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此單元中的手冊、型錄、應用和技術說明、影片、網路研討會及其他資源,將可幫助您充分利用您的 Thermo Scientific NanoDrop One/OneC、Eight、Lite Plus 分光光譜儀或 3300 螢光光譜儀。
關於 NanoDrop 2000/2000c、8000、Lite 及 1000 分光光譜儀的類似資料,請參閱此頁面最下方的已停產 NanoDrop 儀器的資源 。
操作簡單、使用容易可能是 NanoDrop 定量最引人注目的特色。先進的 NanoDrop 臺座系統能將所需的樣本量減至最少,並簡化操作。只要使用移液管移取一滴 DNA、RNA 或蛋白質樣本(只需 1.0–2.0 µL)到臺座上,並將機械臂往下拉。無需比色皿或毛細管,便可在數秒內獲得結果。
NanoDrop 分光光譜儀根據紫外線-可見光光譜 (UV-Vis) 吸光度原理運作。核酸的吸光波峰在 260 nm。純化蛋白質的吸光波峰在 280 nm,而缺少色胺酸及酪胺酸殘基的蛋白質與胜肽的吸光波峰在 205 nm。提取方法遺留的許多汙染物是在 280 nm 或 230 nm 處吸收。
光學訊號產生
核酸(DNA 及 RNA)和蛋白質的光度測量是以其本質吸收特性為依據。當測量吸收光譜時,核酸的吸光特徵峰在 260 nm。
核酸和蛋白質的濃度是使用比爾─朗伯方程式根據在所需波長下測得的吸光度值自動計算,其中:
比爾─朗伯方程式的其中一個含義是,對於低濃度樣本,較長的路徑長度會導致更高的準確度和訊噪比。NanoDrop 儀器會自動最佳化液體柱的長度,確保各種濃度範圍都能獲得最高準確度。
依據參考儀器驗證 NanoDrop One dsDNA 定量準確性。製備了濃度介於 3–28,000 ng/µL 的一系列 dsDNA 稀釋液,並在 NanoDrop One 和 Evolution 300 分光光譜儀上於 260 nm 以分光光度法進行定量。(A) 圖例顯示整個儀器濃度範圍的線性比較。迴歸線顯示 NanoDrop One dsDNA 濃度結果與在參考 Thermo Scientific Evolution 300 分光光譜儀上取得的值完全一致 (R2 = 0.9991)。(B) 另有提供放大圖例,顯示低濃度範圍(從 3–495 ng/μL 開始)的線性比較。迴歸線顯示與 Evolution 300 結果密切相關 (R2 = 1),而且在檢測範圍的下限具有出色的線性度。關於方法和更多詳細資料,請參閱 NanoDrop One 核酸技術說明。
樣本的純度可使用不同波長的吸光度比來評估。樣本汙染可能導致核酸濃度高估及/或下游程序或測量不準確。
UV 吸光度的主要純度比
比值 | 分析物 | 視為「純」 | 可能導致比值異常的因素 |
A260/A280 | 核酸 | DNA:~1.8 | 低比值表示的汙染物: · 蛋白質 · 殘餘酚或提取方法中使用的其他試劑 |
A260/A230 | 核酸 | DNA/RNA:~2.0–2.2 | 低比值表示的汙染物: · 蛋白質 · 碳水化合物殘留(通常是植物的問題) · 來自核酸提取的殘餘酚 · 殘餘胍(通常用於管柱式套件) · 用於沉澱的糖原 低比值表示的因素: · 空白測量發生問題 |
A260/A280 | 蛋白質 | ~0.6 | 高比值表示的汙染物: · 核酸 |
如圖所示,除純度比之外,不純物也會改變光譜曲線,使波峰移動。
汙染物導致光譜曲線移動
無汙染(A,紅色) 的純化 DNA 以及被胍 (B,綠色) 和酚 (C,褐色) 汙染之相同樣本的光譜。
執行 Acclaro Sample Intelligence 的 NanoDrop 儀器可使用這種全光譜資料來鑑定汙染物,如特色所述。
如需在美國及加拿大獲得技術支援,請致電 877-724-7690 轉 4,或將電子郵件寄至 NanoDrop 技術支援 (nanodrop@thermofisher.com)。如需國際協助,請寄電子郵件至 nanodrop@thermofisher.com 或聯絡您的當地 NanoDrop 經銷商。
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.