核酸染料、梯度标准品和分子量标准支持 - 入门

SYBR染料染色的琼脂糖胶可以用以下仪器进行观察：标准的UV紫外透射仪，应配置有紫外范围或者介于470和530 nm之间激发光波长的激光扫描仪；或者蓝光透射仪。

在使用甲醛变性胶检测RNA时，可将溴化乙锭加到上样缓冲液或RNA样本中，至终浓度为10 µg/mL，便于在电泳期间或电泳后实现RNA直接显像。将溴化乙锭加到样品或上样缓冲液中，比加到凝胶中或染胶法更好，因为凝胶中的甲醛会与溴化乙锭发生相互作用而产生荧光，导致难以识别特异性染色。据报道，10 µg/mL溴化乙锭可使检测灵敏度降低5-10%。然而，目前已知使用溴化乙锭可以保持RNA的完整性，达到良好的凝胶电泳效果，并可转移所有RNA，这些优势值得损失一些灵敏度。

是的，您可以使用溴化乙锭、SYBR Green I、SYBR Green II和SilverXpress银染试剂盒对TBE凝胶染色。采用溴化乙锭染色时，将胶侵泡在使用超纯水配制的2 µg/mL溴化乙锭溶液中20分钟。染色后使用超纯水连续冲洗3次，每次10分钟，除去未结合染料。在紫外灯下观察条带。

溴化乙锭可用于检测ssDNA、RNA和dsDNA。这种荧光染料可插入到堆叠的核酸碱基间，在590 nm处产生较强的荧光。在1块琼脂糖凝胶中，溴化乙锭可检测低至约1–10 ng/条带的dsDNA。

用于琼脂糖凝胶：

• 将溴化乙锭加到融化的琼脂糖中，至终浓度为0.5 µg/mL。不要融化已经含有溴化乙锭的琼脂糖。

用于电泳后的琼脂糖凝胶染色：

• 在不含溴化乙锭的情况下进行电泳后凝胶染色时，可将凝胶浸泡在含0.5 µg/mL溴化乙锭的水溶液中，并轻轻搅拌10-30分钟。
• 如有需要，可将凝胶置于水中摇动30分钟以脱色。对RNA凝胶染色时，应尽量缩短染色时间，并一定要进行脱色处理。

所有SYBR染料都与dsDNA、ssDNA和RNA结合，但敏感性不同。SYBR Green I用于dsDNA和ssDNA染色。SYBR Green II可以对dsDNA和ssDNA进行染色，但对RNA的敏感性更好。SYBR Gold 是在SYBR Green I和II之后开发的，是最敏感的荧光凝胶染色剂。SYBR Safe DNA凝胶染色剂是一种用于蓝光系统的致突变性更低的配方。它不像SYBR Green I和II那么敏感，但可与溴化乙锭相比。

SYTO核酸染料的结合方式尚不清楚。但是，SYTO和相关核酸染料具有以下结合特性：

1. 它们与一些溶剂结合（对盐、二价阳离子比较敏感，特别是SDS），因此，它们可能结合到DNA沟槽处。
2. 所有SYTO染料都表现出一些碱基选择性，因此，它们可能结合到DNA小沟处。
3. 通过乙醇沉淀可从核酸中去除SYTO染料；溴化乙锭和其他嵌入剂不具有此特性。同样，丁醇和氯仿提取不能从核酸中去除SYTO染料，但能够去除溴化乙锭。
4. SYTO 结合不受非离子去垢剂的影响。
5. SYTO染料不会被BrdU淬灭，因此，SYTO染料与核酸的结合方式不同于Hoechst 33342和DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）。
6. SYBR Green I对移码指示菌几乎没有致突变性，证明其不大可能是强嵌入剂。

处理方法有很多种。请联系您当地的安全办公室或市政当局咨询处理指南。

SYBR Safe™染料无致突变性、无毒性。SYBR Safe™染料与溴化乙锭在紫外范围内具有相似的敏感度（约500 pg/条带）和同等的分辨率。成像时，溴化乙锭采用标准紫外透射仪成像，而SYBR Safe™染料可在紫外光（约280 nm）且具有可见光性能的激光扫描仪或蓝光（500 nm）下观察。

