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商业供应的可冻干（Lyo-ready）DNA 聚合酶和反转录酶
Thermo Fisher Scientific 可提供一系列的可冻干 (lyo-ready) 反转录酶 (RT) 和热稳定性 DNA 聚合酶，带来：
- 为分子诊断产品设计带来极大灵活性，最大限度保持与常规酶相同的性能
- 对检测结果更有信心，将细菌、人或质粒 DNA 污染风险最小化
- 经 ISO 13485 质量管理体系认证，确保高质量标准和批间稳定性
- 定制化解决方案，可按照您的特定需求进行定制，包括不同的浓度、体积或包装
- 如果需要，可以将完整的检测试剂冻干到 PCR 板或反应管中
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可冻干（Lyo-ready）反转录酶
| Lyo-ready SuperScript IV RT | Lyo-ready SuperScript III RT | |
|---|---|---|
| 最佳反应温度 | 50–55°C | 50°C |
| 反应时间 | 10 分钟 | 50 分钟 |
| 灵敏度 | 出众 | 优 |
| 抑制剂耐受性 | 出众 | 中等 |
| 是否可提供样品 | 是 | 是 |
灵敏度，或者从低起始量 RNA 样本中进行 cDNA 合成的能力，是反转录酶的重要属性。lyo-ready SuperScript IV RT 的高灵敏度对于样本量有限或低浓度靶标 RNA 的检测非常有利。扩增曲线（图1）说明了在1.25 ng 至0.125 fg GAPDH RNA 的宽动态范围内，SuperScript IV RT 的三种不同形式（含甘油；可冻干；冻干复融）的高灵敏度和高线性度。
图 1.使用 可冻干、冻干复融的 SuperScript IV RT 进行 cDNA 合成的 高灵敏度和高线性度。使用1.25 ng – 0.125 fg GAPDH RNA 作为模板，分别用含甘油、可冻干、冻干复融的 SuperScript IV RT 进行 两步法 RT-qPCR，按照推荐的产品使用方案。
RNA 样本质量是决定下游检测分析准确性和相关性的主要因素之一。但从困难样本（如常用于诊断和生物医学研究中的石蜡包埋样本、口腔拭子和器官活检样本）中却难以获得高质量的 RNA。在样本处理过程或核酸提取过程中，RNA 的完整性可能会受影响。
一款高效的反转录酶应该能够对各种类型 RNA 样本进行反转录 ，包括在纯化过程中发生降解的样本。前期提供的数据已经证明，与市面上其它反转录酶相比，SuperScript IV RT 在降解 RNA 的反转录方面强劲而高效。在这里，我们展示了对于降解 RNA 的 cDNA 合成，lyo-ready SuperScript IV RT 具有与常规形式 SuperScript IV RT 同样高效（图2）。
图2 从具有挑战性的 RNA 样本中高效合成 cDNA。降解RNA的两步RT-qPCR反应（RIN：含甘油的常规 SuperScript IV RT (橙色) 对人细胞降解 RNA（RIN：2-3）进行两步法 RT-qPCR 反应。对每种 RNA 样本进行三次 RT 反应，将 10% 的 cDNA 产物加入 TaqMan Assay 中以检测GAPDH、PPIA、HPRT1 和 TBP 靶标。完成三次 qPCR 反应后，计算每种 RNA 样本的平均 Cq 值。
抑制剂（例如 RNA 纯化中的微量试剂）可能会在反转录过程中引起干扰。抑制剂也可能是生物样本中的固有物质，如血液中的血红素。为了检测这些抑制性化合物如何影响反转录效率，在 oligo (dT)20 退火步骤之前，将各种抑制剂添加到 Jurkat 总RNA中。图3 证明了存在多种抑制剂的情况下，lyo-ready SuperiIV RT 比其它同类反转录酶性能表现更好，并且即使在冻干和复融后仍保持这种性能。
图 3.耐受抑制剂添加了不同抑制剂的 Jurkat 总 RNA 与 PGK1 基因特异性引物一起用于两步法 RT-qPCR 中。根据每个反转录酶供应商推荐的方案进行 cDNA 合成。所用的抑制剂：SDS、盐酸胍 (GuHCl) 和 血红素。NIC - 无抑制剂对照。
SuperScript IV 和 SuperScript III 可冻干酶具有增强的灵敏度和缩短的反应时间，因此被推荐用于高要求的 RT-qPCR 分子检测。 除此之外，我们可冻干反转录酶产品线中还包括 RevertAid (M-MuLV) 和 Maxima 反转录酶。如果你有兴趣了解更多，请通过 MDxenzymes@thermofisher.com 联系我们。
