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Materiales en línea y descargables para los espectrofotómetros NanoDrop
Los manuales, folletos, notas técnicas y de aplicación, vídeos, seminarios web y otros recursos de esta sección le ayudarán a sacar el máximo provecho a su espectrofotómetro Thermo Scientific NanoDrop One/OneC, Eight o Lite Plus, o a su fluoroespectrómetro 3300.
Para obtener materiales similares para los espectrofotómetros NanoDrop 2000/2000c, 8000, Lite y 1000, consulte Recursos para los instrumentos NanoDrop descatalogado en la parte inferior de esta página.
Recursos destacados para el espectrofotómetro NanoDrop
Cuantificación sencilla, fácil y rápida de ácidos nucleicos y proteínas
Quizás la característica más llamativa de la cuantificación de NanoDrop es lo sencillo y fácil que es de utilizar. El innovador sistema de pedestal de NanoDrop ayuda a minimizar el volumen de la muestra y simplifica el funcionamiento. Basta con pipetear una gota de su muestra de ADN, ARN o proteínas —tan solo 1 o 2 µL— en el pedestal y bajar el brazo. No se necesitan cubetas ni capilares y los resultados aparecen en segundos.
Cuantificación precisa de ácidos nucleicos y proteínas mediante absorbancia UV
Los espectrofotómetros NanoDrop funcionan según el principio de absorbancia del espectro ultravioleta visible (UV-Vis). Los ácidos nucleicos absorben la luz con un pico a 260 nm. Las proteínas purificadas absorben la luz a un pico de 280 nm, mientras que los péptidos y las proteínas que carecen de residuos de triptófano y tirosina absorben a un pico de 205 nm. Muchos contaminantes que permancen después del uso de protocolos de extracción absorben a 280 nm o a 230 nm.
Generación de señal óptica
La medición fotométrica de los ácidos nucleicos (ADN y ARN) y las proteínas se basa en sus propiedades absorbentes intrínsecas. Cuando se mide un espectro de absorción, los ácidos nucleicos absorben la luz con un pico característico a 260 nm.
Cuantificación de muestras de ácidos nucleicos y proteínas
Las concentraciones de ácidos nucleicos y proteínas se calculan automáticamente a partir de sus valores de absorbancia medidos a la longitud de onda deseada mediante la ecuación de Beer-Lambert, donde:
- c = concentración en molar (M)
- A = absorbancia UV en unidades de absorbancia (AU)
- e = coeficiente de absorbancia molar dependiente de la longitud de onda (o coeficiente de extinción) en M-1cm-1
- L = longitud de trayectoria de luz en cm
Una de las implicaciones de la ecuación de Beer-Lambert es que, para muestras de baja concentración, una mayor longitud de trayectoria se traduce en una mayor precisión y relación señal-ruido. Los instrumentos NanoDrop optimizan automáticamente la longitud de la columna líquida para obtener la máxima precisión en un amplio intervalo de concentración.
Precisión de la cuantificación de dsADN de NanoDrop One validada frente a un instrumento de referencia. Se prepararon una serie de diluciones de dsADN que oscilaban entre los 3 y los 28 000 ng/µL y se cuantificaron espectrofotométricamente a 260 nm en los espectrofotómetros NanoDrop One y Evolution 300. (A) Se trazó una comparación de linealidad en todo el intervalo de concentración del instrumento. La línea de regresión demuestra que los resultados de concentración de dsADN de NanoDrop One estaban bien alineados (R2 = 0,9991) con los valores obtenidos en el espectrofotómetro Thermo Scientific Evolution 300 de referencia. (B) También se trazó un análisis más detallado de las comparaciones de linealidad en el intervalo de concentración bajo (de 3 a 495 ng/μL). La línea de regresión muestra una estrecha correlación (R2 = 1) con los resultados de Evolution 300 y una linealidad excelente en el extremo inferior del intervalo de detección. Para obtener información más detallada sobre el método y los datos, consulte la nota técnica sobre el ácido nucleico NanoDrop One.
Análisis de pureza para muestras de ácido nucleico y proteínas
La pureza de una muestra se puede evaluar utilizando relaciones de absorbancia de una longitud de onda a otra. La contaminación de las muestras puede provocar una sobreestimación de la concentración de ácido nucleico o imprecisiones en procesos o mediciones posteriores.
Principales relaciones de pureza para la absorbancia UV
Índice | Analito | Considerado «puro» | Factores que pueden provocar índices anormales |
A260/A230 | Ácidos nucleicos | ADN: ~1,8 | Contaminantes indicados por índices bajos: · Proteínas · Fenol residual u otros reactivos utilizados en el protocolo de extracción |
A260/A230 | Ácidos nucleicos | ADN/ARN: ~2,0-2,2 | Contaminantes indicados por índices bajos: · Proteínas · Remanente de carbohidratos (a menudo un problema con las plantas) · Fenol residual de la extracción de ácido nucleico · Guanidina residual (a menudo se utiliza en kits basados en columnas) · Glicógeno utilizado para la precipitación Factores indicados por índices altos: · Problemas con la medición del blanco |
A260/A230 | Proteínas | ~0,6 | Contaminantes indicados por índices altos: · Ácidos nucleicos |
Más allá de los índices de pureza, las impurezas pueden alterar los perfiles espectrales, desplazando los picos y las depresiones, como se muestra en la figura.
Los contaminantes provocan cambios en los perfiles espectrales
Espectros de ADN purificado sin contaminación (A, rojo) y de la misma muestra contaminada con guanidina (B, verde) y fenol (C, marrón).
Los instrumentos NanoDrop que ejecutan el software Acclaro Sample Intelligence pueden utilizar este tipo de datos de espectro completo para identificar contaminantes, como se describe en Características.
Documentos para el espectrofotómetro NanoDrop One/Oneᶜ
Documentos para el espectrofotómetro NanoDrop Eight
Documentos para el espectrofotómetro NanoDrop Lite Plus
Vídeos del espectrofotómetro NanoDrop
Seminarios web sobre el espectrofotómetro NanoDrop
Asistencia y recursos educativos para espectrofotómetros NanoDrop
Para obtener asistencia técnica en Estados Unidos y Canadá, llame al 877-724-7690, opción 4, o envíe un correo electrónico al servicio técnico de NanoDrop a nanodrop@thermofisher.com. Para obtener asistencia internacional, envíe un correo electrónico a nanodrop@thermofisher.com o póngase en contacto con su distribuidor local de NanoDrop.
Muchas cuestiones técnicas se pueden resolver consultando la documentación, la bibliografía, los vídeos y los seminarios web mencionados. Además, nuestros materiales educativos gratuitos en línea incluyen estos centros de aprendizaje y páginas sobre espectroscopía, biología de proteínas y cuantificación de ácidos nucleicos.
Recursos para instrumentos NanoDrop descatalogados
Encuentre manuales, folletos, notas técnicas y de aplicación, vídeos y otros recursos que le ayudarán a sacar el máximo provecho a su espectrofotómetro NanoDrop 2000/2000c, 8000, Lite o 1000.
Recursos para el espectrofotómetro NanoDrop 1000
Recursos para el espectrofotómetro NanoDrop 2000/2000c
Recursos para el espectrofotómetro NanoDrop 3300
Recursos para el espectrofotómetro NanoDrop 8000
Recursos para el espectrofotómetro NanoDrop Lite
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.