Search Thermo Fisher Scientific
Lipofectamine RNAiMAX 是一种专为将 siRNA 和 Stealth™ RNAi 双链体转染至真核细胞而开发的具有专利技术的制剂。Lipofectamine RNAiMAX 具有以下优势:
转染重要指南
使用此程序在 24 孔规格板中将 Stealth™ RNAi 或 siRNA 正向转染至哺乳动物细胞中(对于其他规格板,请参见第 4 页“扩大或缩小转染规模”)。在正向转染中,在孔中对细胞进行铺板,通常在次日制备并添加转染混合物。如“优化转染”(第 3 页)中所述优化转染,特别是首次转染某种哺乳动物细胞系时。所有用量和体积均按每孔给出。
注:对于某些细胞系(例如 MCF-7 或 HepG2),我们建议进行反向转染。
为在定性分析方面评估转染效率,我们建议使用 KIF11 Stealth™ Select RNAi(可通过以下网址获取:www.lifetechnologies.com/rnaiexpress;对于人类细胞,寡核苷酸 HSS105842 是良好选择)。由于有丝分裂停滞,KIF11/Eg5 被敲低的贴壁细胞在 24 小时后表现出“变圆”表型(Weil, D. 等人,Biotechniques 2002,33:1244-1248);生长缓慢的细胞可能需要 72 小时才表现出此表型。此外,还可在 48-72 小时后检测生长抑制情况。注:BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸(货号 2013)经优化可与 Lipofectamine 2000 配合使用,不建议用于 Lipofectamine RNAiMAX。
优化转染
为获得较高的转染效率和较低的非特异性效应,通过改变 RNAi 双链体和 Lipofectamine RNAiMAX 浓度来优化转染条件。对于 24 孔规格板,检测 0.6-30 pmol RNAi 双链体(最终浓度 1-50 nM)和 0.5-1.5 µL Lipofectamine RNAiMAX。对于延长时程实验(> 72 小时),考虑使用在铺板后 24 小时汇合度为 10-20% 的细胞密度。
注:所需的 RNAi 双链体浓度因双链体的效率而异。
为在不同尺寸的组织培养容器中转染细胞,按表中所示根据相对表面积按比例改变 Lipofectamine RNAiMAX、RNAi 双链体、细胞和培养基的用量。
培养容器 | 相对表面积1 | 铺板培养基体积 | 稀释培养基反向转染 | 稀释培养基正向转染 | RNAi (pmol) | RNAi (nM) | Lipofectamine RNAiMAX2 |
96 孔
|
0.2
|
100 µL
|
20 µL
|
2 x 10 µL
|
0.12-6
|
1-50
|
0.1-0.3 µL
|
48 孔
|
0.4
|
200 µL
|
40 µL
|
2 x 20 µL
|
0.24-12
|
1-50
|
0.2-0.6 µL
|
24 孔
|
1
|
500 µL
|
100 µL
|
2 x 50 µL
|
0.6-30
|
1-50
|
0.5-1.5 µL
|
6 孔
|
5
|
2.5 mL
|
500 µL
|
2 x 250 µL
|
3-150
|
1-50
|
2.5-7.5 µL
|
60 mm
|
10
|
5 mL
|
1 mL
|
2 x 500 µL
|
6-300
|
1-50
|
5-15µ
|
100 mm
|
30
|
10 mL
|
2 mL
|
2 x 1 mL
|
12-600
|
1-50
|
15-35 µL
|
¹ 表面积可能不同,具体取决于生产商。
² 如果 Lipofectamine RNAiMAX 的体积太小而无法准确分配,且不能合并稀释液,则使用 Opti-MEM I 减血清培养基将 Lipofectamine RNAiMAX 预稀释 10 倍,再分配原体积 10 倍的量(应至少为 1.0 µL/孔)。丢弃所有未使用的已稀释 Lipofectamine RNAiMAX。
我们建议使用 Lipofectamine 2000(货号 11668-027)将质粒 DNA 和 Stealth™ RNAi 或 siRNA 共转染至哺乳动物细胞,该产品在质粒转染方面有卓越的效果。如果您想要使用 Lipofectamine RNAiMAX 进行共转染,请进行反向转染(如第 2 页所示),并进行以下调整:
1:将 20 ng(对于 24 孔规格板)质粒 DNA 添加至稀释的 RNAi 双链体中。
2:添加细胞,使其汇合度在铺板后 24 小时达到 80-100%。