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是的，可以使用。如下所示，传统1X RIPA缓冲液的组分与我们的细胞提取缓冲液（货号FNN0011）非常相似。货号FNN0011经常用于制备裂解物，以与我们的ELISA和Luminex™试剂盒一起进行测试。我们还使用NP-40细胞提取缓冲液（货号FNN0021）。我们建议将货号FNN0011制成的裂解物稀释至少10倍，以便在将样品加入ELISA或Luminex™检测之前将SDS浓度降低至≤0.01％（v / v）。此建议也适用于如下所示的RIPA缓冲液中制备的RIPA裂解物。请注意，其他与如下所示的RIPA缓冲液配方不同的配方同样可用。
货号FNN0011 | 1X RIPA缓冲液 | 货号FNN0021 |
10mM Tris缓冲液，pH 7.4 | 10mM Tris缓冲液，pH 7.2 | 50mM Tris缓冲液，pH 7.4 |
100 mM NaCl | 150 mM NaCl | 250 mM NaCl |
1 mM EDTA | 5 mM EDTA | 5 mM EDTA |
1 mM EGTA | 1 mM EGTA |
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1 mM NaF | 1mM β-甘油磷酸盐或 | 50 mM NaF |
20 mM Na4P2O7 | 2.5 mM Na4P2O7 |
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2 mM Na3VO4 | 2 mM Na3VO4 | 1 mM Na3VO4 |
1% Triton™ X-100 | 1% Triton X-100 | 1% NP-40 |
10% 甘油 | 1 μg/mL 亮抑酶肽（Leupeptin） |
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0.1% SDS | 0.1% SDS |
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0.05% 脱氧胆酸钠 | 1% 脱氧胆酸钠 | 0.02% NaN3 |
注：目录货号FNN0011和FNN0021以及RIPA缓冲液应在使用前补充1 mM PMSF和蛋白酶抑制剂混合物。对于PMSF添加，我们建议在DMSO中制备0.3M原液，并加入足够的体积直至最终浓度为1mM（即每5mL缓冲液17μL）。请注意，PMSF非常不稳定，必须在使用之前添加，即使之前已添加过。对于添加蛋白酶抑制剂混合物，我们建议使用带EDTA的货号87786，其为DMSO中的100X溶液。说明书建议每5 mL缓冲液加入50μL。请注意，货号FNN0011的裂解液添加了蛋白酶抑制剂后的稳定性为4°C下24小时。
不可以。与这些试剂盒中提供的完全相同的链霉亲和素-HRP偶联物不作为单独产品提供。然而，它来自我们确实可以销售的ELISA级链霉亲和素-HRP（货号SNN2004）。请记住，每批ELISA或抗体对试剂盒中提供的链霉亲和素-HRP也因批次而有所不同。所以，如果你使用货号SNN2004或其他来源的链霉亲和素-HRP，您必须确定哪种稀释度的SNN2004最适合您。
我们的抗体配对试剂盒包括配对的、预滴定和完全优化的包被和检测抗体，3瓶重组蛋白标准品，链霉亲和素-HRP偶联浓缩物和批次特定的技术数据表。但不含缓冲液。运行抗体对ELISA所需的缓冲液试剂盒必须单独购买（货号CNB0011）。请注意，货号CNB0011中提供的5X检测缓冲液用于封闭您的ELISA微孔板，并作为标准品和样品的稀释液。
ELISA标准曲线不理想有2个主要原因。首先，可能没有遵循推荐的试剂盒标准品的溶解方法。应使用试剂盒中提供的标准稀释剂，根据标签上的指示复溶标准品。请勿使用其他稀释液。然后旋转小瓶或轻轻混匀，然后在室温下静置10分钟以确保完全溶解。这一浓缩的标准品溶液应在复溶后1小时内使用。此外，根据产品手册中提供的说明，在标准品稀释液中制备稀释液之前，应再次轻轻混匀。除非产品手册中另有说明，否则剩余标准品通常可以分装后冷冻储存。
标准曲线不理想的第二个常见原因是HRP偶联物未被正确稀释。100X HRP偶联物溶液含有50％甘油，因此非常粘稠并且难以准确地移液。以下是我们建议解决此问题的方法：首先，让HRP偶联物小瓶达到室温。然后，用干净的移液器吸头轻轻搅拌，以确保均匀。仅使用试剂盒中提供的独立的HRP偶联稀释液对其进行稀释，并按照手册中提供的稀释说明进行操作。
稀释HRP偶联物的关键是确保正确移液。您应该测试您的移液器是否准确地吸出并分配所需的偶联物 - 甘油混合物的体积。如果可能，应该校准此移液器，确保其准确可靠。当吸入粘稠的偶联物溶液时，可能需要5-10秒才能使所需的量进入移液器吸头。在将偶联物转移到合适的HRP稀释液之前，用实验室薄纸（例如，Kimwipes™薄纸）擦拭移液器吸头，确保其外部干燥，注意吸头内的内容物不能被薄纸吸收。将偶联物吸移到稀释液中，然后通过上下吹打几次来冲洗吸头。需将最后一滴偶联物移出吸头，这一点尤为重要。接下来，密封容器，并通过轻轻摇晃或上下翻转将其完全混匀。这一步至关重要，因为甘油会将偶联物快速带到试管底部。如果稀释的偶联物未充分混匀，则HRP偶联物的浓度将不是所要求的浓度。
