从 CD19⁺ 细胞中分离 CD19 Pan B

DETACHaBEAD CD19 适用于在使用 Dynabeads CD19 Pan B（货号 111.43D，未提供）分离细胞后，从 CD19⁺ 细胞中分离 Dynabeads。分离的 CD19⁺ 细胞是纯净的活细胞，没有因分离而活化，且表面没有结合 Dynabeads 和一抗。

分离原理

使用 Dynabeads CD19 Pan B 分离细胞后，将 DETACHaBEAD CD19 加入微珠结合细胞。DETACHa-BEAD CD19 试剂将使 Dynabeads 和一抗与 CD19⁺ 细胞分离。随后使用 Dynal 磁铁去除 Dynabeads，分离得到的 CD19⁺ 细胞现在可用于任何下游应用。

材料描述

DETACHaBEAD CD19 含有对 Dynabeads CD19 Pan B 上的 CD19 抗体具有特异性的多克隆抗 Fab 抗体。在定量 ELISA 检测中，未检测到与人 IgG、IgM 或 IgA 的交叉反应性。

提供的材料

• 5 mL DETACHaBEAD CD19，溶于 0.15 M 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中，pH 7.4。

备注：由于蛋白浓度高，因此通常会在 DETACHaBEAD CD19 成分中看到一些沉淀。这不会影响产品性能或质量。

所需的其他材料

不包含但执行整个方案需要的材料：

• 用于阳性分离 CD19⁺ 细胞的 Dynabeads CD19 Pan B（货号 111.43D）。
• 磁铁：有关磁铁建议，请访问 www.lifetechnologies.com/magnets-selection。
• 兼具倾斜和旋转功能的混合器。
• 试管：我们建议根据工作体积调整试管尺寸（例如，将 1.5 mL Eppendorf 试管用于小体积）。
• 培养基，例如含 1% 胎牛血清 (FBS) 的 RPMI 1640。

1. 按推荐方法（即，使用 25 μL Dynabeads CD19 Pan B）使用 Dynabeads CD19 Pan B 分离细胞后，从微珠结合细胞开始。


2. 在 250 μL 培养基中重悬微珠结合细胞（切勿使用少于 100 μL 的培养基）。


3. 对于每 25 μL 细胞分离用 Dynabeads，添加 10 μL DETACHaBEAD CD19（切勿使用少于 10 μL 的 DETACHaBEAD CD19）。


4. 在室温下孵育45分钟，同时轻轻混合。

备注：处理小体积时，为了避免细胞损失，我们建议让悬浮液始终留在管底，同时仍然混合均匀


5. 为了增强细胞的释放，用移液器吹打溶液几次，然后将试管放入磁铁约1分钟。


6. 将含有已释放细胞的上清液转移到新试管中。要获得剩余细胞，在 500 μL 培养基中洗涤微珠 2-3 次，然后合并上清液。


7. 通过在总体积为 10 mL 的培养基中重悬细胞来充分洗涤分离的细胞，然后以 400 x g 的速度离心6分钟以去除残留的任何 DETACHaBEAD 试剂。


8. 在培养基中重悬细胞并用于任何下游应用。分离的 CD19⁺ 细胞是纯净的活细胞，不含与表面结合的抗体或微珠。 

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