免疫印迹分析支持 - 入门

中型凝胶可使用以下方法转印：

• iBlot™干转系统，结合使用转印膜组
• Novex™半干转仪，最多同时转印2块中型凝胶
• Thermo Scientific™ Pierce™ Power Blotter，最多同时转印2块中型凝胶
• Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter（当前库存售尽后将停止供应）

可以，胶体蓝染料可在免疫印迹前使用。但是，为得到理想的转印效率，我们建议进行凝胶脱色处理，然后在一系列Tris 碱/甘氨酸/SDS溶液中平衡，增加染料的溶解；转印完成时，应使用甲醇处理膜，从而在之前去除染料[从而在化学发光显影前去除染料]（不需要在化学发光检测前进行脱色处理）。

可以，由于敏化溶液不含戊二醛，您可在SilverQuest™染色凝胶完全脱色后将蛋白质转印到膜上。

与预染ladder中蛋白质结合的染料带有电荷并且与蛋白是共价结合的，因此，预染ladder的转印效率几乎总是高于SDS变性蛋白。所以，预染ladder不是衡量转印成功率最好的检测手段。此外，Novex™可逆性膜蛋白质染色试剂盒可对硝化纤维素和PVDF膜上的蛋白质进行完全且可逆地[的]染色。该产品的灵敏度高于丽春红S（在10分钟内检测到蓝色条带上<10 ng的BSA），并可在5分钟内实现可逆性染色。免疫印迹检测不受染色和清除染料过程的影响，并且在某些情况下可达到更高的灵敏度。

我们建议在每次使用完海绵垫以后，用去离子水清洗3-5次，并将水从海绵垫中挤出。

建议使用iBlot™/iBlot™ 2干转系统对E-PAGE™凝胶进行转印（见E-PAGE™技术指南第27页）。请注意，该系统仅适用于E-PAGE™ 48凝胶。也可采用Novex™半干转仪（货号SD1000，第33页）进行半干转或采用半湿转法（第37页）。

采用XCell II™转印模块进行E-PAGE™凝胶转印时，最适合使用含10%甲醇的NuPAGE™转膜缓冲液。转印还原型蛋白质时，可在转膜缓冲液中加入NuPAGE™抗氧化剂，防止蛋白质再氧化。Tris-甘氨酸转膜缓冲液未经过测试，尚不清楚可达到的转印效率是多少。

iBlot™滤纸可用于转印小型或中型凝胶。在安置阴极膜块（顶部膜块）前将滤纸放在凝胶上，可在转印过程中保护凝胶的完整性。iBlot™滤纸有两种规格，可为小型和中型凝胶提供有效转印。

注意：若在转印小型或中型凝胶时不使用iBlot™滤纸，可能会使电流超过电流上限，导致电泳期间出错（错误2）。

我们不建议将iBlot™滤纸用于E-PAGE™凝胶转印。

为提高NuPAGE™凝胶上大分子蛋白[高分子量蛋白]的转印效率，我们建议在安装“三明治”前，将凝胶置于含有0.02–0.04% SDS的2x NuPAGE™转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟，然后使用含甲醇和0.01%SDS的1XNuPAGE转膜缓冲液进行转印。

可以，NuPAGE™转膜缓冲液可防止氨基酸侧链发生修饰，可兼容通过Edman降解的N端测序蛋白质。

是的，我们推荐在NuPAGE™转膜缓冲液中加入NuPAGE™抗氧化剂，提高还原型蛋白质的转印效率。

我们不建议使用碳酸盐或CAPS转膜缓冲液进行NuPAGE™凝胶转印，因为这会降低转印效率。此外，这些缓冲液的高pH环境（>pH 9）会使NuPAGE™抗氧化剂丧失功能。