所有SYBR染料都具有相似的光谱性质，但化学组成不同。SYBRSafe™ DNA凝胶染料是专门研发的溴化乙锭安全替代品。SYBR Green I是dsDNA的超灵敏染料，而SYBR Green II是RNA和ssDNA的高灵敏性染料。所有SYBR染料都适用于Safe Imager™蓝光透射仪激发观察。

可以。只需在制备融化的琼脂糖时，用SYBR Safe™ DNA凝胶染料溶液替代缓冲液。如果您使用了10,000X SYBR Safe™ DNA凝胶染料浓缩液，则使用琼脂糖凝胶缓冲液（如1X TBE或1X TAE）以1:10,000稀释浓缩染料，并将缓冲液/染料溶液加入到琼脂糖粉末中。您可使用微波炉对琼脂糖/SYBR Safe™ DNA凝胶染料混合物进行短暂加热。

1X染料溶液中的SYBR Safe™ DNA凝胶染料含量低于1ppm。

使用SYBR Safe™ DNA凝胶染料染色的DNA可使用蓝光透射仪观察，如我们的Safe Imager™ 2.0蓝光透射仪或标准紫外透射仪。如果您想要使用DNA进行克隆，应避免使用SYBR Safe™ DNA凝胶染料染色的DNA暴露于紫外光照射下。

不能。大部分深琥珀/橙色溴化乙锭滤光片在550 nm附近有临界值。SYBR Green染料在520 nm处有发射光，所以使用这种滤光片会过滤掉您所需要的数据。

与紫外光不同，蓝光可将DNA损害降至最低，对您的身体更安全，对DNA样本也更好。对于使用溴化乙锭染色并暴露于紫外光的DNA，使用SYBR Safe DNA凝胶染料和Safe Imager™蓝光透射仪可提高克隆效率。

使用SYBR Safe DNA凝胶染料染色的条带在300 nm透射仪上是肉眼可见的。但是，在您的CCD或相机上安装紫外兼容的发射滤光片，可得到最佳的凝胶成像结果。紫外灯也会发射一些红外（IR）光；如果您的相机镜头没有可阻断IR的特殊涂层，则需要安装红外滤镜，防止凝胶后面的紫外灯形成模糊图像。为了达到最佳检测和完全安全的目的，应使用Safe Imager™蓝光透射仪。

请点击此处并选择“滤光片推荐”，查看适用于SYBR Safe™ DNA凝胶染料的推荐滤光片。请注意，SYBR Safe™ DNA凝胶染料的激发和发射光谱与SYBR Green I、SYBR Green II、SYBR Gold 染料，还有荧光素（FITC）极为相似。因此，亦可使用适用于这些染料的滤光片。若使用Safe Imager™蓝光透射仪，则无需使用滤光片；仪器内提供的琥珀色滤光片即具有该功能。

SYBR Safe™ DNA凝胶染料的最大发射波长为530 nm。因此一些溴化乙锭滤光片可以透过所有500 nm以上的光。这些滤光片（通常为黄色）及其相关相机设置适用于SYBR Safe™ DNA凝胶染料，通常只需对曝光或补光稍作调整。其他溴化乙锭滤光片（通常为红色）只能透过600 nm或以上的光；这些滤光片及其相关相机设置不适用于SYBR Safe™ DNA凝胶染料。

SYBR Safe™ DNA凝胶染料有两个主要的激发峰：紫外区的280nm和可见光区的502nm。因此，254 nm或300 nm紫外激发光以及488 nm激光、470 nm LED和广泛的蓝色光源（如Safe Imager™蓝光透射仪（货号S37102））都能够有效激发。最大激发波长为502nm；因此，Safe Imager™蓝光透射仪是激发SYBR Safe™ DNA凝胶染料的最佳选择。您可通过在线方式或在染料附带的实验方案中查看SYBR Safe™ DNA凝胶染料的全部激发和发射光谱。

SYBR Safe™ DNA凝胶染料与目前我们已经检测的所有下游应用兼容，包括从凝胶上切割PCR产物、凝胶纯化、Gateway克隆、TOPO克隆和限制性内切酶克隆。如果您想将SYBR Safe™ DNA凝胶染料用于特殊应用，请将详细信息发送到我们的邮箱techsupport@lifetech.com.

