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作為符合成本效益的同位素標記替代方案,無標記定量 (LFQ) 可自任何來源的蛋白質樣本進行相對定量分析。樣本使用進階軟體進行個別測試,並具備可協同各種操作的層析功能。此方法最大優點便是進行比較的樣本數量不會受到限制。此外,亦可利用任何碎裂方式 (CID、ETD、EThcD 和/或 HCD) 來進行胜肽鑑定。
Thermo Scientific Orbitrap Astral 質譜儀結合了 經實證且具速度 (200 Hz) 的 Orbitrap 科技效能與最新 Astral 質量分析儀的靈敏度,可在無標記定量 (LFQ) 試驗中提供更快的處理量及更深的蛋白質體覆蓋率。質譜儀可分析數千筆樣本且不會降低效能,可為數千種蛋白質提供準確且可再現之定量分析。
Orbitrap Astral 質譜儀結合了 經實證具速度 (200 Hz) 之 Orbitrap 科技效能與最新 Astral 質量分析儀的靈敏度,可在無標記定量 (LFQ) 試驗中提供更快的處理量及更深的蛋白質體覆蓋率。質譜儀可分析數千筆樣本且不會降低效能,可為數千種蛋白質提供準確且可再現之定量分析。
Orbitrap Ascend Tribrid 質譜儀 | Orbitrap Exploris 480 質譜儀 | Orbitrap Exploris 240 質譜儀 | Orbitrap Astral 質譜儀 | |
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優點 | 自複雜樣本獲取最大洞見。運用進階蛋白質體分析工作流程:無標記定量、整個蛋白質體的剖析與單細胞蛋白質體學,更快速擷取資料。Orbitrap Ascend 質譜儀的全新創新功能可在實驗範疇上帶來極致靈活性、讓您更快能獲取具影響力之新結果、驅動您的科學發展以超越今日的發現。 | 以領先業界的單細胞靈敏度與準確度,讓您無論是從非標的蛋白質體剖析或標的蛋白質體試驗,都能獲得無與倫比的洞見。精心組織的工作流程可加速大規模的研究、提供高資料的品質,並節省時間以取得可據以行動的成果。 | 最佳化的蛋白質體解決方案,無論小規模還是大規模研究皆適用,可在不占空間的情況下快速完成分析並具備同級最佳效能。從蛋白質鑑定到多工化,利用日常多用途功能來擴展您的能力。 | 透過結合了 Orbitrap 質譜儀的速度 (200 Hz) 與經實證之效能,以及最新 Astral 質量分析儀的靈敏度,Orbitrap Astral 質譜儀可提供更快的處理量和更深的蛋白質體覆蓋率。 |
解析能力 | 高達 480,000 (FWHM), m/z 200 下 | 高達 480,000, m/z 195 下 | 高達 240,000 FWHM, m/z 200 下 | Orbitrap 解析度:設定範圍從 7500 到 480,000 (FWHM),m/z 200 下 Astral 解析度:80,000 (FWHM),m/z 524 下 |
掃描速度 | Orbitrap 質量分析儀 MSⁿ 高達 45 Hz 離子陷 MSⁿ 高達 50 Hz | 高達 40Hz | 高達 40Hz | Orbitrap MSn 獲取率高達 40 Hz Astral MS2 獲取率高達 200 Hz |
質量範圍 | 標準質量範圍 m/z 40–2000,中等質量範圍 m/z 200–6000,選用 HMRn+ 質量範圍 m/z 500–16,000 | 40 至 6,000 m/z (高達 8,000 m/z ,使用 BioPharma 選項) | 40 至 6,000 m/z (高達 8,000 m/z,使用 BioPharma 選項) | Orbitrap:標準質量範圍 m/z 40–6000, m/z 40–8000,使用 BioPharma 選項 Astral:標準質量範圍 m/z 40–6000 |
動態範圍 | >5000,使用單一 OTMS 光譜 | >5000:1 | >5000:1 | Orbitrap:>在單一 Orbitrap 質譜內為 5000 Astral:>在單一 Astral 質譜內為 1000 |
質量準確度 | 內部 <1 ppm RMS;外部:<3 ppm RMS | 內部 <1 ppm RMS;外部:<3 ppm RMS | 內部 <1 ppm RMS;外部:<3 ppm RMS | Orbitrap:內部 <1 ppm RMS;外部:<3 ppm RMS Astral:外部 <3 ppm RMS |
無標記相對定量工作流程期間,水解胜肽會在質譜儀前由液相層析分離。Thermo Scientific 低流速系統上的 RP 分離會與無標記定量工作流程妥善整合,並與 Thermo Scientific Orbitrap 質譜儀無縫結合。Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC 系統是理想的系統選擇。Vanquish Neo UHPLC 系統全天候以最高性能為各種高靈敏度 LC-MS 工作流程分離複雜混合物。
Thermo Scientific FAIMS Pro Duo 介面可加強前驅物選擇性、能為大多數胜肽及蛋白質應用改善定性與定量結果,同時還能減少耗時的樣本製備步驟。FAIMS Pro Duo 介面透過氣相分離及選擇性強化之胜肽複合物來提高分析性能、降低質譜儀光譜的複雜度,並改善分析物訊號雜訊比。最終帶來更佳的蛋白質體覆蓋率、增強的靈敏度與更準確的定量等結果。
Thermo Scientific Proteome Discoverer 軟體,憑藉其最新無標記定量節點來提供簡單易用的自動化解決方案,可用於評估無標記試驗所產出的大量 LC-MS 資料。無標記定量節點也具備一系列定量功能,先前僅於同位素標記工作流程中提供。結合了無標記定量工作流程及尺度化、標準化和研究管理等功能,Proteome Discoverer 軟體可提供強大工具來分析高度複雜的資料。
在 LFQ 數據依賴分析法中,特定 m/z 範圍的離子會被個別分離及碎裂。定量分析包含從所執行的 LC-MS 中擷取胜肽層析圖 (MS
傳統數據相依工作流程中必須要有一致的前驅物,但由於質譜儀隨機採樣的本質,因此難以進行蛋白質定量。創新軟體演算法現在會萃取原始資料檔案中的 LC-MS 波峰,並將其對應至已鑑定出來的光譜,跨 LC-MS 檔案來偵測這些特性,使用的是滯留時間校準及特性連結,減少"資料點遺失",並帶來最多定量洞見。
LFQ 非數據依賴分析 (DIA) 法會先選定前驅物質量範圍,然後將其區分為一系列相對寬的分離區間:例如,每個區間為 25 m/z。在第一個分離區間中,從所有偵測到的前驅離子擷取嵌合 MS/MS 資料,然後在每個連續相鄰分離區間中重複,直到涵蓋整個前驅物的質量範圍為止。可使用 MS/MS 光譜庫從擷取資料中鑑定出目標胜肽。
非數據依賴分析 (DIA) 可透過自所有已偵測到的母離子來擷取 MS/MS 資料,進而大幅提升覆蓋率和再現性;同時也能進行回溯性資料分析。LFQ 非數據依賴分析 (DIA) 包含從所執行的 LC-MS 中擷取胜肽層析圖 (MS
Thermo Scientific AccelerOme 可自動化樣本製備平台,搭配原廠所提供的試劑與套組、直覺式軟體與獨特實驗設計體驗,來將蛋白質體樣本製備轉型。