我们建议，当转印1块凝胶时，在NuPAGE™转膜缓冲液中加入10%甲醇；转印2块凝胶时，加入20%甲醇。

氯丁醇可用作NuPAGE™转膜缓冲液的防腐剂，但对于蛋白质的有效转印并不是必要的。若配制缓冲液时未加入氯丁醇，则应注意缓冲液不能长期稳定保存。建议在配制后2周内用完。

Tris-甘氨酸凝胶可在CAPS缓冲液（10mM CAPS（3-环己胺，1-丙磺酸），10%甲醇，pH 11.0）中转印。

Tricine凝胶转印时，我们推荐使用含20%甲醇的1X Tris-甘氨酸转膜缓冲液。Tris-甘氨酸转膜缓冲液会干扰蛋白质测序。因此，如果您想进行蛋白质测序，我们推荐使用无甘氨酸的转膜缓冲液，如1X NuPAGE™转膜缓冲液、0.5X TBE转膜缓冲液或CAPS缓冲液（（10mM CAPS（3-环己胺，1-丙磺酸），10%甲醇，pH 11.0）。

我们推荐选择NuPAGE™转膜缓冲液用于NativePAGE™凝胶转印。PVDF是推荐使用的印迹膜，它具有良好的转印和检测效果。硝酸纤维素膜不能用于NativePAGE™凝胶转印，因为硝酸纤维素膜会与Coomassie™ G-250染料发生紧密结合，并且不能兼容用于膜脱色和蛋白质固定的含乙醇溶液。

对于IEF凝胶，我们建议使用乙酸转膜缓冲液。IEF凝胶含有5%聚丙烯酰胺，使用碱性缓冲液转印可能导致凝胶大量水解和损坏。以下实验方案中的转膜缓冲液具有较低的pH，可防止凝胶水解，对碱性蛋白质特别有效。

电泳结束后，将凝胶置于0.7%乙酸溶液（含0.7%乙酸的水溶液，pH 3.0）中平衡10分钟。预冷0.7%乙酸溶液，留作转膜缓冲液。倒序安装凝胶/膜三明治，使与膜接触的凝胶面朝向阴极（-）。这与使用SDS的传统免疫印迹相反。在传统免疫印迹中，带负电的蛋白质在转印时向阳极（+）迁移。10V恒压转印1小时。

处理IEF凝胶的提示：5%聚丙烯酰胺IEF凝胶具有粘性。当凝胶浮在平衡液中时，应将滤纸浸没在凝胶下方。当凝胶处于正确位置时，将凝胶在滤纸上提起，使凝胶贴到滤纸上。将凝胶置于滤纸上漂浮，可免去对凝胶的直接接触，并防止凝胶在到达正确位置之前粘到滤纸上。

是的，我们提供小型转印模块（货号B1000），适用于小型凝胶电泳槽。该转印模块也可用于Bolt™小型凝胶电泳槽（2014年12月31日起停产）。请注意，Bolt™小型转印模块（2014年12月31日起停产）对Bolt™小型凝胶电泳槽和小型凝胶电泳槽均适用。

Bolt™ Bis-Tris Plus凝胶也可使用XCell SureLock™ Mini Cell、iBlot™干转系统或Novex™半干转仪进行转印。

我们建议在使用完毕后用去离子水清洗转印模块。为了清除转印模块中所有的残余沉积物，可使用含50%硝酸的去离子水清洗转印模块内部区域，直至去除残余沉积物。去除沉积物后，使用去离子水清洗模块至少3次。不要将转印模块在硝酸中浸没或浸泡过夜。

注意：制备硝酸溶液时，应戴手套。

以下是我们可提供的小型转印模块替换部件：

• 切胶刀，货号EI9010
• Bolt™电泳槽基座，货号B4478640（图1，下方）
• 凝胶电泳槽，货号B4478641（图2，下方）
• Bolt™电泳槽盖，货号B4478591（图3，下方）
• 凝胶盒夹，右，货号B4478592（图4，下方）
• 凝胶盒夹，左，货号B4478593 （图4，下方）
• 电源适配器，货号ZA10001

