Recombinant Protein Definition and Information

Los bioensayos están destinados a medir la actividad biológica de un factor de crecimiento o citoquina determinado. En la mayoría de los casos, los bioensayos son pruebas celulares que emplean diferentes células indicadoras, como células primarias o estirpes celulares. Entre los bioensayos que se utilizan con mayor frecuencia se encuentran los ensayos de proliferación celular, los ensayos de quimiotaxis, los ensayos de producción de citoquinas y los ensayos de citotoxicidad. La actividad biológica de una citoquina determinada se expresa como ED₅₀, que representa la concentración de la citoquina que induce el 50 % de la respuesta máxima.

The specific activity of a biologically active protein can be determined using the following equation:
1 x 10⁶ / ED₅₀ (ng/mL) = specific activity (units/mg)

The ED₅₀ (AKA EC₅₀) can be found on the CoA for the recombinant protein, but we advise determining the ED₅₀ of a given recombinant protein in your functional assay system.

For additional information on ED₅₀ and its relationship with specific activity, please refer to our Tech Tip.

En primer lugar, centrifugue el recipiente para concentrar el polvo en el fondo del tubo. En general, se recomienda llevar a cabo la reconstitución a una concentración de 0,1 a 1,0 mg/mL. La mayoría de las proteínas se pueden reconstituir con la incorporación de agua destilada estéril. Sin embargo, la hoja de datos del producto o CoA indicará cuándo se requiere un diluyente distinto al agua. En estos documentos también se encuentran las soluciones recomendadas, las concentraciones de proteínas portadoras y las condiciones de almacenamiento prolongado.

En general, se recomienda conservar las proteínas recombinantes liofilizadas a -20 °C, pero se pueden almacenar a corto plazo a 4 °C o a temperatura ambiente. Para soluciones proteicas reconstituidas, se recomienda hacer alícuotas de trabajo que contengan al menos 10 μL de solución de proteína y almacénelas a una temperatura de entre - 20 °C y - 80 °C. No lleve a cabo múltiples ciclos de congelación/descongelación. Las instrucciones específicas del producto sobre el almacenamiento de proteínas recombinantes liofilizadas y reconstituidas se recogen en el manual del producto, en la hoja de datos o en el certificado de análisis (CoA).

Las proteínas recombinantes suelen formularse sin proteínas portadoras ni aditivos (por ejemplo, BSA, HSA, sacarosa, etc.). Como resultado, durante la liofilización, el producto de la proteína puede depositarse en el vial como una película delgada, y a veces invisible, en lugar de un sedimento. El tamaño del sedimento, si lo hay, no está directamente relacionado con la cantidad de proteína recombinante del vial.

Para garantizar la recuperación completa del producto proteico, antes de abrir un vial de proteína recombinante liofilizada, se recomienda su centrifugación durante 20 a 30 segundos para que se mueva cualquier proteína que pueda quedarse adherida al tapón o al lado del vial y llevarla al fondo del vial. Después de la reconstitución, puede confirmar la presencia de proteína en el producto analizando una pequeña cantidad en SDS-PAGE. En general, debería poder ver una banda de proteínas con el tamaño previsto con tan solo 10 ng de proteína cargada en un gel de acrilamida.