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비표지(Label-free) 정량 분석
더욱 심층적인 단백질체 분석
비표지 정량 분석(LFQ, Label-free quantitation)은 동위원소 표지 접근법에 대한 비용 효율적인 대안이며, 어디서 유래되었는지 상관없이 단백질 시료의 상대적 정량 분석이 가능합니다. 다양한 분석들을 수행 시, 크로마토그래피 기능을 포함한 고급 소프트웨어를 사용하여 시료를 개별적으로 분석합니다. 이 접근법의 가장 큰 장점은 시료 비교 횟수가 제한되지 않는다는 것입니다. 또한 모든 단편화 분석법(CID, ETD, EThcD 및/또는 HCD)로 펩타이드를 식별할 수 있습니다.
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LFQ에서 더 광범위한 단백질체를 포함하는 더 빠른 처리량
Thermo Scientific Orbitrap Astral 질량분석기는 Orbitrap 기술의 입증된 성능과 새로운 Astral 질량분석기의 속도(200 Hz) 및 감도를 결합하여 비표지 정량 분석(LFQ) 실험에서 더 빠른 시료 처리량을 제공하고 단백질체를 더 심도있게 분석할 수 있습니다. 이 질량분석기를 통해 성능의 저하 없이 수천 개의 시료를 분석할 수 있고 수천 개의 단백질에 대한 정확하고 재현 가능한 정량 분석이 가능합니다.
LFQ에서 더 광범위한 단백질 커버리지를 제공하는 더 빠른 처리량
Orbitrap Astral 질량분석기는 Orbitrap 기술의 입증된 성능과 새로운 Astral 질량분석기의 속도(200 Hz) 및 감도를 결합하여 비표지 정량 분석(LFQ) 실험에서 더 빠른 처리량을 제공하고 단백질 커버리지를 증가시킬 수 있습니다. 이 질량분석기를 통해 성능 저하 없이 수천 개의 시료를 분석할 수 있고 수천 개의 단백질에 대한 정확하고 재현 가능한 정량 분석이 가능합니다.
비표지 상대 정량 분석 기기
 Orbitrap Ascend Tribrid 질량분석기 |  Orbitrap Exploris 480 질량분석기 |  Orbitrap Exploris 240 질량분석기 |  Orbitrap Astral 질량분석기 | |
|---|---|---|---|---|
| 장점 | 복잡한 시료에서 최고의 분석 결과를 제공합니다. 더욱 빨라진 데이터 획득으로 비표지 정량 분석, 전체 단백질체 프로파일링, 단일 세포 단백질체학 등의 고급 단백질체학 워크플로를 지원합니다. Orbitrap Ascend 질량분석기는 새로운 혁신을 통해 최고의 유연성을 제공하여 새롭고 영향력 있는 분석 결과를 빠르게 제공하고 현재의 한계를 뛰어넘는 과학적 발전을 이끌어냅니다. | 업계 최고의 단일 세포 감도 및 정확도를 통해 비표적 단백질체학 프로파일링에서 표적 단백질체학 실험에 이르기까지 비교 불가한 최상의 분석 결과를 제공합니다. 엄선된 워크플로는 대규모의 연구를 가속화하고 고품질 데이터를 제공하며 시간이 절약되어 실행 가능한 결과가 도출됩니다. | 소규모에서 대규모 연구용으로 설계된 최적화된 단백질체학 솔루션은 회전 시간이 빠르며 차지하는 공간이 작으면서도 최고의 성능을 자랑합니다. 단백질 식별부터 멀티플렉싱에 이르기까지 매일 다양한 방법으로 실험실의 역량을 확장해 보십시오. | Orbitrap 질량분석기의 입증된 성능과 새로운 Astral 질량분석기의 속도(200 Hz) 및 감도를 결합한 Orbitrap Astral 질량분석기는 더 빠른 처리량을 제공하고 단백질체를 더 심층적으로 포괄할 수 있습니다. |
| 분해능 | m/z 200에서 최대 480,000 (FWHM) | m/z 195에서 최대 480,000 | m/z 200에서 최대 240,000 FWHM | Orbitrap 분해능: m/z 200에서 7500–480,000 (FWHM)의 범위로 설정 Astral 분해능: m/z 524에서 80,000 (FWHM) |
| 스캔 속도 | Orbitrap 질량분석기 MSⁿ 최대 45 Hz 이온 트랩 MSⁿ 최대 50 Hz | 최대 40 Hz | 최대 40 Hz | Orbitrap MSn 획득 속도 최대 40 Hz Astral MS2 획득 속도 최대 200 Hz |
| 질량 범위 | 표준 질량 범위 m/z 40–2000, 중간 질량 범위 m/z 200–6000, 선택 사양인 HMRn+ 질량 범위 m/z 500–16,000 | 40–6,000 m/z(BioPharma 옵션의 경우 최대 8,000 m/z) | 40–6,000 m/z(BioPharma 옵션의 경우 최대 8,000 m/z) | Orbitrap: 표준 질량 범위 m/z 40–6000, m/z 40–8000(BioPharma 옵션의 경우) Astral: 분석 질량 범위 m/z 40–6000 |
| 검출 범위 | >5000(단일 OTMS 스펙트럼) | >5000:1 | >5000:1 | Orbitrap: 단일 Orbitrap 질량 스펙트럼 내에서 >5000 Astral: 단일 Astral 질량 스펙트럼 내에서 >1000 |
| 질량 정확도 | 내부 <1ppm RMS; 외부 <3ppm RMS | 내부 <1ppm RMS; 외부 <3ppm RMS | 내부 <1ppm RMS; 외부 <3ppm RMS | Orbitrap: 내부 <1ppm RMS; 외부 <3ppm RMS Astral: 외부 <3 ppm RMS |
광범위한 펩타이드 커버리지 획득
비표지 상대적 정량 분석 워크플로 중 분해된 펩타이드는 MS 전에 LC로 분리됩니다. Thermo Scientific 저유속 LC시스템에서의 RP 분리는 비표지 정량 분석 워크플로와 완전히 통합되며 Thermo Scientific Orbitrap 질량분석기와 원활하게 결합됩니다. Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC 시스템은 가장 우선적으로 선택되는 시스템입니다. Vanquish Neo UHPLC 시스템은 최고의 혁신 기술을 통해 다양한 고감도 LC-MS 워크플로에서 최대의 성능으로 복잡한 혼합물을 시간에 구애받지 않고 재현성 있게 분리합니다.
