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A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II Taq foi projetada para te ajudar a chegar no destino da sua pesquisa mais rápido. A utilização de temperatura de anelamento universal reduz as etapas de otimização e permite a ciclagem simultânea de diferentes ensaios. Uma combinação única de tampão inovador, polimerase de DNA Taq de alto desempenho e de tecnologia Hot start superior permite resultados de PCR excepcionais, mesmo nas aplicações mais exigentes.
Clique nos botões abaixo e descubra os benefícios da Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II.
Os ensaios de PCR que usam reagentes de PCR convencionais exigem protocolos específicos para a Amplificação de cada fragmento de DNA devido à variação das temperaturas de anelamento de primer e diferentes durações da etapa de extensão. Portanto, ensaios individuais não podem ser amplificados na mesma execução de PCR. Com a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq, diferentes ensaios de PCR podem ser ciclados em paralelo usando o mesmo protocolo com a temperatura universal de anelamento de primer e a etapa de extensão selecionada para o fragmento mais longo a ser ampliado. Além disso, Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II é uma é uma polimerase de DNA “rápida” e; portanto, a combinação dessa polimerase de DNA de última geração e do protocolo universal permite uma ciclagem rápida de todos os ensaios em apenas 30 minutos.
Figura 1. Economia de tempo possibilitada pela ciclagem simultânea dos ensaios. Os ensaios de PCR que usam reagentes de PCR convencionais exigem protocolos específicos para a Amplificação de cada fragmento de DNA devido à variação das temperaturas de anelamento de primer e diferentes durações da etapa de extensão. Portanto, ensaios individuais não podem ser amplificados na mesma execução de PCR. Com a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq, diferentes ensaios de PCR podem ser ciclados em paralelo usando o mesmo protocolo com a temperatura universal de anelamento de primer e a etapa de extensão selecionada para o fragmento mais longo a ser ampliado. Além disso, a polimerase de DNA de Hot-Start Platinum II Taq é uma polimerase de DNA rápida, proporcionando resultados de PCR em apenas 30 minutos.
Figura 2. A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II Platinum II Taq permite a ciclagem de amplicons mais curtos e mais longos juntos. Fragmentos de 132 bp, 251 bp, 1.005 bp e de 3,9 kb foram ampliados a partir de 50 ng do DNA genômico humano em reações de 50 μL usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou outras polimerases dede DNA de Hot-start. (A) NEB OneTaq Hot Start DNA Polymerase , (B) Qiagen Fast Cycling PCR Kit, (C) Roche FastStart Taq DNA Polymerase. O mesmo protocolo foi usado para todos os quatro alvos com as configurações de anelamento e de extensão indicadas. O marcador de tamanho é Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2.
A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II Platinum II Taq é uma enzima projetada com maior taxa de síntese de DNA. Portanto, com a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II, os resultados de PCR são geralmente mais de 2 vezes mais rápidos do que com outras polimerases de DNA de início a quente Taq.
Figura 3. A ciclagem rápida reduz o tempo de execução do PCR. A Amplificação de um fragmento de 529 bp a partir de 50 ng de DNA genômico humano em reações de 50 μL para 35 ciclos foi realizada com o uso de Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II e de Hot-Start DNA e de polimerases de DNA de Hot-start de outros fornecedores: (A) Kit de PCR Sigma-Aldrich KAPA2G de Hot-start rápido, (B) Polimerase de DNA de Hot-start NEB OneTaq, (C) Polimerase de DNA Promega GoTaq G2, (D) Toyobo Quick Taq HS DyeMix , (e) Polimerase de DNA Roche FastStart Taq e (F) Sigma-Aldrich JumpStart DNA Taq. Os tempos de ciclagem para cada polimerase são mostrados em roxo, enquanto os tempos de rampa no sistema de PCR ProFlex (taxa máxima da rampa do bloco - 6 °C/s) são mostrado A análise do produto de PCR em géis de agarose TAE a 1% é apresentada abaixo do gráfico. O marcador de tamanho é o ZipRuler Express DNA Ladder 2.
A alta sensibilidade da Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II permite a amplificação bem-sucedida permite a Amplificação bem-sucedida de um produto específico em experimentos em que há uma quantidade limitada de material inicial ou o DNA do alvo está em baixa concentração na amostra.
