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TMT 定量
高處理量多工蛋白質定量
蛋白質體學技術正在進化為一種高靈敏度、可定量且具高處理量的方法，進而可用於分析細胞、組織或器官內的整體蛋白質動力學。過去十年來，我們對整個蛋白質體學工作流程做出了重大進展，特別是串聯式質量標記試劑 (TMT) 的開發，以及質譜儀上的先進技術，進而提供更加準確、具高處理量 (相較於單一質譜儀分析中高達 18 個樣本) 的定量蛋白質體學分析。
在此頁中
定量蛋白質體學綜述：LC-MS 多工的魔力
瞭解 TMT 蛋白質體學技術和多工的魔力如何協助科學家長時間追蹤細胞中的蛋白質，以更深入瞭解細胞如何發揮作用、分子如何以及為何在細胞中移動，以及此類工作的實務應用。
TMT 定量蛋白質體學的作用方式
TMT 為定量之化學標記，其具備多工能力來實現相對定量蛋白質體學分析。此同時執行多重樣本質譜儀分析的能力，可提高處理量並實現相對定量，並可對源自細胞、組織或生物體液高達 18 種不同的樣本進行相對定量分析。標記包含一個 MS/MS 報告組、一個延伸臂和胺類反應組。胺類反應組可在標記期間鍵結至胜肽的 N 端或中的離胺酸殘留物上。
在相對定量實驗中，會使用不同的定量標記來標示不同的系統性狀況。標記後，所有樣本將以單一液相層析質譜儀 (LC-MS) 實驗來進行混合和分析。由於定量標記具有相同的化學屬性，因此在 LC 分離期間，所有來自不同 TMT 標記樣本的胜肽都會發生共溶析。胜肽一旦進入質譜儀，便會同時偵測為單一且無法區別的母離子波峰。
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碎裂後，來自每個個別系統性狀況的標記會在 MS/MS 光譜的低 m/z 區域產生獨特特有的報告離子。透過將產生的離子波峰與片段資料庫中所提供的波峰進行比對來達成胜肽鑑定。胜肽定量分析係透過比較報告離子的強度來完成。
TMT 定量產品解決方案
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同級最佳的 MS/MS 系統
Thermo Scientific Orbitrap Astral 質譜儀可為數千種蛋白質提供準確且可再現的定量分析。憑藉 Orbitrap Astral 質譜儀的新穎設計，該儀器可為 TMT 分析設下新標準，進而可在創紀錄的時間下更深入地研究蛋白質體。由於 Astral 分析儀結合了高速、高靈敏度和高解析度，因此可立即解析 TMT 報告離子以進行多工定量。
Orbitrap 與 Astral 分析儀的平行化處理可大幅提升覆蓋率與處理量，從而將 TMT 分析轉型。
- 非常適合高度複雜的樣本
- 熱剖析
- 全蛋白質體剖析
- 全細胞 相互作用組
- 次細胞定位
- 最高處理量與覆蓋率
- 高度定量精準度
入門級 MS/MS 系統
以領先業界的單細胞靈敏度與絕佳的準確度、精準度及簡易性，讓您無論是從非標的蛋白質體剖析或標的蛋白質體試驗，都能獲得定量上的最大洞見。透過精心組織可提供更佳可用性的工作流程，Thermo Scientific Orbitrap Exploris 480 質譜儀可加速您朝向大規模研究邁進、提供經實證之高品質資料並結審時間，如此您便能更快超越獲取可據以行動的成果。
- 非常適合用於低度至中度複雜的樣本
- 棘手的相互作用研究
- 免疫沈澱反應
- 純化樣本
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同級最佳的 Tribrid 質譜儀 Thermo Scientific Orbitrap Ascend Tribrid 質譜儀以在我們所有 Orbitrap LCMS 儀器中具最高解析力而自豪 (高達 480,000，m/z 200 下)，能夠在全掃描 MS 模式中達到極致偵測極限和選擇性。本系統可為 Synchronous Precursor Selection MS (SPS MS) 提供專屬即時搜尋功能，提供高度準確且精準的 TMT 定量結果。這項獨特擷取策略能改善 TMT 報告離子的比例準確度，並提高靈敏度、增加總量化胜肽。連同全新 QR5 Segmented Hyperbolic-Surface 四極桿，可改善狹窄分離區間中的離子傳輸，這對降低干擾而言至關重要。更亮的離子源可實現 0.4 amu 分離區間，並將不準確度比例降至最低。
- 非常適合高度複雜的樣本
- 全蛋白質體剖析
- 全細胞相互作用組
- 次細胞定位
- 最高的定量準確度與精準度搭載即時搜尋，可實現 MS3 擷取
EasyPep Mini MS 樣本製備套件
使用預先調配好的試劑來製備您的樣本，3 小時內便可進行質譜儀分析。