这取决于您特定的凝胶、成像系统和样本/标准品类型。
以下数据适用于紫外激发下的检测数值。对于488 nm激发，SYBR Green I和SYBR Gold染料在具有488激光器的Bio-Rad Molecular Imager FX™系统上的灵敏度下限为12 pg。

*SYBR Green II的性能略优于SYBR Green I。
10%聚丙烯酰胺凝胶：

5%尿素聚丙烯酰胺凝胶：

我们强烈不建议重复使 用SYBR Safe™ DNA凝胶染料，因为这会大大降低灵敏度。

使用乙醇沉淀法可轻松去除核酸上的SYBR Safe™ DNA凝胶染料。

与溴化乙锭相似，SYBR Safe™ DNA凝胶染料与DNA的迁移方向相反。但由于只有凝胶的最底部染料浓度会在电泳过程中降低，所以使用SYBR Safe™ DNA凝胶染料制备的凝胶没有实际影响。在电泳结束后用SYBR Safe DNA凝胶染料染胶，可部分抵消这种作用。染料溶液不应该加入到电泳缓冲液中，因为这可能会导致染料在电极上分解，并将有毒的挥发性化合物释放到空气中。

YBR染料仅在很窄的pH范围内有效，约为pH 7-8。超出此范围，荧光信号将迅速消失。

TrackIt™ DNA梯度标准品的样品缓冲液中含有2种示踪染料，可作为观察凝胶电泳进程的视觉指示分子，并能指示何时达到最大分辨率。示踪染料不会遮盖梯度标准品中的DNA条带，因为染料会跑出梯度标准品中大部分DNA条带的范围。TrackIt™蓝绿色/橙黄色上样缓冲液的配方含有独特的示踪染料，二甲苯蓝FF和橙黄G。我们推荐将TrackIt™蓝绿色/橙黄色上样缓冲液用于10bp至1kb间的DNA片段。TrackIt™蓝绿色/黄色上样缓冲液含有独特的示踪染料，二甲苯蓝FF和柠檬黄。我们推荐将TrackIt™蓝绿色/黄色上样缓冲液用于100bp至10kb间的DNA片段。二甲苯蓝FF的分子量为638.6，橙黄G为452.4，柠檬黄为534.4。备注：不推荐将TrackIt™ DNA 梯度标准品用于聚丙烯酰氨凝胶，并且不推荐用于定量分析。

我们提供3种不同的缓冲液：BlueJuice™凝胶上样缓冲液、TrackIt™上样缓冲液和E-Gel样品上样缓冲液。BlueJuice™凝胶上样缓冲液可用于琼脂糖和非变性聚丙烯酰氨凝胶，包括E-Gel™琼脂糖凝胶。该缓冲液产品为10X浓度，应分别以2X和1X浓度用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰氨凝胶。TrackIt™上样缓冲液产品为6X浓度，含有方便观察迁移的示踪染料。这种上样缓冲液我们提供2种形式，TrackIt™蓝绿色/橙黄色上样缓冲液含有二甲苯蓝FF和橙黄G染料，TrackIt™蓝绿色/黄色上样缓冲液含二甲苯蓝FF和柠檬黄染料。E-Gel样品上样缓冲液为即用型1X浓度，专门用于E-Gel和E-Gel EX琼脂糖凝胶。该缓冲液含有二甲苯蓝FF和柠檬黄染料。想了解更多信息，请点击该链接。不要在上样前加热梯度标准品。若用于琼脂糖凝胶电泳，也可使用含有终浓度20 mM NaCl的TE稀释梯度标准品。1mm泳道宽度使用约0.1 µg梯度标准品。

我们的低分子量DNA Mass 梯度标准品（货号10068013）和高分子量DNA Mass梯度标准品（货号10496016）专用于定量评估凝胶中的DNA质量。

是，我们提供用于单链RNA分析的Ambion Millenium™分子量标准、Ambion Century™分子量标准和Ambion RNA梯度标准品。请点击链接查看我们的RNA分子量标准选择指南。