Figura 4. Alta sensibilidade e amplificação confiável a partir de baixas quantidades de DNA de entrada. Amplificação de um fragmento de 529 pb a partir de 0 (controle sem amostra); 0,016; 0,08; 0,4; 2; 10; 50; 250 ng de DNA genômico humano foram ampliados em reações de PCR de 50 μL usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou polimerases de DNA concorrentes (A-KAPA2G Fast HotStart, B- NEB OneTaq Hot Start , C– Promega GoTaq G2, D– Sigma JumpStart Taq e E– Takara Taq HS Perfect Mix). O número de cópias estimado é de aproximadamente 5 cópias por 0,016 ng de DNA genômico humano. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.
A Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II foi projetada para resistência a inibidores e ajuda na amplificação bem-sucedida de amostra com pureza não ideal.
Figura 5. Resistência a inibidores. Amplificação de um fragmento de 1 kb a partir do DNA genômico humano usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II ou polimerases de DNA concorrentes (A- KAPA 2G Robust HotStart, B- NEB OneTaq Hot Start , C– Promega GoTaq G2 e D– Takara Taq versão de início a quente) em misturas de reação contendo: 1—ácido úmico (até concentração final de 1.3 µg/mL), 2—hemina (até a concentração final de 6 µM), 3—xilano (até a concentração final de 0,26 mg/mL) ou 4 - controle sem inibidor. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.
Figura 6. Amplificação do DNA extraído de amostras de tecido FFPE. Amplificação de um fragmento de 527 bp de diferentes quantidades de DNA extraídas de amostras de tecido FFPE de camundongo usando a Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II. O O kit de isolamento de ácido nucleico total RecoverAll para FFPE foi usado para extração de DNA. NTC: Controle sem amostra PC: Controle positivo de 1 ng de DNA genômico de camundongo purificado. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.
A formulação da Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II e Master Mixes 2X permitem a amplificação de uma gama de alvos, desde ricos em AT a ricos em GC. Um frasco separado do Platinum GC Enhancer é fornecido para amplificação específica e melhor rendimento de alvos com alto teor de GC.
Figura 7. Amplificação robusta de alvos ricos em AT e ricos em CG. Vários fragmentos de DNA com conteúdo crescente de GC (indicado acima das linhas correspondentes) foram ampliados a partir de 100 ng de DNA genômico humano em reações de PCR de 50 µL. O Platinum GC Enhancer foi usado para alvos com >65% de GC. O marcador de peso molecular é ZipRuler Express DNA Ladder 2.
Os fragmentos de PCR gerados pela Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II funcionam bem para sequenciamento de Sanger. O desempenho superior da enzima, o temperatura de anelamento universal de primers e a síntese rápida permitem a geração de amplicons de PCR para sequenciamento de Sanger, com facilidade e simplicidade.
Figura 8. Resultados de sequenciamento de Sanger de alta qualidade. Um fragmento de PCR de 1,6 kb ampliado pela Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II foi sequenciado por Sanger usando oanalisador genético 3130xl Applied Biosystems. São mostrados dados pelo chamador base de KB do software de análise de sequenciamento. A CRL (Clear-Range Read Length, Extensão de leitura de intervalo livre) é definida como o segmento mais longo e ininterrupto de bases em um determinado QV (Quality Value, valor de qualidade). QV20 corresponde a 1% de probabilidade de um erro de chamada de base e QV30. O QV>20 é considerado de alta qualidade e aceitável na maioria dos casos.
Saiba mais sobre problemas comuns na Amplificação do PCR e como é possível resolvê-los com o PCR de Hot-start. Descubra também diferentes tipos de modificações enzimáticas de Hot-start e como escolher uma Hot-start DNA polimerase adequada para o seu PCR.
A Taq DNA polimerase Platinum tem sido considerada confiável por pesquisadores há mais de duas décadas e tem sido usada em vários milhares de publicações. A Taq DNA Hot-Start Polimerase Platinum II é a próxima geração de polimerase de DNA de Hot-start, recém-projetada para um desempenho rápido e robusto. Recomendamos que os investigadores que iniciam novos projetos usem a Taq DNA polimerase Platinum II para que possam se beneficiar de seu desempenho superior, resumido na tabela abaixo.
Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II | Taq DNA polimerase Platinum | |
---|---|---|
Protocolo de anelamento universal | Sim | Não |
Velocidade | 15 s/kb | 1 min/kb |
Etapa de extensão flexívela | Sim | Não |
Tolerância a inibidores | Sim | Não |
Comprimento do alvo | Até 5 kb | Até 5 kb |
Modificação de Hot-start | Mediada por anticorpos | Mediada por anticorpos |
Fidelidade versus Taq DNA polimerase | 1x | 1x |
Protrusões de amplicons | 3’A | 3’A |
Estabilidade das reações prontas de PCR | 24 h | 24 h |
Amplificação rica em GC | Sim | Sim |
Certificado baixo nível de DNA humano e bacteriano residuald | Sim <= 1 cópia de gDNA bacteriano / unidade de enzima | Não |
Formato dos matermix | Incolor/verdeb | Incolor/verdeb |
Formatos de enzimas isoladas | Incolorc | Incolor/verdeb |
aA etapa de extensão pode ser estendida até 60 s/kb, sem efeito na especificidade. bCarregamento direto de gel com opções de tampão verde. ctampão verde disponível como item separado para utilização com outras enzimas para carregamento direto de gel. ddurante a fabricação da Taq Hot-Start DNA Polimerase Platinum II , medidas rigorosas são tomadas para controlar e verificar pela qPCR que não há mais de uma cópia de DNA genômico bacteriano residual por unidade da polimerase.
Uso | Publicações |
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RT-PCR de duas etapas com células-tronco pluripotentes humanas e de camundongos | Esseltine JL, Brooks CR, Edwards NA et al. (2020) Dynamic regulation of connexins in stem cell pluripotency. Stem Cells 38:52–66. |
Clonagem do sítio de ligação de microRNA de DNA bovino | Shen X, Tang J, Ru W et al. (2021) CircINSR regulates fetal bovine muscle and fat development. Front Cell Dev Bio 8:615638. |
Uso | Publicações |
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PCR de gene de lampreia marinha rico em GC, seguido por clonagem e sequenciamento | Gong N, Ferreira-Martins D, McCormick SD et al. (2020) Divergent genes encoding the putative receptors for growth hormone and prolactin in sea lamprey display distinct patterns of expression. Sci Rep 10(1):1674. |
RT-PCR de duas etapas com cDNA de células primárias de cabra para análise de expressão gênica | Luan Z, Fan X, Song H et al. (2019) Testosterone promotes GPX5 expression of goat epididymal epithelial cells cultured in vitro. In Vitro Cell Dev Biol Anim 55(9):677–685. |
Ensaios de imunoprecipitação de cromatina (ChIP) | Sun D. (2019) Chromatin Immunoprecipitation Assay to Analyze the Effect of G-Quadruplex Interactive Agents on the Binding of RNA Polymerase II and Transcription Factors to a Target Promoter Region. Methods Mol Biol 2035:233–242. |
Uso | Publicações |
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PCR de DNA de flagelados ricos em GC | Hackl T, Martin R, Barenhoff K et al. (2020) Four high-quality draft genome assemblies of the marine heterotrophic nanoflagellate Cafeteria roenbergensis. Sci Data 7(1):29. |
Subclonagem de fragmento de DNA genômico de E. coli | Prahlad J, Yuan Y, Lin J et al. (2020) The DUF328 family member YaaA is a DNA-binding protein with a novel fold. J Biol Chem 295(41):14236–14247. |
PCR de DNA mitocondrial a partir de amostras de sangue | Wharton D, Morey KC, Hanner R. (2021) Maternal inheritance of mitochondrial DNA in mice after inter-species hybridization and 138 generations of backcrossing. Mitochondrial DNA A DNA Mapp Seq Anal 32(2):73–75. |
Uso | Publicações |
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PCR com DNA de amostras FFPE para detecção de sequências virais (EBV, HPV) | Gupta I, Al Farsi H, Jabeen A et al. (2020) High-Risk Human Papillomaviruses and Epstein-Barr Virus in Colorectal Cancer and Their Association with Clinicopathological Status. Pathogens 9(6):452. |
Amplificação de DNA de adenovírus de aves a partir de amostras alantóicas, seguida de sequenciamento Sanger | Wibowo MH, Sahesty A, Mahardika BK et al. (2019) Epizootiology, Clinical Signs, and Phylogenetic Analysis of Fowl Adenovirus in Chicken Farms in Indonesia from 2018 to 2019. Avian Dis 63(4):619–624. |
Uso | Publicações |
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