将HRP偶联物稀释并轻轻但完全混匀后，在15分钟内使用。请记住，HRP偶联物稀释液是HRP偶联物唯一可接受的稀释液。不能保存稀释的HRP偶联物，因为HRP活性不稳定，因此不应储存和重复使用。
我们的客户使用种类多样的读板仪。其中一些不能读取高于2 AUFS（满量程的吸光度单位）的吸光度，而其他一些不能读取超过3 AUFS。如果您在室温下孵育30分钟后无法读取1或2 A450值，则可以缩短孵育时间。例如，一些客户发现20分钟是理想的孵育时间，因为他们实验室的环境温度高于~72°F（22°C）。在这种情况下，较高的温度会提高HRP驱动的ELISA反应速度。相反，如果您获得的A450值不够高，则可以相应地增加孵育时间。
以下是一些可能的原因和解决方案：
原因 | 解决方案 |
洗涤不充分和/或洗涤后排液不充分。如果含抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP的残留溶液留在孔中，可能使背景升高。
| 根据方案洗涤。验证自动洗板机的功能。在每个洗涤步骤结束时，将培养板倒置于工作台面上的吸水薄纸上，使液体完全排出，必要时用力拍打以除去残留的液体。
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显色剂在使用前暴露于光线下，导致呈现出蓝色。 | 将显色剂保存在其小瓶中，直到您准备好将其分配到板中，然后将其倒入容器中以防止设备污染小瓶。请勿用箔封微孔板。
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孵育时间过长或孵育温度过高。
| 减少孵育时间和/或降低孵育温度。 |
移液器、配液容器或带有抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP的底物溶液的污染。 | 请勿使用在加入前就呈现蓝色的显色剂。换一瓶新的显色剂。
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空白对照设置不正确。 | 在指定空白孔时遵循方案。空白孔仅含显色剂和终止液。从所有其他孔中减去空白孔结果。
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对标准品原液的稀释不正确，或用血清、培养上清液或其他液体稀释了标准品。 | 遵循有关标准品稀释的方案说明。仅使用试剂盒提供的标准品稀释缓冲液来稀释标准品。
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以下是一些可能的原因和解决方案：
原因 | 解决方案
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抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP工作溶液的 稀释不正确。 | 使抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP（100X）的溶液回温至室温，缓慢吸取，并用实验室薄纸（例如，KimwipeTM薄纸）擦拭吸头以除去过量的溶液。仅在所提供的HRP稀释液中进行稀释。
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孵化时间过长。
| 遵循方案中规定的孵育时间。 |
在37°C下孵育。 | 在方案中有说明时，在室温（~25±2°C）下进行孵育。
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以下是一些可能的原因和解决方案：
原因 | 解决方案
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检测开始时，试剂不在室温（~25 ± 2°C）条件下。
| 在开始检测之前，使试剂回温至室温。 |
组分储存不当，例如，未在2-8°C下储存。 | 完全按照方案和标签上的指示储存所有组分。
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抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP工作溶液在用于检测前，已制备超过15分钟。 | 在稀释后15分钟内使用稀释的抗兔IgG HRP或链霉亲和素-HRP。
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试剂过期。 | 收到试剂盒后立即查看有效日期，并在有效期前使用该试剂盒。
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在不正确的波长上读板。 | 使用TMB底物读取ELISA的正确波长为450nm。
