重组蛋白支持 – 问题排查

溶解性问题可能由操作不当，或未使用推荐溶剂所导致。我们推荐您在打开试剂管前将冻干粉平衡至室温，并使用产品手册中推荐的缓冲液溶解蛋白产品（某些蛋白在低pH缓冲体系中溶解得更好）。请勿配制使用蛋白浓度大于1 mg/mL的浓度溶解蛋白产品。请勿剧烈震荡或混合蛋白溶液。将重新溶解的蛋白置于4°C条件下孵育过夜可能有助于解决任何可溶性问题。

如果您按照我们产品插页中的描述进行了测试，但未见到任何反应，则可能由以下几种原因导致：

• 蛋白未按照说明书推荐方式进行溶解。
• 溶解后的蛋白放置时间过长或蛋白发生沉淀。我们推荐您在重新溶解后的3-6个月内使用这些蛋白产品。
• 当重新溶解的蛋白溶液浓度低于0.1 mg/mL时，未添加载体蛋白。低于0.1 mg/mL的工作液应立即使用；我们不推荐长期储存此浓度的蛋白溶液。
• 蛋白溶液经过多次冻融循环或暴露于高温条件下。
• 使用错误类型的容器操作蛋白（某些蛋白非常容易粘附于某些塑料器皿上）。

我们的重组蛋白是以冻干粉的形式运送的。在大多数情况下管中可见蛋白粉末沉淀，有些时候粉末沉淀会脱离原位，粘附在管盖或管壁上。简短短暂的离心就可将蛋白粉末沉淀收集于管底。不过，并非所有的冻干蛋白均为肉眼可见。在大多数情况下，可见的白色粉末沉淀是原始缓冲溶液中的盐分，管中粉末沉淀多少大小与重组蛋白成份量之间可能并无直接的相关性。如果重组蛋白在冻干前使用了不含盐分的溶剂，则可能并不容易看到粉末沉淀（通常为透明）。您可通过在SDS PAGE上电泳少量的重溶蛋白重溶液体来确定蛋白的存在。一般来说，只需在丙烯酰胺胶中上样载入10 ng蛋白，就可清晰地观察到确定预期大小的蛋白条带。

如果某项分析中特定细胞因子或趋化因子的反应不是S形反应曲线，则不会提供ED50信息。举例来说，许多趋化分析的反应曲线为钟形而非S形（此时，将会有两个浓度能够产生50%的最大响应效果；一个低于最大响应浓度，另一个高于最大响应浓度）。对于某些细胞因子和趋化因子来说，如果需通过趋化分析来确定生物活性，我们通常提供一个会引起显著性反应变化的浓度。