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Digestión de enzimas de restricción y modificación del ADN
La clonación mediante ligación y digestión de enzimas de restricción es una manera simple y fácil de mover un fragmento de ADN bicatenario de un plásmido a otro.
Para empezar:
- Elija las enzimas de restricción para las que las secuencias de reconocimiento flanquean el gen de interés.
- Incube la reacción durante el tiempo recomendado.
- Purifique el fragmento.
- Realice la ligación en el plásmido de interés.
Sistema de clonación de enzimas de restricción Anza™
Completo sistema de enzimas de restricción y enzimas de modificación del ADN para una clonación maravillosamente simple.
- Un tampón para todas las enzimas de restricción
- Un protocolo de digestión para todos los tipos de ADN
- Digestión completa en 15 minutos
- Digestión durante la noche sin actividad estrella
Enzimas de restricción
Protocolo simple de dos pasos, independientemente del número de enzimas de restricción de su reacción o del tipo de ADN que esté utilizando: basta con preparar la mezcla de la reacción e incubarla a 37 °C durante 15 minutos.
Tampón Anza
Enzimas de restricción convencionales
Las enzimas de restricción (RE) funcionan cortando el ADN bicatenario en secuencias específicas de reconocimiento de repeticiones invertidas del par de bases del 4 al 8. Los productos de disociación de ADN tienen los extremos romos o contienen salientes de 3' o 5'.
Enzimas de modificación de ADN
Ligasas
Independientemente del tipo de final generado por la digestión de restricción, la disociación del ADN da lugar a fragmentos con grupos 3'-hidroxilo y 5'-fosfato en sus termini. La ligasa de ADN conecta covalentemente los termini 5'-fosfato y 3'-hidroxilo de ADN (o ARN) bicatenario en una reacción dependiente de ATP.
Fosfatasa alcalina
La fosfatasa alcalina hidroliza los 3' y 5'-fosfato del ADN y ARN. Es adecuada para la eliminación de 5'-fosfatos antes del marcado de extremos y de vectores de defosforilación antes de la ligación de insertos. También se puede utilizar para defosforilar proteínas.
Reparación final
La reparación final permite que el ADN con salientes de 5' o 3' se convierta en ADN de extremo romo 5' fosforilado para una ligación eficaz en vectores de clonación de extremos romos.
Polimerasas
Las polimerasas se usan para generar extremos romos o incorporar ADN marcado.
NOVEDAD Centro de asistencia para la clonación
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