灵敏度，或者从低起始量 RNA 样本中进行 cDNA 合成的能力，是反转录酶的重要属性。lyo-ready SuperScript IV RT 的高灵敏度对于样本量有限或低浓度靶标 RNA 的检测非常有利。扩增曲线（图1）说明了在1.25 ng 至0.125 fg GAPDH RNA 的宽动态范围内，SuperScript IV RT 的三种不同形式（含甘油；可冻干；冻干复融）的高灵敏度和高线性度。
图 1.使用 可冻干、冻干复融的 SuperScript IV RT 进行 cDNA 合成的 高灵敏度和高线性度。使用1.25 ng – 0.125 fg GAPDH RNA 作为模板，分别用含甘油、可冻干、冻干复融的 SuperScript IV RT 进行 两步法 RT-qPCR，按照推荐的产品使用方案。
RNA 样本质量是决定下游检测分析准确性和相关性的主要因素之一。但从困难样本（如常用于诊断和生物医学研究中的石蜡包埋样本、口腔拭子和器官活检样本）中却难以获得高质量的 RNA。在样本处理过程或核酸提取过程中，RNA 的完整性可能会受影响。
一款高效的反转录酶应该能够对各种类型 RNA 样本进行反转录 ，包括在纯化过程中发生降解的样本。前期提供的数据已经证明，与市面上其它反转录酶相比，SuperScript IV RT 在降解 RNA 的反转录方面强劲而高效。在这里，我们展示了对于降解 RNA 的 cDNA 合成，lyo-ready SuperScript IV RT 具有与常规形式 SuperScript IV RT 同样高效（图2）。
图2 从具有挑战性的 RNA 样本中高效合成 cDNA。降解RNA的两步RT-qPCR反应（RIN：含甘油的常规 SuperScript IV RT (橙色) 对人细胞降解 RNA（RIN：2-3）进行两步法 RT-qPCR 反应。对每种 RNA 样本进行三次 RT 反应，将 10% 的 cDNA 产物加入 TaqMan Assay 中以检测GAPDH、PPIA、HPRT1 和 TBP 靶标。完成三次 qPCR 反应后，计算每种 RNA 样本的平均 Cq 值。
抑制剂（例如 RNA 纯化中的微量试剂）可能会在反转录过程中引起干扰。抑制剂也可能是生物样本中的固有物质，如血液中的血红素。为了检测这些抑制性化合物如何影响反转录效率，在 oligo (dT)20 退火步骤之前，将各种抑制剂添加到 Jurkat 总RNA中。图3 证明了存在多种抑制剂的情况下，lyo-ready SuperiIV RT 比其它同类反转录酶性能表现更好，并且即使在冻干和复融后仍保持这种性能。
图 3.耐受抑制剂添加了不同抑制剂的 Jurkat 总 RNA 与 PGK1 基因特异性引物一起用于两步法 RT-qPCR 中。根据每个反转录酶供应商推荐的方案进行 cDNA 合成。所用的抑制剂：SDS、盐酸胍 (GuHCl) 和 血红素。NIC - 无抑制剂对照。
SuperScript IV 和 SuperScript III 可冻干酶具有增强的灵敏度和缩短的反应时间，因此被推荐用于高要求的 RT-qPCR 分子检测。 除此之外，我们可冻干反转录酶产品线中还包括 RevertAid (M-MuLV) 和 Maxima 反转录酶。如果你有兴趣了解更多，请通过 MDxenzymes@thermofisher.com 联系我们。
可冻干 Taq DNA 聚合酶
| Platinum II Taq DNA 聚合酶 | Platinum Taq DNA 聚合酶 | LibertyTaq DNA 聚合酶 | |
|---|---|---|---|
| 热启动 PCR | 抗体修饰 | 抗体修饰 | 专利配方 |
| 激活时间 | 30 秒到 2 分钟 | 2 分钟 | 0 分钟 |
| 灵敏度 | 出众 | 优 | 中 |
| 特异性 | 出众 | 优 | 中 |
| 是否可提供样品 | 是 | 是 | 是 |
Platinum Taq DNA 聚合酶 使用严格的基于抗体的热启动技术，可以高准确度检测低丰度目标DNA。同样，可冻干 Platinum Taq CG DNA 聚合酶也具有与 Platinum Taq DNA 聚合酶相同的优异性能，但兼容冻干处理（图4）。
图 4.可冻干 Platinum Taq CG DNA 聚合酶的高灵敏性使用可冻干 Taq CG 和 Platinum Taq DNA 聚合酶从不同含量的人类 DNA 扩增199 bp 片段（A）和 E.coli DNA 的 639bp 片段（B）。 可冻干酶形式提供了与 Platinum Taq 聚合酶标准形式相当的灵敏度、特异性和产量。NTC = 无模板对照DNA 分子量标准：Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder
可冻干的 Platinum Taq 和 LibertyTaq 热启动 DNA 聚合酶经常被用于基于 qPCR 的分析。这些酶能够在广泛的动态范围内能快速激活，提供稳定、灵敏和特异性地扩增。
图 5.高效且可重复的 qPCR 分析。使用 Applied Biosystems TaqMan Assays 检测人类PPP1CA和不同量的人类 DNA，评估可冻干 LibertyTaq（蓝色曲线）和 Invitrogen Platinum Taq（红色曲线）DNA 聚合酶在 qPCR 中的性能。 使用这两种 DNA 聚合酶均可实现有效且灵敏的扩增。在无模板对照中未观察到扩增，表明基于这种检测方法，试剂中无人类 DNA 污染。qPCR 反应的效率范围为90-110%，确定系数R 2≥0.990。
严格的生产流程和专利的低甘油配方使得可冻干 Platinum Taq 和 LibertyTaq DNA 聚合酶即使在非最佳运输和储存条件下也表现出高稳定性。在多次冻融循环后 DNA 聚合酶的稳定性可确保核酸检测产品的质量和性能。
图 6.LibertyTaq DNA 聚合酶在不同运输条件下的稳定性。为了模拟不同的运输和储存条件，在将其用于E.coli 23S TaqMan Assays（蓝色曲线）之前，对可冻干 LibertyTaq DNA 聚合酶进行 20 次冻融循环。 然后，将其性能与–°20C 下储存的可冻干 LibertyTaq DNA 聚合酶的性能（红色曲线）进行了比较。结果表明，多次冻融循环不影响酶的性能。
Platinum Taq DNA 聚合酶 使用严格的基于抗体的热启动技术，可以高准确度检测低丰度目标DNA。同样，可冻干 Platinum Taq CG DNA 聚合酶也具有与 Platinum Taq DNA 聚合酶相同的优异性能，但兼容冻干处理（图4）。
图 4.可冻干 Platinum Taq CG DNA 聚合酶的高灵敏性使用可冻干 Taq CG 和 Platinum Taq DNA 聚合酶从不同含量的人类 DNA 扩增199 bp 片段（A）和 E.coli DNA 的 639bp 片段（B）。 可冻干酶形式提供了与 Platinum Taq 聚合酶标准形式相当的灵敏度、特异性和产量。NTC = 无模板对照DNA 分子量标准：Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder
可冻干的 Platinum Taq 和 LibertyTaq 热启动 DNA 聚合酶经常被用于基于 qPCR 的分析。这些酶能够在广泛的动态范围内能快速激活，提供稳定、灵敏和特异性地扩增。
图 5.高效且可重复的 qPCR 分析。使用 Applied Biosystems TaqMan Assays 检测人类PPP1CA和不同量的人类 DNA，评估可冻干 LibertyTaq（蓝色曲线）和 Invitrogen Platinum Taq（红色曲线）DNA 聚合酶在 qPCR 中的性能。 使用这两种 DNA 聚合酶均可实现有效且灵敏的扩增。在无模板对照中未观察到扩增，表明基于这种检测方法，试剂中无人类 DNA 污染。qPCR 反应的效率范围为90-110%，确定系数R 2≥0.990。
严格的生产流程和专利的低甘油配方使得可冻干 Platinum Taq 和 LibertyTaq DNA 聚合酶即使在非最佳运输和储存条件下也表现出高稳定性。在多次冻融循环后 DNA 聚合酶的稳定性可确保核酸检测产品的质量和性能。
图 6.LibertyTaq DNA 聚合酶在不同运输条件下的稳定性。为了模拟不同的运输和储存条件，在将其用于E.coli 23S TaqMan Assays（蓝色曲线）之前，对可冻干 LibertyTaq DNA 聚合酶进行 20 次冻融循环。 然后，将其性能与–°20C 下储存的可冻干 LibertyTaq DNA 聚合酶的性能（红色曲线）进行了比较。结果表明，多次冻融循环不影响酶的性能。
可冻干高保真 DNA 聚合酶
| 产品 | Platinum SuperFi DNA 聚合酶 | Phusion Hot Start II 高保真 DNA 聚合酶 |
|---|---|---|
| 保真度 vs. Taq 聚合酶 | >300X | 52X |
| 热启动 PCR | 基于抗体 | 基于抗体 |
| 靶基因长度 | ≤20 kb | ≤20 kb |
| 延伸速度 | 15-30 sec/kb | 15-30 sec/kb |
| TaqMan 探针兼容 | 否 | 否 |
| 抑制剂耐受性 | ++++ | +++ |