Thermo Scientific FAIMS Pro Duo 인터페이스는 전구체 이온의 선택성을 개선하여 시간이 많이 소요되는 시료 전처리 단계를 줄이면서 대부분의 펩타이드 및 단백질 응용 분야에서 정성적 및 정량적 분석 결과를 향상시켜 줍니다. FAIMS Pro Duo 인터페이스는 기체상 분획과 펩타이드 화합물의 선택적 향상을 통해 분석 성능을 높여 MS 스펙트럼의 복잡성을 줄이고 분석물질의 신호 대 잡음비를 개선합니다. 이를 통해 더욱 광범위한 단백질 커버리지, 향상된 감도, 더욱 정확한 정량 분석 결과를 얻을 수 있습니다.
비표지 정량 분석용 소프트웨어
새로운 단백질 바이오마커 발견
새로운 비표지 정량 분석 노드를 사용하는 Thermo Scientific Proteome Discoverer 소프트웨어는 비표지 실험에서 생성된 많은 양의 LC-MS 데이터 평가용으로 사용하기 쉽고 자동화된 솔루션입니다. 또한 비표지 정량 분석 노드는 이전에 동위원소 표지 워크플로에서만 제공되었던 전체 정량 분석 기능 제품군을 활용합니다. Proteome Discoverer 소프트웨어의 규모 확장, 정규화, 연구 관리 기능에 비표지 정량 분석 워크플로를 결합하면 매우 복잡한 데이터를 분석할 수 있는 강력한 수단을 얻을 수 있습니다.
비표지 정량 분석 워크플로
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데이터 획득을 위한 두 가지 서로 다른 LFQ 접근법
LFQ DDA 접근법에서, 주어진 m/z 범위에 해당하는 이온은 개별적으로 분리되고 조각화됩니다. 정량 분석은 LC-MS 실행에서 펩타이드 크로마토그램(MS
기존의 데이터 종속적 워크플로(Data-dependent workflows)에서는 질량분석기의 확률적 샘플링 특성으로 인해 일관된 전구체 이온 및 단백질 정량 분석 결과를 쉽게 얻을 수 없었습니다. 소프트웨어 알고리즘의 혁신적인 기술은 이제 raw 데이터 파일에서 LC-MS 피크를 추출한 후 식별된 스펙트럼에 매핑하고, 머무름 시간의 정렬 등의 특징들의 연결을 통해 LC-MS 데이터 파일에서 "누락 데이터 포인트"를 최소화하고 정량적 분석 효율을 최대화합니다.
LFQ DIA 접근법에서는 전구체 질량 범위가 선택되고 비교적 넓은 분리 구간(예: 각각 25 m/z)으로 구분됩니다. 키메릭 MS/MS 데이터는 첫 번째 분리 구간에서 검출된 모든 전구체 이온에서 획득되고 전체 전구체 질량 범위를 포함할 때까지 인접한 각 연속 분리 구간에서 반복됩니다. MS/MS 스펙트럼 라이브러리는 획득한 데이터에서 관심 펩타이드를 식별하는 데 사용합니다.
DIA는 검출된 모든 전구체 이온에서 MS/MS 데이터를 획득하여 커버리지와 재현성을 크게 높입니다. 또한 후향적 데이터 분석이 가능합니다. LFQ DIA는 LC-MS 실행에서 펩타이드 크로마토그램(MS
새로운 차원의 단백질체학 정량 분석 살펴보기
새로운 Velocity LFQ DIA 플랫폼은 확실한 특징 분석을 위해 심도있는 단백질 커버리지에서 정량화 정확도, 정밀도, 데이터 완전성에 대한 새로운 표준을 제시합니다.
시료 전처리 시간 절감으로 단백질체학 연구에 더 많은 시간 투자 가능
Thermo Scientific AccelerOme 자동 시료 전처리 플랫폼은 미리 제작된 시약 및 키트와 직관적인 소프트웨어가 함께 제공되며 고유한 실험 설계 경험을 통해 단백질체학 시료 전처리 환경을 완전히 바꾸어 놓습니다.