Características Bigfoot Spectral Cell Sorter

Con tasas de clasificación que superan los 70.000 eventos por segundo (eps) y tasas de análisis de más de 100.000 eps, el clasificador de células espectral Bigfoot presenta una velocidad espectacular. El clasificador es capaz de clasificar 6 vías en tubos, clasificar 4 vías en placas de 96 pocillos, clasificar 8 vías en placas de 384 pocillos o de clasificar directamente en placas de 1536 pocillos. Además, la clasificación virtual de 18 vías permite a los investigadores separar varias poblaciones a partir de una sola muestra o de diferentes muestras. Para clasificaciones a granel, la función InfiniSort permite clasificar varias series de tubos o placas en secuencia.

El clasificador de células espectral Bigfoot puede clasificar una placa de 96 pocillos en menos de 8 segundos y una placa de 384 pocillos en menos de 11 segundos. 

La clasificación de placas no solo es rápida, también es extraordinariamente precisa. Con el método de la PHR, con confirmación visual de la deposición de gotas mediante la conversión colorimétrica del sustrato TMB, hemos demostrado que una sola gota se puede clasificar en pequeños volúmenes en placas de PCR de 96 pocillos y placas de PCR de 384 pocillos con una precisión de focalización del 100 %. Nuestro libro blanco explica las innovaciones en el diseño que desarrollamos para obtener una clasificación tan rápida y precisa.

El clasificador de células espectrales Bigfoot cuenta con una cabina de biocontención integrada de clase II, que cumple con las normas de protección de productos y personal funcionales equivalentes que una cabina de bioseguridad de clase II tipo A2 definido por el estándar internacional 49 de la National Sanitation Foundation. La cabina de diseño personalizado protege a los operadores y las muestras de aerosoles sin comprometer el rendimiento del clasificador de parámetros elevados ni afectar al flujo de trabajo. Un sistema de gestión de aerosoles independiente cumple las directrices de ISAC para los clasificadores celulares.

El diseño reflexivo ha convertido la biocontención de un complemento engorroso a una parte integrada del instrumento Bigfoot y de los flujos de trabajo del usuario. El bastidor ajustable se puede elevar o bajar fácilmente para acceder de forma segura al área de la muestra o a las boquillas de clasificación. Un panel de control interno en el área de la muestra limita la necesidad de que el operador entre y salga del campo de contención. El aire que fluye a través de la cabina se ha agotado en el laboratorio o, mediante una conexión opcional de campana, a través de un sistema de escape externo.

Todas las configuraciones del clasificador de células espectrales Bigfoot funcionan como clasificadores de células convencionales, aplicando compensación para tener en cuenta el excedente espectral de un fluoróforo (color) en otro detector de fluoróforos. El software Sasquatch crea y aplica una matriz de compensación de hasta 60 × 60 (utilizando los 60 detectores) para experimentos de alto color. Esto facilita la migración de experimentos existentes convencionales de citometría de flujo a su instrumento Bigfoot, sin necesidad de cambiar protocolos o métodos de análisis. Aún así, obtendrá las ventajas de la clasificación celular de alto rendimiento y facilidad de uso con biocontención integrada.

Además, la mayor parte de las configuraciones de Bigfoot permiten la citometría de flujo espectral, mediante el desmezclado espectral en lugar de la compensación para desagregar las señales de diferentes fluoróforos. Al analizar el espectro completo de la señal de cada fluoróforo de su experimento, el análisis espectral le permite utilizar fluoróforos con señales similares en el mismo experimento, lo que aumenta el número de parámetros que puede analizar. Esto resulta especialmente útil para el inmunofenotipado profundo, la detección de biomarcadores y otras aplicaciones.

Con las configuraciones espectrales Bigfoot, puede ejecutar experimentos tanto convencionales como espectrales en el mismo clasificador y convertir experimentos de convencionales a espectrales cuando necesite más parámetros.

Una ventaja importante de la óptica espectral y el análisis es un aumento espectacular del número de parámetros (fluoróforos) que se pueden detectar en un solo experimento. El clasificador de células Bigfoot se puede configurar con hasta nueve láseres y 60 detectores, lo que permite la clasificación espectral y el análisis de poblaciones celulares en paneles expansivos. Por ejemplo, la figura muestra un gráfico de firma espectral combinado para 56 fluoróforos, que muestra no solo cómo la firma de cada fluoróforo es única, sino también dónde se pueden añadir fluoróforos adicionales.

Una segunda ventaja del análisis y el desmezclado espectral es que la autofluorescencia se puede tratar como otro fluoróforo con su propia firma espectral. A diferencia de la citometría de flujo convencional, la autofluorescencia no limita las opciones de colorante y se puede evaluar o eliminar en función de las necesidades del experimento.

Para un examen detallado del hardware, la óptica, el análisis, las ventajas y las desventajas de la citometría de flujo espectral, consulte el artículo Spectral Flow Cytometry Fundamentals (Fundamentos de la citometría de flujo espectral) en nuestro Centro de aprendizaje de citometría de flujo.

Algunos analizadores de células espectrales llevan a cabo el desmezclado después de que se adquieran todas las células, pero esto no es adecuado para la clasificación celular, ya que las células se clasifican a medida que se adquieren y se procesan. El clasificador de células espectrales Bigfoot realiza el desmezclado en tiempo real y aplica los resultados a la clasificación. Una arquitectura de procesamiento de datos masiva canalizada y en paralelo elimina las anulaciones repentinas que pueden darse cuando el desmezclado no puede mantenerse al día con la velocidad de eventos. La alta resolución del algoritmo del desmezclado mejora la pureza de las poblaciones celulares clasificadas.

El clasificador de células espectrales Bigfoot es especialmente adecuado para aplicaciones de clasificación que requieran numerosos parámetros o un alto rendimiento.