| 多重性 | 是 | 是 |
| 是否提供样品 | 是 | 是 |
Invitrogen Platinum SuperFi DNA 聚合酶经基因工程改造，含有一个 DNA 结合结构域，从而实现高持续合成能力，并增强了对常见 PCR 抑制剂（如盐酸胍和尿素）的耐受力。可冻干 Platinum SuperFi DNA 聚合酶在抑制剂存在下保持相同可靠的性能。
图 7.在常见的 PCR 抑制剂存在下性能可靠。使用可冻干 Platinum SuperFi 和标准（含甘油）Platinum SuperFi DNA 聚合酶扩增约 2kb 的 E.coli gDNA 片段。50µL 反应混合物含有 1 ng gDNA 和 2 - 无抑制剂，3-45 mM 盐酸胍，4-200 mM 尿素。1 – 无模板对照
可冻干 Platinum SuperFi DNA 聚合酶结合了标准甘油制剂的性能特性，在可冻干、冻干复融状态下也具有相同的性能。
图 8.各种形式的可靠性能（含甘油、可冻干、冻干复融）。使用可冻干 Platinum SuperFi、冻干复融的 lyo-ready Platinum SuperFi、标准（含甘油）Platinum SuperFi DNA 聚合酶扩增 666bp E.coli gDNA 片段。50 µL 反应混合物包含1 – 10 ng DNA, 2 – 1 ng DNA, 3 – 0.1 ng DNA。
Invitrogen Platinum SuperFi DNA 聚合酶经基因工程改造，含有一个 DNA 结合结构域，从而实现高持续合成能力，并增强了对常见 PCR 抑制剂（如盐酸胍和尿素）的耐受力。可冻干 Platinum SuperFi DNA 聚合酶在抑制剂存在下保持相同可靠的性能。
图 7.在常见的 PCR 抑制剂存在下性能可靠。使用可冻干 Platinum SuperFi 和标准（含甘油）Platinum SuperFi DNA 聚合酶扩增约 2kb 的 E.coli gDNA 片段。50µL 反应混合物含有 1 ng gDNA 和 2 - 无抑制剂，3-45 mM 盐酸胍，4-200 mM 尿素。1 – 无模板对照
可冻干 Platinum SuperFi DNA 聚合酶结合了标准甘油制剂的性能特性，在可冻干、冻干复融状态下也具有相同的性能。
图 8.各种形式的可靠性能（含甘油、可冻干、冻干复融）。使用可冻干 Platinum SuperFi、冻干复融的 lyo-ready Platinum SuperFi、标准（含甘油）Platinum SuperFi DNA 聚合酶扩增 666bp E.coli gDNA 片段。50 µL 反应混合物包含1 – 10 ng DNA, 2 – 1 ng DNA, 3 – 0.1 ng DNA。
可冻干 qPCR 预混液
Applied Biosystems qPCR 预混液可根据客户需求以冻干的定制形式提供给我们的商业合作伙伴，用于基因分型、基因表达和拷贝数变异等应用。可进行进一步定制，所有预混液均可含有或不含被动参比染料。如果您对可冻干预混液感兴趣， 联系我们，我们将与您合作，为您的独特检测产品提供合适的配方。
我们的低甘油、可冻干的 qPCR 预混液是一管式解决方案，已经预混好引物、探针, 不需要花费时间开发、优化和采购多个单独的 qPCR 反应组分。这些试剂保留了分子诊断产品所需的可重复性、灵敏性和特异性。冻干后，这些检测试剂在灵敏度和特异性方面没有或仅有很少损失，并已被证明可重复性地检测单拷贝靶标，并具有良好的线性动态范围。
图 9.Applied Biosystems TaqMan® Lyo-ready 1-Step Master Mix 和 Applied Biosystems TaqMan® Fast Virus (FV) 1-Step Master Mix 的 qPCR 扩增曲线对比Applied Biosystems VetMAX Xeno™ Internal Positive Control 被用作靶标，使用 7 倍数量级的稀释梯度。TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的 Ct 值和荧光值（ΔRn）与 TaqMan FV 1-Step Master Mix 保持一致或更好。TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 可与Applied Biosystems ROX 被动参比染料 (如图所示) 配合使用或不使用被动参比染料。
