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Kits TA Cloning
La tecnología TA Cloning de Invitrogen simplifica enormemente la restricción y ligación tradicionales con una estrategia de clonación de un solo paso que elimina la necesidad de cualquier modificación enzimática del producto de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y que no requiere el uso de primers que contengan sitios de enzimas de restricción.
Los kits TA Cloning de Invitrogen dependen de la complementariedad de bases de la adenina (A) y la timina (T) en diferentes fragmentos de ADN para su hibridación conjunta. Los productos de PCR se amplifican mediante una ADN polimerasa Taq que añade una sola desoxiadenosina al extremo 3' del producto. Los vectores linealizados suministrados en los kits TA Cloning presentan residuos de desoxitimidina 3' (T) complementaria, lo que permite la ligación del inserto en el vector con eficacia.
Velocidad con flexibilidad
Con la adición de la ligasa de ADN T4 Invitrogen™ExpressLink™ en los kits TA Cloning, la ligación ahora se puede realizar a temperatura ambiente en solo 15 minutos con reacciones que normalmente producen 80 % de recombinantes que contienen insertos.
Los kits TA Cloning están disponibles con una opción de vectores de Invitrogen™pCR™ 2.1 y pCR™ II. Los promotores T7 y SP6 del vector pCR II permiten la transcripción in vitro del inserto para producir productos con sentido o antisentido.
Rendimiento y valor
Los kits TA Cloning están disponibles sin células competentes (K2020-20 y K2020-40) o con E. coli químicamente competentes Invitrogen One Shot INVαF' (K2000-01 y K2000-40) y E. coli químicamente competentes One Shot TOP10F' (K2040-01 y K2040-40) en tamaños de paquete de 20 y 40 reacciones.
En el caso de TA Cloning con el vector pCR II (promotor doble), los kits se encuentran disponibles sin células competentes (K2750-20 y K2750-40), con E. coli químicamente competentes One Shot INVαF’ (K2050-01 y K2050-40) y E. coli químicamente competentes One Shot TOP10F’ (K2060-01 y K2060-40) en tamaños de paquete de 20 y 40 reacciones.
Los kits TA Cloning superan al «competidor P» en rendimiento y valor.
| Kits TA Cloning | Competidor P | |
|---|---|---|
| Eficacia de la clonación | 80 % (con control) | 60% (con control) |
| Tiempo para la ligación | 15 minutos | 1 hora |
| Temperatura para la ligación | Temperatura ambiente | Temperatura ambiente |
| ¿Limpieza de PCR necesaria? | No | Recomendado |
| Antibióticos de selección | Kanamicina y ampicilina | Ampicilina solamente |
| Contenido del kit | ||
| Vector | ||
| Tampón de ligación | ||
| ADN de inserción de control | ||
| dNTPs | ||
| Agua esterilizada | ||
| Plantilla de ADN de control | ||
| Tampón de PCR | ||
| Primers de PCR de control | ||
¿Usa una enzima de corrección?
Las polimerasas termoestables que contienen una gran actividad de la exonucleasa de 3' a 5', como Invitrogen Platinum SuperFi, no dejan salientes A de 3'. Los productos de PCR generados con la polimerasa Taq tienen una alta eficacia de clonación en el sistema TA Cloning porque los salientes A de 3' no se eliminan. Sin embargo, si utiliza una polimerasa de corrección o desea clonar fragmentos de extremos romos, puede agregar salientes A de 3' mediante incubación con Taq al final del programa de ciclos.
Alternativamente, quizá desee probar el kit de clonación de PCR Invitrogen Zero Blunt. Este kit ofrece una clonación eficaz de productos de PCR con extremos romo generados utilizando polimerasas termoestables y de corrección.
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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.