我们建议一开始使用2块海绵垫。如果海绵垫随着使用而逐渐变薄，可增加使用数量。

我们建议使用1个转印模块转印1块凝胶。

Bolt™小型凝胶电泳槽可最多同时运行2个转印模块，每次运行最多转印2块凝胶。

由于通用的电极设计，小型转印模块可装在小型凝胶电泳槽的任意一侧。

小型转印模块专为小型凝胶电泳槽设计。该模块也适用于Bolt™小型凝胶电泳槽（2014年12月31日起停产），但不适用于XCell SureLock™ Mini Cell或其他供应商生产的电泳槽。

通常，每个小型转印模块需要200–250 mL 1X转膜缓冲液，比其他转印设备少2-4倍。

不需要。但是，我们建议在小型凝胶电泳槽中加水，以疏散转印过程中产生的热量。

我们建议使用含10%甲醇的1x Bolt™转膜缓冲液。

我们建议转印时间均为60分钟，硝化纤维素膜使用10 V电压，PVDF膜使用20V电压。另一种更快速的转印条件为电压15V、转印时间30-45分钟，但灵敏度可能会轻微降低。

除了海绵垫（货号EI9052），其他组件不单独提供。

这是完全可以接受的，因为外层溶液槽中的水只起到冷却作用。我们建议在外层溶液槽中加入去离子水，以避免小型电泳槽暴露于甲醇，因为甲醇容易损坏小型电泳槽。

我们建议在使用完毕后用去离子水清洗转印模块。为了清除转印模块中所有的残余沉积物，可使用含50%硝酸的去离子水清洗转印模块内部区域，直至去除残余沉积物。去除沉积物后，使用去离子水清洗模块至少3次。不要将转印模块在硝酸中浸没或浸泡过夜。

注意：制备硝酸溶液时，应戴手套。

海绵垫的尺寸为8 cm x 9 cm。

可以视情况而定。外层溶液槽中的溶液可疏散转印产生的热量。通常使用水。推荐的转印条件只会产生轻微的热量增加，所以无需在冰上或冷室中运行装置。但是，如果转印的是热敏性蛋白，则需要低温条件。

对于过夜转印，应在冷室中以低功率转印，防止过热。可使用10-15V的恒定电压转印过夜。根据转印效率，对转印条件进行相应调整。

丙烯酸材质破裂。每次使用转印仪后，用去离子水清洗并风干。如果必须擦拭转印仪表面，应小心不要刮坏或以其他方式损坏带有铂涂层的钛板。

Novex™半干转仪可同时转印1-2块中型凝胶、1-4块小型凝胶或1-2块E-PAGE™凝胶。

在半干转免疫印迹分析中，转膜缓冲液的浓度必须是湿转的2倍（即，2X），从而确保较小的缓冲液体积中含有足够的缓冲离子。

NuPAGE™ Bis-Tris凝胶在Novex™半干转仪中的转印效率不如在XCell II™转印模块中高。如果您决定使用Novex™半干转仪进行NuPAGE™ -Tris凝胶转印，则应使用下述实验方案以确保蛋白质的有效转印。

1. 如下所述，使用20X NuPAGE™转膜缓冲液制备100 mL的2X NuPAGE™转膜缓冲液：
   NuPAGE™转膜缓冲液（20X）10.0 mL
   NuPAGE™抗氧化剂（用于还原型样品）0.1 mL
   甲醇10.0 mL
   去离子水79.9 mL
   总体积100 mL
   如果您转印的是大分子蛋白质，请参见下方备注。

2. 在转膜缓冲液中浸泡滤纸和印迹膜。如果您在使用Novex™预切膜/滤纸三明治，则应在凝胶或膜的外侧分别使用3张滤纸（每张滤纸厚0.4 mm）。如果您未使用Novex™预切膜/滤纸三明治，则使用2张厚滤纸。