TaqMan lyo-ready 预混液是即用型配方，几乎无需优化即可加入冻干过程。对于常规 Applied Biosystems qPCR 预混液所期待的灵敏度和线性动态，冻干后也可得到相同的结果。为了展示冻干前后的性能对比，TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 首先与辅料结合制成预冻干预混液，然后在 FTS Systems LyoStar II 系统上进行冻干。无论添加或不添加辅料，或者在冻干后，TaqMan Lyo- Ready 1-Step Master Mix 的性能都保持不变图8
图 10.使用 TaqMan XenoRNA™ Gene Expression Assay，将可冻干的、预冻干的和冻干的 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的性能进行比较。Ct 值、PCR 效率和 R2 在三种形式的预混液中保持一致。
冻干后的检测试剂对冷链储存和运输的要求较小，极大降低了分子诊断开发人员及其客户的成本。冻干后的检测试剂对冷链储存和运输的要求较小，极大降低了分子诊断开发人员及其客户的成本。图 9 显示使用 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 制成的冻干检测试剂对四个靶标进行三个批次的检测结果具有一致的稳定性。
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图 11.不同批次 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的稳定性检测。将使用 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 制成的三个批次多重虫媒病毒冻干检测试剂保存在室温(24°C)下，并定期检测其稳定性。所有批次的稳定性结果表明，ΔCt 值（Ct 检测点– Ct 时间0）在 146 周（2.8 年）内保持在±1的特定范围。
我们的低甘油、可冻干的 qPCR 预混液是一管式解决方案，已经预混好引物、探针, 不需要花费时间开发、优化和采购多个单独的 qPCR 反应组分。这些试剂保留了分子诊断产品所需的可重复性、灵敏性和特异性。冻干后，这些检测试剂在灵敏度和特异性方面没有或仅有很少损失，并已被证明可重复性地检测单拷贝靶标，并具有良好的线性动态范围。
图 9.Applied Biosystems TaqMan® Lyo-ready 1-Step Master Mix 和 Applied Biosystems TaqMan® Fast Virus (FV) 1-Step Master Mix 的 qPCR 扩增曲线对比Applied Biosystems VetMAX Xeno™ Internal Positive Control 被用作靶标，使用 7 倍数量级的稀释梯度。TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的 Ct 值和荧光值（ΔRn）与 TaqMan FV 1-Step Master Mix 保持一致或更好。TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 可与Applied Biosystems ROX 被动参比染料 (如图所示) 配合使用或不使用被动参比染料。
TaqMan lyo-ready 预混液是即用型配方，几乎无需优化即可加入冻干过程。对于常规 Applied Biosystems qPCR 预混液所期待的灵敏度和线性动态，冻干后也可得到相同的结果。为了展示冻干前后的性能对比，TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 首先与辅料结合制成预冻干预混液，然后在 FTS Systems LyoStar II 系统上进行冻干。无论添加或不添加辅料，或者在冻干后，TaqMan Lyo- Ready 1-Step Master Mix 的性能都保持不变图8
图 10.使用 TaqMan XenoRNA™ Gene Expression Assay，将可冻干的、预冻干的和冻干的 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的性能进行比较。Ct 值、PCR 效率和 R2 在三种形式的预混液中保持一致。
冻干后的检测试剂对冷链储存和运输的要求较小，极大降低了分子诊断开发人员及其客户的成本。冻干后的检测试剂对冷链储存和运输的要求较小，极大降低了分子诊断开发人员及其客户的成本。图 9 显示使用 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 制成的冻干检测试剂对四个靶标进行三个批次的检测结果具有一致的稳定性。