TMT 11 Plex 定量標記試劑組
使用十一種不同的定量串聯式質量標記來實現高處理量定量蛋白質體學分析。此套組可用於製備高達十一種不同胜肽，以供平行標記和同步分析。
TMTpro 18plex 標記試劑組
新一代的串聯式質量標記，旨在提高樣本多工程度，進而提供高達 18 個樣本的 MS 分析，且不會在蛋白質鑑定及定量上受限。
Pierce High pH Reversed-Phase 胜肽分離套件
在複雜胜肽樣本中使用正交胜肽分離將蛋白質鑑定率提升至 50% 以上。
Acclaim PepMap 100 C18 LC 管柱
在複雜蛋白質體樣本中使用高負載能力的管柱來達成低豐度胜肽的高度解析度分離。
EASY-Spray LC 管柱
EASY-Spray C18 LC 管柱具備優異的峰容量，可實現全方位的蛋白質體特性分析。
Vanquish Neo UHPLC
利用奈米、毛細管和微流 UHPLC 來進行複雜混合物之 LC-MS 分析，進而達到最高解析度與靈敏度。
Pierce TMT 11plex 酵母水解標準
標有 TMT11plex 試劑之四個同源異基因株的冷凍乾燥酵母胜肽混合物可用於監控 LC-MS/MS 系統效能。
輕鬆進行蛋白質定量與鑑定
定量標記實驗需要自原始 LC-MS 檔案中擷取定性和定量資料。Thermo Scientific Proteome Discoverer 軟體是最全方位的資料分析平台，可用於定性與定量蛋白質體學研究；它不僅可在 SPS MS3 層級支援碎裂資料的差異分析，也可支援 MS2 層級的蛋白質鑑定。此軟體可提供全方位資料探勘工具組，並在胜肽鑑定期間支援多種搜尋引擎。
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定量標記實驗需要自原始 LC-MS 檔案中擷取定性和定量資料。Thermo Scientific Proteome Discoverer 軟體是最全方位的資料分析平台，可用於定性與定量蛋白質體學研究；它不僅可在 SPS MS3 層級支援碎裂資料的差異分析，也可支援 MS2 層級的蛋白質鑑定。此軟體可提供全方位資料探勘工具組，並在胜肽鑑定期間支援多種搜尋引擎。
Thermo Scientific FAIMS Pro Duo 介面可加強前驅物選擇性、能為大多數胜肽及蛋白質應用改善定性與定量結果，同時還能減少耗時的樣本製備步驟。FAIMS Pro Duo 介面透過氣相分離及選擇性強化之胜肽複合物來提高分析性能、降低質譜儀光譜的複雜度，並改善分析物訊號雜訊比。最終帶來更佳的蛋白質體覆蓋率、增強的靈敏度與更準確的定量等結果。
改良式串聯式質量標記質譜儀可達到最佳定量結果
相較於其他定量標記應用，我們的 Orbitrap LC-MS 型 TMT 定量解決方案是業界中最常出現於發表文獻的解決方案 (請參閱下方資源以取得文獻和文件)。為了取得最完整的定量剖析資料，我們進行了改善以達到最佳定量準確度和精確度，進而滿足您的研究目標。
我們最近亦在質譜儀的技術和性能上做出改善，並利用智慧型擷取和演算法明智地自原始光譜獲取真實、高品質的資料。搭配 TMT 試劑，即可在單次執行中鑑定和定量來自多工樣本的上千種蛋白質，對功能性生物學研究而言，能提供最準確、精確且符合成本效益的業界黃金標準。
TurboTMT 智慧型擷取是根據新穎的 ΦSDM 光譜處理而來，可提高基準線解析 TMT 報告離子類同位素分子的解析度，並可加速 TMT 11plex 實驗的光譜擷取，從而提高鑑定可量化胜肽的處理量。
Precursor Fit 過濾器可根據分離區間的母離子特異來選擇離子。這會提高母離子分離的特異性並減少母離子被錯誤註解的價數狀況/單一同位素波峰誘發的機會，或是當分離區間對目標母離子而言並不具特異性的狀況。
即時搜尋資料擷取可改善實驗速度和定量準確度
當即時搜尋結合了進階 SPS MS3 試驗方法時，便可提升試驗速度和量化的準確度。憑藉即時搜尋資料擷取，MS3 掃描僅會在先前 MS2 識別出胜肽光譜相符 (peptide-spectrum match，PSM) 時觸發。如此便可減少 MS3 事件的數量、增加母離子取樣率，並能獲得更多量化胜肽；改善試驗速度。在即時搜尋資料擷取策略的輔助下，Orbitrap Ascend Tribrid MS 僅會選擇與識別出 PSM 對應的那些碎裂離子，進一步在 MS3 掃描進行定量，從而提高定量準確性。
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將 FAIMS Pro 介面新增至工作流程中，可增加母離子選擇性、減少干擾，氣相分離造就更高的 TMT 胜肽定量準確度。
TMT 定量工作流程