3. 将凝胶置于转膜缓冲液（中型凝胶使用100 mL，小型凝胶使用50 mL）中，放置在定轨摇床上平衡10分钟，从而去除转印液中的盐，以避免电导率和产热的增加。

4. 如下所述，在阳极板上装配凝胶/膜/滤纸三明治：
   滤纸
   滤纸
   滤纸
   滤纸
   膜
   凝胶
   凝胶
   凝胶

5. 在20 V恒定电压条件下转印30-60分钟。

备注：转印大分子量蛋白质（>100 kDa）时，可在装配三明治前，将凝胶置于含0.02-0.04% SDS 的2X NuPAGE™转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟。

我们建议使用2X NuPAGE™转膜缓冲液，在20V恒定电压下转印30-60分钟。

可以，我们建议使用含10%甲醇的2XTris-甘氨酸转膜缓冲液，在20V恒定电压下转印30-60分钟。

E-PAGE™凝胶转印的推荐方法是使用iBlot™/iBlot™ 2干转系统进行干转（见E-PAGE™技术指南第27页）。请注意，该系统仅适用于E-PAGE™ 48凝胶。也可采用Novex™半干转仪（货号SD1000，第33页）进行半干转或采用半湿转法（第37页）。

对于E-PAGE 48凝胶的半干转，我们建议使用含15%甲醇的2X NuPAGE转膜缓冲液；对于E-PAGE 96凝胶的半干转，我们建议使用无甲醇的2X NuPAGE转膜缓冲液。在25V恒定电压条件下转印30-60分钟。请参考E-PAGE™技术指南第33页。

可以，请遵循使用手册对此方法的说明。

以下是经过优化的Bio-Rad半干转设备转印方案。Tris-甘氨酸凝胶转印可使用NuPAGE™转膜缓冲液。

1. 工作转膜缓冲液：含10%甲醇、1:1,000抗氧化剂的2X NuPAGE™转膜缓冲液（Bis-Tris 50 mM和Bicine 50 mM）。如果您需要使用NuPAGE™ 20X转膜缓冲液（货号NP0006）配制100 mL工作缓冲液，则按下述配方混合：10 mL 20X转膜缓冲液、10 mL甲醇、100 µL抗氧化剂和80 mL去离子水。

2. 滤纸：三明治中经转膜缓冲液浸泡的滤纸，是半干转槽中唯一的缓冲液储层。若使用Invitrogen™预切膜/滤纸三明治，则凝胶（或膜）两侧至少需要使用3层滤纸（每张滤纸厚0.4 mm）。在组装一个凝胶/膜三明治时，在工作转膜缓冲液（按步骤1配制）中预先浸泡6张Invitrogen™滤纸（或2张厚滤纸）和1张膜，然后按以下顺序在阳极板上组装三明治：滤纸--滤纸--滤纸--膜--凝胶--滤纸--滤纸--滤纸。

3. 转印条件：我们发现在Bio-Rad™半干转仪中使用NuPAGE™转膜缓冲液进行转印的最佳条件是电压15 V、转印时间15-30分钟。其他生产商生产的半干转设备，应按照其相应的说明进行使用。

4. 转印大分子量蛋白质（≥100 kDa）时，可在组装三明治前，将凝胶置于含0.02-0.04% SDS 的2X NuPAGE™转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟。请注意，转印Tris-甘氨酸凝胶时，使用Bio-Rad Trans-Blot SD半干转槽搭配NuPAGE™转膜缓冲液的转印效率低于使用XCell II™转印模块（半湿转）搭配Tris-甘氨酸转膜缓冲液（货号LC3675）。

iBlot™凝胶转印设备已停产，我们已经推出了升级版iBlot™ 2凝胶转印设备。iBlot™转印膜块、免疫印迹检测膜块和DNA转印膜块仍可购买，但只能用于iBlot™凝胶转印设备，不可用于新型iBlot™ 2凝胶转印设备。仅iBlot™ 2耗材能够用于iBlot™ 2凝胶转印设备。

iBlot™干转系统可使用Bolt™ Bis-Tris Plus、NuPAGE™ Bis-Tris、Tris-Acetate、Tris-甘氨酸、Tricine（小型和中型凝胶规格）和E-PAGE™凝胶。

