细胞示踪与追踪支持 - 入门

请浏览这里以帮助您选择适合您的应用的产品。首先确定追踪细胞的时间，然后考虑染料结合机制。钙黄绿素染料标记均匀且对短期细胞迁移示踪效果极佳，但也会被某些类型细胞迅速外排。亲脂性的花青素染料，如DiI，DIO，和类似的染料能标记细胞膜而不破坏其功能，并且能持续更长时间，但如果发生膜融合则可能会染上其他细胞。此外，它们还会在透化过程中丢失。CellTracker™染料更有利于长期标记，其带有温和的氯甲基反应基团使之能够与细胞组分共价结合。CFDA SE也能共价地结合于细胞组分。在所有列出的试剂中，细胞内保留与否取决于细胞分裂的速率和细胞的固有特性（主动外排，膜和蛋白质的周转率等）。其中共价结合试剂比非共价结合的试剂展现出更长的保留时间。

Qtracker™试剂是最持久并且荧光强度最高的细胞示踪染料，它通过内吞作用被细胞摄入。在许多样品中它们产生的信号可以持续检测长达数周，而且信号足够强，即使在固定和通透甚至加热和石蜡处理过程中，仍然能够维持较好的荧光信号。

这是不推荐的。这些染料与DNA和RNA的结合会影响核酸的正常功能，扰乱转录和增殖。诸如CellTracker™染料或Qtracker™试剂在不严重扰乱细胞正常活动的条件下对其进行追踪。如果您仍需要使用核酸染料进行标记且细胞是哺乳动物和非血液来源的话，CellLight™ 细胞核试剂可通过瞬时转染进入细胞，在核表达蛋白上表达GFP或RFP长达数天而不影响其功能。

钙黄绿素染料扩散到细胞中，“AM”部分由细胞酯酶切割，随后可以在细胞质中观察到而未结合任何胞内成分。这意味着它们标记了“整个细胞”。但是这也意味着它们可以通过正常细胞的外排机制被泵出。有时这一过程时间很短，尤其是显示出抗药性类型的细胞，除非外排被抑制（如使用丙磺舒抑制外排）。这也意味着染料不能被醛类固定剂所交联（不同于蛋白质结合CellTracker™染料），因此染料会在固定时丢失。此外，质膜的任何干扰（例如去垢剂或胰蛋白酶处理）都会导致染料从细胞中渗漏。

Qtracker™细胞标记试剂在这方面的应用历史悠久。Qdot™探针足够明亮，使得其在多细胞增殖甚至是组织中也能被检测到。与亲脂性花青素染料不同，它们不能在细胞间转移。该试剂在固定和通透后得以保留。人们已经证明，不同于其他细胞示踪试剂，它们甚至在加热和石蜡溶剂处理后依旧存在。

亲脂性花青染料非常适合此类测定，因为它们会掺入到细胞膜中，随着细胞融合之后共用细胞膜，染料也随之共享。例如，一个细胞群体可以用DiI（橙红色）进行标记，而另一细胞群可以用DIO（绿色）进行标记，当细胞融合时合并的颜色为黄色（使用双带通滤光片成像）。

标记度（DOL）指的是每个抗体所带的荧光团数量。对于体内标记实验，DOL被限制在一个狭窄范围内，因为它对生物分布和探针清除具有显著影响。我们已经确定远红外Alexa Fluor™ 染料用于活体成像的最佳光学DOL范围是1.5至3分子每个抗体。

抗体的浓度应该在1.0-3.0 mg/mL。抗体必须不含防腐剂（叠氮化物）、含胺的缓冲液以及BSA之类的载体蛋白。

由于毛皮会引起光散射，所以推荐采用无毛小鼠（如无胸腺裸鼠（nu/nu））进行体内成像。如果无法使用裸鼠，覆盖成像区域的毛发应该用剃毛机或化学脱毛剂（如Nair™脱毛剂）去除。

注射试剂的体积根据给药途径而异。下面是25克动物的一般指导用量：

我们建议使用具有固定（不可移动）针头、28-32管径的结核菌素和胰岛素注射器（0.3或1.0 mL容量）。

推荐的起始剂量是25-50 µL。这些Qtracker™试剂应用PBS或生理盐水稀释至所需注射体积。Qtracker™试剂应该在注射之前稀释，不要储存。您需要为自己的实验模型确定最佳剂量。

推荐的起始剂量为50 µg。您需要根据实验模型来确定最佳剂量。

量子点可由410nm到低于发射光峰值波长40 nm内的光波长来激发。例如，Qtracker™ 655非靶向量子点可由410-615 nm激光激发。请谨记，产品名称上的波长指的是发射峰而不是激发峰。然而，由于量子点有吸光度的指数曲线，激发波长越低，它们的吸收效率越高，所以您最好采用最低的激光或激发波长。

染料会经由膀胱排出。膀胱信号可在染料静脉注射3分钟内检测到。

成像时间进程随注入试剂的性质而变化。血管示踪剂是在注射血管后立即显示，可在数小时后成像。偶联的全IgG抗体注射后的几个小时内到达目标位置，可成像数天。