Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II

Os ensaios de PCR que usam reagentes de PCR convencionais exigem protocolos específicos para a Amplificação de cada fragmento de DNA devido à variação das temperaturas de anelamento de primer e diferentes durações da etapa de extensão. Portanto, ensaios individuais não podem ser amplificados na mesma execução de PCR. Com a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq, diferentes ensaios de PCR podem ser ciclados em paralelo usando o mesmo protocolo com a temperatura universal de anelamento de primer e a etapa de extensão selecionada para o fragmento mais longo a ser ampliado. Além disso, Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II é uma é uma polimerase de DNA “rápida” e; portanto, a combinação dessa polimerase de DNA de última geração e do protocolo universal permite uma ciclagem rápida de todos os ensaios em apenas 30 minutos.

Figura 1. Economia de tempo possibilitada pela ciclagem simultânea dos ensaios. Os ensaios de PCR que usam reagentes de PCR convencionais exigem protocolos específicos para a Amplificação de cada fragmento de DNA devido à variação das temperaturas de anelamento de primer e diferentes durações da etapa de extensão. Portanto, ensaios individuais não podem ser amplificados na mesma execução de PCR. Com a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq, diferentes ensaios de PCR podem ser ciclados em paralelo usando o mesmo protocolo com a temperatura universal de anelamento de primer e a etapa de extensão selecionada para o fragmento mais longo a ser ampliado. Além disso, a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq é uma polimerase de DNA rápida, proporcionando resultados de PCR em apenas 30 minutos.

Figura 2. A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II Platinum II Taq permite a ciclagem de amplicons mais curtos e mais longos juntos. Fragmentos de 132 bp, 251 bp, 1.005 bp e de 3,9 kb foram ampliados a partir de 50 ng do DNA genômico humano em reações de 50 μL usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou outras polimerases dede DNA de Hot-start. (A) NEB OneTaq Hot Start DNA Polymerase , (B) Qiagen Fast Cycling PCR Kit, (C) Roche FastStart Taq DNA Polymerase. O mesmo protocolo foi usado para todos os quatro alvos com as configurações de anelamento e de extensão indicadas. O marcador de tamanho é Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2.

A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II Platinum II Taq é uma enzima projetada com maior taxa de síntese de DNA. Portanto, com a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II, os resultados de PCR são geralmente mais de 2 vezes mais rápidos do que com outras polimerases de DNA de início a quente Taq.

Figura 3. A ciclagem rápida reduz o tempo de execução do PCR. A Amplificação de um fragmento de 529 bp a partir de 50 ng de DNA genômico humano em reações de 50 μL para 35 ciclos foi realizada com o uso de Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II e de Hot-Start DNA e de polimerases de DNA de Hot-start de outros fornecedores: (A) Kit de PCR Sigma-Aldrich KAPA2G de Hot-start rápido, (B) Polimerase de DNA de Hot-start NEB OneTaq, (C) Polimerase de DNA Promega GoTaq G2, (D) Toyobo Quick Taq HS DyeMix , (e) Polimerase de DNA Roche FastStart Taq e (F) Sigma-Aldrich JumpStart DNA Taq. Os tempos de ciclagem para cada polimerase são mostrados em roxo, enquanto os tempos de rampa no sistema de PCR ProFlex (taxa máxima da rampa do bloco - 6 °C/s) são mostrado A análise do produto de PCR em géis de agarose TAE a 1% é apresentada abaixo do gráfico. O marcador de tamanho é o ZipRuler Express DNA Ladder 2.

A alta sensibilidade da  Taq  Hot-Start DNA Polimerase Platinum II permite a amplificação bem-sucedida permite a Amplificação bem-sucedida de um produto específico em experimentos em que há uma quantidade limitada de material inicial ou o DNA do alvo está em baixa concentração na amostra. 

Figura 4. Alta sensibilidade e amplificação confiável a partir de baixas quantidades de DNA de entrada. Amplificação de um fragmento de 529 pb a partir de 0 (controle sem amostra); 0,016; 0,08; 0,4; 2; 10; 50; 250 ng de DNA genômico humano foram ampliados em reações de PCR de 50 μL usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou polimerases de DNA concorrentes (A-KAPA2G Fast HotStart, B- NEB OneTaq Hot Start , C– Promega GoTaq G2, D– Sigma JumpStart Taq e E– Takara Taq HS Perfect Mix). O número de cópias estimado é de aproximadamente 5 cópias por 0,016 ng de DNA genômico humano. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.

A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II foi projetada para resistência a inibidores e ajuda na amplificação bem-sucedida de amostra com pureza não ideal.

Figura 5. Resistência a inibidores. Amplificação de um fragmento de 1 kb a partir do DNA genômico humano usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou polimerases de DNA concorrentes (A- KAPA 2G Robust HotStart, B- NEB OneTaq Hot Start , C– Promega GoTaq G2 e D– Takara Taq versão de início a quente) em misturas de reação contendo: 1—ácido úmico (até concentração final de 1.3 µg/mL), 2—hemina (até a concentração final de 6 µM), 3—xilano (até a concentração final de 0,26 mg/mL) ou 4 - controle sem inibidor. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.

A formulação da Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II e Master Mixes 2X permitem a amplificação de uma gama de alvos, desde ricos em AT a ricos em GC. Um frasco separado do Platinum GC Enhancer é fornecido para amplificação específica e melhor rendimento de alvos com alto teor de GC.

Os fragmentos de PCR gerados pela Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II funcionam bem para sequenciamento de Sanger. O desempenho superior da enzima, o temperatura de anelamento universal de primers e a síntese rápida permitem a geração de amplicons de PCR para sequenciamento de Sanger, com facilidade e simplicidade.