以下iBlot™转印膜块均可用于iBlot™凝胶转印设备，并且可以单独购买：

• iBlot™凝胶转印膜块可用于将蛋白质从凝胶转印到硝化纤维素膜或PVDF膜上（蛋白质印迹分析）。硝化纤维素膜或PVDF转印膜组均具有小型和标准规格。
• iBlot™DNA转印膜块可用于将DNA从凝胶转印到尼龙膜上（DNA印迹分析）。

我们建议将iBlot™转印膜块保存于室温。

iBlot™转印膜块的最短质保期是2个月。质保期为自购买之日起2-8个月。有效期印于各个膜块包装上。

PVDF膜是预活化的，可立即使用，无需任何乙醇预处理。

提供，iBlot™盖锁的货号为IB1003，iBlot™电极（1对）的货号为IB1002。请点击这里，查看电极更换说明

iBlot™干转系统已经过测试，可有效转印厚度为1 mm至3 mm的凝胶上的蛋白质。厚度大于3 mm的凝胶极少用于SDS-PAGE，因此尚未进行测试。

最好不要在标准规格的转印膜组中单独转印一块小量凝胶。尽管在大多数情况下能够实现良好的转印，但转印膜组中未与凝胶直接接触的空余空间可能使膜的整个表面发生扭曲，包括膜上与凝胶接触的部分。如果可能，最好使大于50%的膜与凝胶接触。

iBlot™干转系统转印膜块的包装塑料材质为聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET），能够回收利用。

为了最大限度地回收iBlot™转印膜块的铜网电极，我们已经与美国的一家回收中心达成了协议。为了能够制备可回收的铜电极，请遵循下列说明。

不能。转印膜组中用于带动转印的离子数量有限，使用一次即可耗尽。

理论上，可用于免疫印迹分析的所有膜均可替代iBlot™转印膜块中的膜。为了实现这种替代，应将替代膜剪切至符合凝胶大小的尺寸，并润湿膜。然后，可将替代膜放置到原始膜的上方，或用镊子小心从凝胶上移除原始膜，再放置新膜。请注意，我们仅支持iBlot™转印膜块在官方说明的指导下使用。

分子量大于150 kDa的蛋白质比小分子量蛋白质迁移更慢。因此，将大分子量蛋白质从凝胶转印到膜上需要更长的时间。我们建议使用转印时间为8-10分钟的P3程序来转印这类蛋白，以获得最佳转印结果。

为了提高转印效率，我们还建议在电泳和转印之间增加一个平衡（凝胶浸泡）步骤，并使用NuPAGE™ Novex™ 3-8% Tris-acetate凝胶进行电泳。请查看使用 iBlot™干转系统转印大分子量和小分子量蛋白质的应用指南，获取实验方案。

传统的洗脱方案是使用0.1 M甘氨酸（pH 2），用于洗脱多克隆抗体。

可以，请查看使用iBlot™7分钟转印系统对NativePAGE™ Novex™ Bis-Tris凝胶进行蛋白质印迹分析的应用指南。

iBlot™滤纸可用于转印小型或中型凝胶。在放置iBlot™阴极膜块（顶部膜块）前将滤纸放在凝胶上，可在转印过程中保护凝胶的完整性。iBlot™滤纸有两种规格，可为小型和中型凝胶提供有效转印。我们不建议将iBlot™滤纸用于E-PAGE™凝胶转印。