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TMB溶液失去活性。 | 确保TMB溶液在分配到板孔中之前是透明的。蓝色和/或存在颗粒物质表明产品被污染。如果发现此问题，请联系技术支持。为避免污染，我们建议将检测所需的量分配到以前未使用过的一次性槽中以便移液。丢弃留在槽中的任何TMB溶液，不要将其放回瓶中。避免TMB溶液接触含有金属离子的物品。 不要用铝箔或铝涂层的Mylar™纸封板，因为这可能会在没有HRP的情况下导致显色。
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尝试使用ELISA检测未优化过的基质中的分析物。 | 使用其他样品类型时，请联系技术支持。
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孔被移液器吸头或洗涤吸头刮擦。 | 将溶液分配到微孔中和吸出微孔时要小心。
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显色液或终止液使用不当。 | 仅使用试剂盒中提供的显色液和终止液。
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将标准品稀释缓冲液加入到所有孔而不是指定的孔中。 | 遵循方案，仅将标准品稀释液添加到指定的孔和所要求的样品中，或者添加到产生高于最高标准品信号的样品中。
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使用含有叠氮化物的缓冲液，而叠氮化物与HRP不相容。
| 避免在检测中使用叠氮化物。 |
以下是一些可能的原因和解决方案：
原因 | 解决方案
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标准原液制备不当。 | 按照小瓶标签上的指示稀释冻干标准品，仅使用标准稀释缓冲液或与您的样品基质最匹配的稀释液。
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使用了来自具有不同的分析物或不同批号的不同试剂盒的试剂（冻干标准品、标准稀释液缓冲液等）。
| 切勿使用其他试剂盒中的任何组分。
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标准品移液或后续步骤中出错。 | 始终以相同的顺序将溶液快速分配到孔中。分配时，请勿触摸每个微孔上的移液器吸头。使用经过校准的移液器和与该移液器匹配的吸头。
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以下是一些可能的原因和解决方案：
原因 | 解决方案 |
标准品或样品移液或后续步骤中出错。 | 始终以相同的顺序将溶液快速分配到孔中。分配时，请勿触摸每个微孔上的移液器吸头。使用经过校准的移液器和与该移液器匹配的吸头。检查移液器吸头是否泄漏。
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重复使用吸头进行多种样品或不同试剂的移液。 | 在每一种样品或试剂转移时，使用新的吸头。
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孔被移液器吸头或洗涤吸头刮蹭。 | 将溶液分配到微孔中和吸出微孔时要小心。
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在孵育期间，液体从一个孔转移到另一个孔。 | 调整轨道摇床或检查摇床转速是否正确。小心地撕下粘性封板膜。
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分配到微孔中的材料体积不正确。 | 按照方案分配试剂。检查移液器的校准。
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用血清、培养基或其他缓冲液稀释标准品。 | 在试剂盒提供的标准品稀释缓冲液中稀释标准品。
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样品中存在颗粒或沉淀物。 | 在将溶液用于检测之前，通过离心除去任何颗粒/沉淀物。
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微孔脏污：微孔内部或底部可见碎屑。 | 检查微孔并翻转微孔板以除去碎屑。每次洗涤后，用吸水薄纸擦拭板底部。切勿将薄纸插入微孔内。
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由于外边缘孔和板中心的孔之间的温度不均匀而产生“边缘效应”。 | 在孵育期间平板密封要严，并且当要在37℃下孵育时，将平板放置在培养箱的中心。
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仅供研究使用。不可用于诊断操作。