Los asistentes avanzados de automatización y software permiten a los operadores con todos los niveles de conocimiento utilizar y controlar el sistema con confianza. Por ejemplo, la formación y la secuenciación temporal de las gotas que contienen células, el retraso de la caída entre la interrogación de la célula y su separación del flujo que se va a ordenar, es crucial para garantizar que las células correctas se clasifican en los tubos correctos. Los sistemas de control integrados garantizan automáticamente una persistencia óptima en la formación de las gotas y la estabilización de la posición con el tiempo, manteniendo un retraso de la caída preciso y estable durante el día.

Para agilizar el flujo de trabajo y reducir los errores del usuario, el inicio automatizado, la calibración de flujo, el control de calidad y el retraso de la caída simplifican la configuración de clasificación y permiten programar el sistema para que esté listo cuando usted lo esté. Los componentes electrónicos configuran automáticamente un retraso óptimo del láser para diferentes tamaños y presiones de boquilla. Si se detecta una burbuja, el sistema lo notifica al operador y detiene la clasificación para conservar las muestras valiosas. El control de temperatura integrado (de 4 a 37 °C) y la agitación conservan la integridad de la entrada de muestras, mientras que el control de temperatura de salida conserva la viabilidad de las muestras clasificadas.

El software Sasquatch (SQ) presenta una interfaz de usuario clara con un flujo de trabajo intuitivo, lo que simplifica la adquisición, el análisis y la clasificación. Un selector de fluoróforo avanzado ayuda con el diseño para experimentos tanto estándar como espectrales y advierte de posibles conflictos. El asistente de experimentos ayuda a ejecutar controles, identificar posibles problemas y aplicar los algoritmos de desmezclado.

Las características de análisis incluyen superposiciones, sincronización de colores, backgating, clasificación de índices y gráficos de proporción; además, el software genera archivos estándar de citometría de flujo (FCS) compatibles con otros paquetes de software de análisis. El software también produce informes claros sobre el uso del sistema, el control de calidad, las tendencias y un resumen de la clasificación.

El sistema Bigfoot ofrece muestreo desde seis posiciones de entrada que detectan automáticamente el tamaño del tubo (1,5, 5 o 15 ml) en función del adaptador utilizado. El cargador de multimuestras permite cargar los controles de un experimento de 5 a 10 colores en uno o dos conjuntos. La capacidad de carga de varios tubos es especialmente eficaz para estudiar 20 o más parámetros de fluorescencia, lo cual es cada vez más común en citometría de flujo. Todos los subsistemas relacionados con muestras, incluido el cargador de varias muestras, se encuentran dentro de la cabina de bioseguridad totalmente integrada para conseguir una seguridad, eficacia y rendimiento óptimos.

Un tubo de entrada de muestras está reservado para las microesferas de calibración, lo que elimina la necesidad de recuperar las microesferas de un refrigerador, diluir y preparar un tubo para la configuración diaria. Una estación de lavado integrada lleva a cabo un ciclo completo de lavado y lavado posterior en 8 segundos, lo que da como resultado un nivel de arrastre extremadamente bajo entre las muestras. Cuando el volumen de una muestra es bajo, el detector de burbujas del final de la muestra responde en un plazo de 50 ms para detener el muestreo, lavar la sonda y pasar al siguiente tubo sin interacción del usuario.

Del lado de salida de clasificación, la detección de chorro en el aire del clasificador de células espectrales Bigfoot es suave con células frágiles para maximizar la viabilidad a velocidades de clasificación altas sin reducir el rendimiento. La selección precisa de una sola gota garantiza una precisión, recuperación y velocidad para la clasificación de una sola célula sin precedentes. Los soportes de salida de clasificación configurables incluyen tubos de 1,5, 5, 15 y 50 ml, placas de micropocillos de hasta 1536 pocillos, portaobjetos de microscopio y chips 10x Genomics. Un asistente de puntas de intercambio simplifica la preparación de puntas de boquilla de 50, 70, 100, 120 y 150 μm.

Diseñado para las aplicaciones actuales de clasificación celular de simples a complejas, el clasificador de células espectrales Bigfoot dispone de funciones de diseño pensadas para aumentar la flexibilidad y el rendimiento y agilizar el flujo de trabajo. Por ejemplo, las microesferas de calibración se conservan preparadas para su uso en una de las seis estaciones de muestreo integradas, lo que elimina la necesidad de preparar una nueva solución de calibración cada día. (Simplemente se debe sustituir el vial gastado con uno nuevo aproximadamente una vez al mes). Dentro del campo de la biocontención hay un amplio espacio de cubierta para gradillas y placas de muestras, así como acceso a un mezclador de vórtices de muestras integrado, gradilla para tubos y bolsa de riesgo biológico. De este modo, el operador puede completar muchas tareas rutinarias sin romper la barrera de seguridad.

Mientras que el clasificador de células espectrales Bigfoot está diseñado para adaptarse al flujo de trabajo de un laboratorio individual, también es adecuado como fuerza de trabajo de clasificación celular en unas instalaciones importantes de citometría de flujo.

No tiene que creer lo que decimos. En este vídeo, tres gerentes de instalaciones importantes que participaron en nuestro programa de pruebas beta compartieron sus experiencias sobre la incorporación del clasificador de células espectrales Bigfoot a sus laboratorios. Compartieron sus conocimientos sobre cómo el sistema Bigfoot se ha hecho un hueco entre los clasificadores celulares que gestionan gracias a su rendimiento, automatización, facilidad de uso, tamaño reducido, bajo nivel de ruido y flexibilidad. “Lo llamo la navaja suiza de los citómetros”, dijo Rachael Walker, del Instituto Babraham de Cambridge, Inglaterra.