注意：若小型和中型凝胶转印时不使用iBlot™滤纸，可能会使电流超过电流上限，导致电泳期间出错（错误2）。

iBlot™ E-PAGE™拉片是E-PAGE™凝胶转印期间使用的一个钢片。将拉片粘贴到iBlot™阴极膜块（顶部膜块）上，在E-PAGE™凝胶除气泡过程中使用拉片将转印膜块拉向转印表面。

除气泡滚筒（De-bubbling Roller）是一种不锈钢的铝制滚筒，专用于在安装E-PAGE™凝胶转印膜块期间赶走凝胶与印迹膜之间的所有气泡。我们建议仅将除气泡滚筒用于E-PAGE™凝胶。若其他类型的凝胶使用该滚筒，可能发生延伸和撕裂。iBlot™干转系统带有除气泡滚筒，而iBlot™ 2干转系统没有。

印迹滚筒（Blotting Roller）是连接有不锈钢把手的塑料滚筒，可用于除去在放置膜块和凝胶期间凝胶与印迹膜之间的所有气泡。

兼容，iBlot™转印膜组可以兼容Li-COR™检测。

小分子量蛋白质（低于30 kDa ）比大分子蛋白质迁移更快，因此，从凝胶基质转印到膜上所需时间更短。尽管7分钟的P3程序可有效转印大多数蛋白质，但使用iBlot™设备转印小分子蛋白质所需的时间更短。我们建议使用转印时间低于5-6分钟的P3程序。请参考使用 iBlot™干转系统转印大分子量和小分子量蛋白质的应用指南。

iBlot™ 2干转系统可使用Bolt™ Bis-Tris Plus、NuPAGE™ Bis-Tris、Tris-Acetate、Tris-甘氨酸、Tricine（小型和中型凝胶规格）和E-PAGE™（仅E-PAGE™ 48）凝胶。

我们可提供iBlot™ 2凝胶转印膜块和完整的硝化纤维素膜或PVDF膜，可用于将蛋白质从凝胶转印到硝化纤维素膜或PVDF膜上（蛋白质印迹分析）。这些膜块均可单独购买。

我们建议将iBlot™ 2转印膜块保存于室温。

一般为9个月。有效期印于包装盒上。

不能。使用超过有效期的iBlot™ 2转印膜块可能会得到不理想的转印结果。

iBlot™ 2凝胶转印膜块不可冷冻，因为冷冻会破坏其中含有的凝胶基质。

PVDF膜是预活化的，可立即使用，无需任何乙醇处理。

是的，我们提供iBlot™ 2电极替换套装，货号IB28001，包含2个电触头、2个螺丝和1个圆形缓冲垫。请参考使用手册第37页的更换说明。

这是一个塑料分隔器，用于分隔顶部膜块和底部膜块。应在安装膜块之前，从顶部膜块中取出分隔器并丢弃。

注意：在某些情况下，膜可能会粘到分隔器上。如果出现这样的情况，应该用镊子取下膜并将膜放到底部膜块上方。

最好不要在标准规格的转印膜块中单独转印一块小型凝胶。尽管在大多数情况下能够实现良好的转印，但转印膜块中未与凝胶直接接触的空余空间可能使膜的整个表面发生扭曲，包括膜上与凝胶接触的部分。如果可能，最好使至少50%的膜与凝胶接触。因此，建议使用标准规格的转印膜块同时转印2块小型凝胶。

为了最大限度地回收iBlot™ 2转印膜块的铜网电极，我们已经与美国的一家回收中心达成了协议。为了能够制备可回收的铜电极，请遵循下列说明。

可以。但是，转印某些蛋白质时，可能需要稍微对转印方案（比如步骤、电压、时间等）进行优化。

分子量大于150 kDa的蛋白质比小分子量蛋白质迁移更慢。因此，将大分子量蛋白质从凝胶转印到膜上需要更长的时间。我们建议使用转印时间为8-10分钟的P3程序来转印这类蛋白，以获得最佳转印结果。

