微球支持 – 问题排查

除非微球被冻过，通常情况下聚集都是可逆的。使用之前，在水浴超声仪中对微球进行超声处理即可使之分散。如果不在活细胞体系中使用微球，还可添加低浓度的Tween™ 20或Triton™ X-100。对于蛋白标记的微球（如NeutrAvidin™微球），应使用尽可能温和的办法来分散聚集体，避免破坏蛋白构象。请注意，微球粒径越小，越容易发生聚集。

我们推荐使用水浴超声仪来分散聚集体。不要使用探头超声仪，否则会损伤微球。

各种条件都会导致微球聚集。请尽量避免微球接触以下环境：

• 结冰温度
• 微生物污染
• 高盐缓冲液
• 极端pH
  • 酸性pH会使羧基和磺酸盐基质子化，而碱性pH则会使氨基去质子化。
• 加热、过度涡旋以及过度超声处理 
  • 对于蛋白标记的微球尤其要注意

非特异性结合可通过封闭液来缓解，但微球封闭需要比市面上大多数常见封闭液更强效的封闭液。为此我们研发了BlockAid™封闭液（货号B10710）。这是一种基于蛋白的封闭液试剂，专用于偶联生物素，链霉亲和素、NeutrAvidin™生物素结合蛋白或其他蛋白的FluoSpheres™微球和TransFluoSpheres™ 微球。事实证明，BlockAid™封闭液在各类流式细胞术、显微检测以及微阵列应用中有助于减少蛋白或其他大分子包被微球的非特异性结合。

即使短时间冷冻也会导致不可逆的聚集，并可能造成微球变形，不可继续使用。

细菌污染是造成微球失效的最常见原因。我们的许多微粒附带低水平的叠氮化钠来防止细菌污染，但有时仍难免出现污染。评估细菌污染的最好方法是将微球铺到适当的生长培养基上，在72小时后检查细菌生长情况。

离心并不是收集较小微球的有效方法；即使可以看到小沉淀，仍有不少微粒残留在溶液中。对于直径低于1 µm的微珠，我们建议采用以下任一方法来洗涤：

• 错流式过滤，因为这些微粒压缩系数极高并可抵抗较高重力而无损伤风险
• 采用500 kDa MWCO截留分子量透析

注：直径大于>1 µm的微球可在1,300 rpm下离心。