Thermo Scientific 串聯式質量標記的多工工作流程，搭配獨特智慧型擷取管理，可為多工蛋白質體分析提供同級最佳之量化。透過運用 HRAM Orbitrap MS 內建的智慧型擷取方案，生命科學家能以最大的信心量化蛋白質，而無需犧牲蛋白質體的覆蓋率或深度，且設定簡單。
與 TMT 試劑搭配使用，我們提供三種完整的 Thermo Scientific Orbitrap MS 工作流程，包括可在單次執行中鑑定和定量來自多工樣本中上千種蛋白質的樣本製備，對功能性生物學研究而言，為最準確、精準且符合成本效益的方式。每個工作流程都經過優化以達最佳之定量準確度/精準度、覆蓋深度，並降低共同離子干擾和與比例壓縮。
Thermo Scientific TMT MS2 多工化工作流程可利用獨特智慧型擷取管理，來為 MS2 型多工化蛋白質體分析提供同級最佳的定量分析，為探索性蛋白質體試驗帶來無可匹敵的信心，且無需在涵蓋率或深度上妥協。
Orbitrap Astral 質譜儀採用新穎的分析儀技術，能提供高靈敏度和速度 (200 Hz) 且不犧牲解析能力，進而讓 TMT MS2 多工處理效能達到新境界。與市面上所有商業儀器相比，Orbitrap Astral 質譜儀可為 TMT MS2 多工試驗提供更快速的處理量及深度蛋白質體覆蓋率。針對 TMT 18plex 試驗，儀器上的新型分析儀可在低 m/z 區域為基準線解析報告離子提供 50,000 解析度。
TMT MS2 工作流程使用 Orbitrap Exploris 480 質譜儀來運用智慧型擷取方案 (TurboTMT 模式、PrecursorFit 過濾器)，進而提供大量可量化的胜肽以供多工蛋白質體分析之使用。與 TMT 試劑及 FAIMS Pro 介面搭配使用時，兩大專屬 MS/MS 系統其中之一的 Orbitrap Exploris 480 MS，具備可執行 TMT 18plex 試驗的解析能力，可為探索性蛋白質體試驗帶來無可匹敵的信心，且無需在涵蓋率或深度上妥協。
FAIMS Pro 介面可減少共同離子干擾並改善定量準確度。
相關資源
Thermo Scientific Orbitrap Tribrid 質譜儀的 Thermo Scientific SPS MS3 多工工作流程，可提供獨特、無與倫比的功能，可為多工蛋白質質體分析準確測量蛋白質體上的細微變化。
相較於 MS2，使用 SPS MS3 可大幅增加報告離子訊號強度，並可改善比例準確度，由於改善了計數統計，進而能大幅增加量化胜肽的數量。緊接在 MS2 之後，SPS 可同時分離高達 20 個 MS2 碎裂離子，這些離子會與 Orbitrap 分析儀所偵測到的 MS3 碎裂離子進行更高能量的碰撞解離 (HCD)。相較於 MS2，此項技術可進一步降低共同離子干擾及比例壓縮。
相關資源
TMT 即時搜尋 SPS MS3 工作流程
Thermo Scientific TMT 即時搜尋 SPS MS3 多工化工作流程，具備獨特的智慧型擷取，可針對多工蛋白質體分析提供無與倫比的定量，對功能性生物學研究而言，為最準確、精確且符合成本效益的方式，且為專屬於 Orbitrap Eclipse Tribrid MS 的工作流程。
在 SPS 使用即時搜尋功能，可大幅改善 TMT 實驗的特異性、準確度和分析效能。此方法可針對使用者提供之資料庫進行即時搜尋 MS/MS 光譜，且僅會對識別出來的光譜執行 SPS，從而減少對未識別光譜進行 MS3 擷取。這表示母離子的取樣會提高，從而鑑定出更多胜肽達 30-50%，同時提高定量的準確度。資料顯示 SPS MS3 工作流程的即時搜尋功能可大幅提升定量多工試驗的表現。
相關資源
免費電子書：TMT 以質譜儀為生物學開啟全新視野
進階 TMT 定量分析工作流程可讓您靈敏地偵測罕見胜肽種類、辨識出健康和病變組織間的差異，並對細胞蛋白質體進行複雜的研究調查。本電子書提供 TMT 技術概覽，並提供五個案例研究，說明部分使用這些試劑的領先應用。
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Thermo Scientific Velocity LFQ DIA 平台
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將樣本製備時間節省下來，便有更多時間可花在蛋白質體研究上
Thermo Scientific AccelerOme 可自動化樣本製備平台，搭配原廠所提供的試劑與套組、直覺式軟體與獨特實驗設計體驗，來將蛋白質體樣本製備轉型。
資源
次細胞蛋白質體
阿茲海默症與帕金森氏症
癌症
病毒
磷酸化蛋白質體
支援
其他資源
<！- 由 Google 結構化資料標記小幫手所產生的 JSON-LD 標記。-->