为了提高转印效率，我们还建议在电泳和转印之间增加一个平衡（凝胶浸泡）步骤，并使用NuPAGE™ 3-8% Tris-acetate凝胶进行电泳。请参考使用手册第35页的实验方案。

可以。该设备允许用户设定自定义方法。

可以。该设备的设计允许多次转印，并且对性能无影响。

不能。它们是一次性的，只能使用一次。

可以，但是结果可能不理性。

iBlot™ 2 PVDF和硝化纤维素膜可用于所有常用的检测方法，如染色、免疫检测、荧光检测等。

不能。保持膜的尺寸与转印膜块一致。这有助于确保顶部和底部膜块之间无直接接触。

不能。不要将iBlot™ 2转印膜块修剪成为适合您的凝胶的尺寸。

不兼容。不要将iBlot™转印膜块用于iBlot™ 2凝胶转印设备，也不要混淆iBlot™转印膜块和iBlot™ 2转印膜块的组件。

是的，所有传统iBlot™膜块仍可购买。您可在传统iBlot™凝胶转印设备试剂和资源中进行查找。但是，请注意，它们不适用于iBlot™ 2凝胶转印设备。

印迹滚筒（Blotting Roller）是连接有不锈钢把手的塑料滚筒，可用于除去在安装膜块和凝胶期间凝胶与印迹膜之间的所有气泡。

iBlot™滤纸可用于转印小型或中型凝胶。在安置iBlot™阴极膜块（顶部膜块）前将滤纸放在凝胶上，可在转印过程中保护凝胶的完整性。iBlot™滤纸有两种规格，可为小型和中型凝胶提供有效转印。我们不建议将iBlot™滤纸用于E-PAGE™凝胶转印。

注意：若小型和中型凝胶转印时不使用iBlot™滤纸，可能会使电流超过电流上限，导致电泳期间出现“高电流错误”。

iBlot™ 2吸收垫可吸收转印过程中膜块上形成的多余液体，并对膜块整体施加均匀的压力。在转印前将吸收垫置于组装好的iBlot™ 2膜块上方。我们建议iBlot™ 2吸收垫使用一次即丢弃。

Pierce™ Power Blotter（货号22834）由带有激活版印迹软件的Pierce™ Power Station（货号22838）和Thermo Scientific™ Pierce™ Power Blot Cassette（货号22835）组成。该系统专用于将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上快速半干转印到硝化纤维素膜或PVDF膜上。传统的免疫印迹分析技术需要转印1小时至过夜，才能获得良好的转印结果。与Thermo Scientific™ Pierce™一步转膜缓冲液结合使用时，Thermo Scientific™ Pierce™ Power Blotter只需5-10分钟即可带来等于或优于传统转印技术的转印效率，并且无需预平衡凝胶。这种蛋白质转印时间的显著缩短，是通过优化转膜缓冲液的离子强度和增加通过转印膜组的电流[amps (A)/cm2]实现的。该系统已经过验证，对常用的预制胶和自制SDS-PAGE凝胶均适用。Pierce Power Blotter也可与Towbin缓冲液一起用于标准半干转实验方案。

当Pierce™ Power Blotter与Thermo Scientific™ Pierce™一步转膜缓冲液结合使用时，可在5-10分钟内同时转印1-4块小型凝胶或1-2块中型凝胶。请注意，同时转印的凝胶必须配方相同。

当Pierce™ Power Blotter与Towbin转膜缓冲液结合使用时，可在45–60分钟内同时转印1-4块小型凝胶或1-2块中型凝胶。请注意，同时转印的凝胶必须配方相同。

可以。您可购买Pierce™ Power Stain Cassette（货号22836），插入到设备中即可激活预先加载的Thermo Scientific™ Pierce™ Power Stainer软件。

