，将 4 mL 完全生长培养基添加至细胞中。
6. 在进行转基因表达检测前，在 CO₂ 培养箱中于 37°C 下孵育细胞 24-48 小时。

为获得较高的转染效率和较低的非特异性效应，通过改变细胞密度、DNA 和 Lipofectin® 浓度以及转染孵育时间来优化转染条件。

质量控制

用血琼脂平板、沙氏葡萄糖琼脂平板和液体巯基乙酸盐培养基检测 Lipofectin 是否不存在微生物污染，并通过用报告基因质粒转染 BHK-21 细胞对其进行功能检测。

1. Felgner, P.L., et al.(1987) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84, 7413.
2. Invitrogen (1989) Focus® 11, 13.
3. Malone, R.W., et al.(1989) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86, 6077.
4. Malone, R.W. (1989) Focus® 11, 61.
5. Chiang, M.-Y., et al.(1991) J. Biol.Chem.266, 18162.
6. Sporlein, B. and Koop, H.-U. (1991) Theor.Appl.Genet.83, 1.
7. Zhu, Z., et al., (1990) Focus® 12, 41.
8. Tilkins, M.L.(1994) Focus® 16, 117.