核酸定量支持 - 入门

Qubit荧光计能够非常准确、灵敏并简便的对DNA, RNA和蛋白质进行定量。专为需要对稀少或难处理的珍贵样本进行准确定量（如实时PCR）的分子生物学实验室而设计。

点击查看更多Qubit 3.0荧光计信息

NanoDrop设备利用紫外吸收检测法，不能区分DNA，RNA，游离核苷酸和其它污染物。Qubit荧光计利用专门设计的荧光检测技术，使用Molecular Probes染料对感兴趣的生物分子进行定量。这些荧光染料只有和特定的目标分子结合时才会发出信号，即使在低浓度也是如此。

UV吸光度读数测定的是所有在260nm有吸收值的分子，包括DNA，RNA，蛋白，游离核苷酸，以及过量的盐。Qubit荧光剂仅对你感兴趣的分子进行测定，所以其读数几乎总是小于A260读数。

不可以。Qubit DNA和RNA试剂盒只能检测样本中DNA或RNA的含量。Qubit荧光计不能进行吸光度读数以提供A260/280比值或检测核酸样品中的蛋白质。这可以用NanoDrop仪器来完成。如果你的样品含有蛋白质或其他可以影响检测的污染物，应该进一步纯化。

如果你的样品中同时含有DNA和RNA，你可以使用(或同时使用)DNA和RNA Qubit试剂盒，并与用RNase或DNase处理过的样品进行比较，以获得各自DNA或RNA的准确结果。

Qubit 2.0荧光计有一个面积大、功能强的触屏，可以无缝浏览整个工作流程。它还提供自动化的数据记录和一个USB接口用于高效数据管理。

是的。这些试剂盒适用于所有Qubit荧光计。

Qubit 3.0荧光计可以在一个.csv文件中存储最多相当于1000个样本的数据。
Qubit 2.0荧光计可以在一个.csv文件中存储最多200行数据。
最早的Qubit (1.0)荧光计可以在一个.csv文件中存储最多20行数据。

不需要。但是我们建议您在每次制备一个新的工作溶液时都使用新的标准品，以保证您在标准品中使用的工作溶液和您样本中使用的工作溶液是相同的。

如果使用和样本一样的工作溶液，那么稀释后的标准品最多可以使用3小时。

通常来说，样本越干净越好。一些盐、蛋白、以及去垢剂不会影响检测，您可以查看特定的检测方案以了解哪些物质以及它们在哪些浓度下不会影响检测。

是的，对于Qubit (1.0)荧光计之后的Qubit设备是可以的。点击此处查看MyQubit检测说明。

Qubit 2.0和3.0荧光计内有两个光源——均为LED灯。它们预期的使用寿命至少是5年。

不能。如果设备被拆解或者你试图修理设备则设备的保修将失效。最好电话或邮件通知我们的技术支持团队以获取帮助。

我们将为您更换该设备。请联系我们的技术支持部门以了解详情，邮件地址LifeScience-CNTS@thermofisher.com。

使用薄壁透明的0.5 mL PCR管，例如Qubit Assay管或Axygen PCR-05-C管 (VWR, Part Number 10011-830)。其它类型的试管可能会有自发荧光，可能会干扰检测。

Qubit 2.0荧光计原装的USB为2GB，Qubit 3.0荧光计原装的USB为4GB，但是以下类型的USB也是兼容的：

• ADISK USB 1.1 32MB闪存盘
  
• Aigo USB 1.1 64M闪存盘
  
• Crucial 1G闪存盘
  
• FPT-D US5B2H01 18-in-1 USB读写卡
  
• HP 1G闪存盘
  
• IBM Portable Diskette Drive（软驱）
  
• Integral USB 2.0 2GB闪存盘
  
• Kingston DataTraveler 1GB闪存盘
  
• Kingston DataTraveler 100 2GB闪存盘
  
• Kingston DataTraveler 16GB闪存盘
  
• LACIE USB 2.0 40GB移动硬盘
  
• Lexar Media JumpDrive Secure USB 2.0 512MB闪存盘
  
• Memorex 2GB闪存盘
  
• NCP XDrivePlus MMC/SD卡
  
• Newman USB 1.1 64MB闪存盘
  
• PNY Attache USB 1.1 64MB闪存盘
  
• PNY Attache (U3) 1GB
  
• PNY Attache 2GB
  
• PNY Attache 8GB
  
• PQI MMC/SD卡
  
• RedLeaf USB 2.0 256MB闪存盘
  
• SanDisk Cruzer USB 2.0 256MB闪存盘
  
• SanDisk Cruzer Micro 2GB闪存盘
  
• SanDisk Cruzer Micro (U3) 2GB闪存盘
  
• SanDisk Cruzer Micro (U3) 4GB闪存盘
  
• SONY MICROVAULT USM256U2 USB 2.0 256MB闪存盘
  
• Transcend JF V30 4GB闪存盘

以下类型没有经过我们的R&D团队验证，但经过用户测试：

• Edge DiskGO™ 1GB USB Flash Drive Enhanced for ReadyBoost™
  
• Edge DiskGO™ 2GB USB Flash Drive Enhanced for ReadyBoost™
  
• Imation 1GB Swivel USB Flash Drive
  
• Imation 2GB Swivel USB Flash Drive
  
• Integral 1GB USB Memory Stick
  
• MARKEM 1GB USB Memory Stick
  
• Memorex 1GB TravelDrive™ USB Flash Drive
  
• Memorex 2GB TravelDrive™ USB Flash Drive
  
• PNY 1GB Attache USB Flash Drive
  
• SanDisk 2GB Cruzer Crossfire USB Flash Drive
  
• SanDisk 512MB Cruzer Micro USB Flash Drive
  
• SanDisk 2GB Cruzer Micro USB Flash Drive
  
• SanDisk 4GB Cruzer Micro USB Flash Drive (U3 function not initialized)
  