不能。蛋白质在染色期间被固定到了凝胶上，因此，不能得到最佳的免疫印迹结果。免疫印迹分析应使用未染色的凝胶。

可以。Thermo Scientific™ Pierce™ Power Station可自动识别盒子的插入并初始化正确的软件菜单系统。

不能。不可以在插入Pierce™ Power Blot Cassette时选择快速染色程序，反之亦然。

不能。每种盒子只能用于其预期使用目的；Pierce™Power Blot Cassette仅用于转印（快速蛋白质转印），Pierce™ Power Blot Cassette仅用于蛋白质染色。我们优化了表面区域，可使每种应用获得最佳结果。较小的染色盒用于染色效果更好，而较大的转印盒用于转印效果更好。

是的，Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter已停产。Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter的直接替代品是 Thermo Scientific™ Pierce™ Power Blotter（货号22834）。一步转膜缓冲液（货号84731）仍可购买。

Thermo Scientific™ Pierce™ Power Blot Cassette（货号22835）可兼容Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter。

您可购买Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter的Power Stainer升级套装。该套装包含Thermo Scientific™ Pierce™ Power Stain Cassette和一个USB闪存盘，闪存盘内附带的软件可升级Thermo Scientific™ Pierce™ G2 Fast Blotter Control Unit软件并添加染色功能。

我们提供以下免疫印迹膜：

将硝化纤维素膜置于蒸馏水或1X转膜缓冲液中，轻轻摇动5分钟进行预润湿。这样可防止膜上出现干燥点而影响转印。

我们建议用水简单清洗膜、风干、装入自封袋并保存于室温。不要将硝化纤维素膜放在冰箱中，否则膜会变成碎片。与PVDF膜不同，硝化纤维素膜绝不可以使用乙醇预润湿，否则会使膜皱缩。

我们建议将PVDF膜风干并置于自封袋中，最好将膜平放在平面上。可在-80℃下长久保存。在检测前，我们建议将膜放在乙醇中润湿几秒，然后用纯水简单冲洗以降低乙醇浓度。随后，进行正常的封闭步骤。

不能。我们不建议使用胶体蓝（G-250）染色试剂盒对膜进行染色，因为这会产生很高的背景。更好的染色方法包括：

1. Novex™可逆性膜蛋白质染料（货号IB7710）：可对硝化纤维素膜和PVDF膜上的蛋白质进行完整的可逆性染色。该产品的灵敏度高于丽春红S（在10分钟内检测到蓝色条带上<10 ng的BSA），可在5分钟内实现可逆性染色。免疫印迹检测不受染色和清除染料过程的影响，在某些情况下可达到更高的灵敏度。
2. Coomassie™（非胶体）染色：使用溶于50%甲醇的0.1% Coomassie™ Blue R-250染色5分钟，然后用50%甲醇和10%乙酸洗涤多次进行脱色。用水洗涤多次、风干并在-20℃下保存，最长可保存12个月。灵敏度约为50-100 ng。
3. SimplyBlue™ SafeStain染液。SimplyBlue™ SafeStain使用手册中有对干燥PVDF膜进行染色的实验方案，但不推荐将其用于湿润的PVDF膜或硝化纤维素膜，因为会产生较高的背景。
4. 酰胺黑染液：与Coomassie™相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
5. 丽春红S染液：与Coomassie™相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
6. 紫外透照法：转印后，将膜放在滤纸上，在室温下干燥10分钟。在20%甲醇中润湿，在湿润状态下于白光前观察印迹；条带会比膜看起来更透明。如果条带随膜变干而消失，则再次润湿膜。

我们的PVDF膜可以耐受乙腈，但硝化纤维素膜不能耐受。

可以，我们的PVDF和硝化纤维素膜均可用于Li-COR™仪器。

湿润的膜可产生染色背景，干燥PVDF膜可减少这种背景。干燥的PVDF膜疏水性很强，难以润湿，但结合有蛋白质的区域更容易被渗透和染色。

这种方法不适用于硝化纤维素膜，并且只适用于短时间染色的PVDF膜；超过推荐染色时间只会增强背景并降低检出可能。