• Sony 512MB Micro Vault Tiny USB Flash Drive
  
• Sony 2GB Micro Vault Tiny USB Flash Drive
  
• Sony 1GB Micro Vault Classic USB Flash Drive
  
• Sony 4GB Micro Vault Classic USB Flash Drive
  
• X Digital Media 1GB Itty Bit USB Flash Drive
  
• X Digital Media 1GB Poker Chip USB Flash Drive
  
• X Digital Media 2GB Itty Bit USB Flash Drive

• Qubit dsDNA HS Assay: 502 nm/532 nm
• Qubit dsDNA BR Assay: 510 nm/527 nm
• Qubit ssDNA Assay: 493 nm/518 nm
• Qubit RNA HS Assay: 644 nm/673 nm
• Qubit RNA BR Assay: 644 nm/673 nm
• Qubit microRNA Assay: 498 nm/518 nm
• Qubit Protein Assay: 470 nm/570 nm

Qubit 3.0荧光计有一个面积大、功能强的触屏，可以无缝浏览整个工作流程，并可通过一个USB接口将数据导入USB存储器或直接导入电脑，实现高效的数据管理。另外，还可以进行个性化设置为仅显示常用检测，添加新检测，包括使用MyQubit检测设计工具创建的用户自定义检测，并且可以设置显示语言为您选择的语言，包括英语，法语，西班牙语，意大利语，德语，简体中文以及日语。

是的，我们在2015年清理现有库存并停产Qubit 2.0荧光计。

是的，Qubit3.0荧光计带有一个USB闪存盘和USB数据线，用于和电脑相连。

Quant-iT™ PicoGreen DNA检测试剂是最早和最通用的检测试剂。它需要最多的用户准备和计算，但是可以使用比色皿或微孔板进行测定。Quant-iT™ DNA检测试剂设计用于高通量（>20个样本）实验并且可以直接使用96孔板读取数据。Qubit检测试剂适用于低通量（<20个样本）实验，并且仅能用Qubit荧光计读取数据。Qubit荧光计拥有高度优化的算法，可以为您计算样本的浓度。这些检测试剂的性能表现是相似的。

是的，我们建议您在保持染料和样本比例的条件下减少体积。

是的，短片段可能不会很好的被染色，同时质粒DNA的检测结果可能会由于构象的变化而不同（参见后续问题）。下面是PicoGreen检测试剂的一些数据：

DNA结构对PicoGreen检测结果的影响。图中比较了来自于线性牛胸腺DNA（实心星形），噬菌体lambda DNA（实心方形），内切酶降解后的噬菌体phi X174 RF DNA（空心菱形），以及一种商品化的marker DNA的信号和来自于超螺旋pUC19 （2,686bp）DNA（空心三角）和phi X174 RF (5,836bp) DNA（空心星形）的信号。

是的。对于典型的高浓度的小抽DNA（超过50 ng/μL），可以使用Qubit DNA BR检测法。对于微量质粒或少量质粒，可以使用Qubit DNA HS检测法。但是，关于构象问题请参见下一问题。

是的。我们观察到20–30%的差别。对于不同形态的质粒DNA，我们建议使用和样本中的质粒DNA形态非常近似的标准品。欲获知创建自定义优化检测法的信息，请访问我们的网站。

PicoGreen染料和其它基于荧光定量的试剂不建议用于对染料偶联的核酸进行定量。核酸上携带的染料基团会干扰定量试剂的结合或荧光产生。

试剂盒中的缓冲液将保证合适的pH值范围，即使您的DNA处于这一pH范围之外也没关系，因为检测中所用的缓冲液体积至少超过样本体积的10倍。

是的，使用手册中有关于此项应用的说明。你将使用0 ng/μL lambda dsDNA HS标准品制备Standard #1。你将稀释一个10 ng/μL lambda dsDNA HS标准品得到Standard #2。然后你准备样本并将它们和上述的两点标准曲线进行比较。Quant-iT dsDNA BR试剂盒也可以用类似的方式使用。

有以下一些区别：

• Quant-iT™ RNA检测试剂使用一个远红外染料（激发光644nm/发射光673nm）；Quant-iT™ RiboGreen RNA检测法使用一个绿色荧光染料（激发光500nm/发射光525nm）
• Quant-iT™ RNA检测试剂对RNA更具特异性
• Quant-iT™ RNA检测试剂比Quant-iT™ RiboGreen RNA检测试剂灵敏度低

线性范围如下：

• Quant-iT™ RiboGreen RNA检测试剂：1 ng/mL至1 µg/mL
• Quant-iT™ RNA BR检测试剂：20–1,000 ng
• Quant-iT™ RNA HS检测试剂：5–100 ng

可以的，该标记物不会干扰信号。

不适用，它们不能精确定量此类片段。Quant-iT™ microRNA检测试剂盒和Qubit microRNA检测试剂盒非常适合此类应用。

可以，使用手册中有关于此应用的说明。