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图 11.不同批次 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 的稳定性检测。将使用 TaqMan Lyo-ready 1-Step Master Mix 制成的三个批次多重虫媒病毒冻干检测试剂保存在室温(24°C)下，并定期检测其稳定性。所有批次的稳定性结果表明，ΔCt 值（Ct 检测点– Ct 时间0）在 146 周（2.8 年）内保持在±1的特定范围。
可冻干等温 DNA 聚合酶
Thermo Scientific 等温 DNA 聚合酶均具有很强的链置换活性和合成能力，使其成为环介导等温扩增（LAMP）、全基因组扩增（WGA）、滚环扩增（RCA）等应用的理想选择。 这些酶非常适合不需要常规 PCR 和温度循环的实验应用。
Thermo Scientific EquiPhi29 DNA 聚合酶是一种独特的 phi29 DNA 聚合酶突变体，通过体外蛋白改造而来。与phi29 DNA 聚合酶相比，该酶在蛋白的热稳定性、反应速度、产物产量和扩增偏好性方面都有显著提高。这种酶在无偏全基因组扩增 (WGA) 中是有用的，在较短的时间内从最少的模板量和高度精确的 DNA 合成提供高产量。
图 12.EquiPhi29 DNA 聚合酶在扩增3细菌基因组时显示出较低的 GC 偏好性。 使用 EquiPhi29 和 Phi29 DNA 聚合酶以及来自另一家供应商的同类 DNA 聚合酶分别对含低 GC 含量(S. aureus，33% GC)、中等 GC 含量(E.coli，51% GC)和高GC含量(P. aeruginosa，68% GC)的细菌基因组混合物进行扩增。对于每个基因组来说，参考基因组的 GC 含量（以100 bp windows 表示，灰色）被转换成未扩增基因组混合物的归一化覆盖率（绿色）。在没有扩增偏好性的情况下，所有 windows 应均匀分布且归一化覆盖度接近1（浅蓝色）。图中显示了使用不同聚合酶扩增后获得的归一化覆盖度。与其它 DNA 聚合酶相比，EquiPhi29 DNA 聚合酶可在所有 GC 含量范围内以最低的 GC 偏好性扩增 DNA（EquiPhi29 DNA 聚合酶以黄色表示）。
Thermo Scientific Bsm DNA 聚合酶相当于 Bst DNA 聚合酶，具有很强的链置换活性。该酶适合用于 LAMP、WGA 等恒温 DNA 扩增方法和其它分子检测试剂中。
图 13.利用 Bsm DNA 聚合酶进行 LAMP 反应。环介导等温扩增是一种单管 DNA 扩增技术。它使用 4-6 对引物，这些引物形成环状结构来促进后续的扩增。Bsm 具有较强的链置换活性，最佳反应温度为60℃。扩增非常有效，DNA 可在 15 分钟内被复制10亿倍。这种酶对复杂样本中的抑制剂有很强的耐受能力，所以植物组织、血液、尿液或唾液只需极少处理即可进行检测。
Thermo Scientific EquiPhi29 DNA 聚合酶是一种独特的 phi29 DNA 聚合酶突变体，通过体外蛋白改造而来。与phi29 DNA 聚合酶相比，该酶在蛋白的热稳定性、反应速度、产物产量和扩增偏好性方面都有显著提高。这种酶在无偏全基因组扩增 (WGA) 中是有用的，在较短的时间内从最少的模板量和高度精确的 DNA 合成提供高产量。
图 12.EquiPhi29 DNA 聚合酶在扩增3细菌基因组时显示出较低的 GC 偏好性。 使用 EquiPhi29 和 Phi29 DNA 聚合酶以及来自另一家供应商的同类 DNA 聚合酶分别对含低 GC 含量(S. aureus，33% GC)、中等 GC 含量(E.coli，51% GC)和高GC含量(P. aeruginosa，68% GC)的细菌基因组混合物进行扩增。对于每个基因组来说，参考基因组的 GC 含量（以100 bp windows 表示，灰色）被转换成未扩增基因组混合物的归一化覆盖率（绿色）。在没有扩增偏好性的情况下，所有 windows 应均匀分布且归一化覆盖度接近1（浅蓝色）。图中显示了使用不同聚合酶扩增后获得的归一化覆盖度。与其它 DNA 聚合酶相比，EquiPhi29 DNA 聚合酶可在所有 GC 含量范围内以最低的 GC 偏好性扩增 DNA（EquiPhi29 DNA 聚合酶以黄色表示）。
Thermo Scientific Bsm DNA 聚合酶相当于 Bst DNA 聚合酶，具有很强的链置换活性。该酶适合用于 LAMP、WGA 等恒温 DNA 扩增方法和其它分子检测试剂中。
图 13.利用 Bsm DNA 聚合酶进行 LAMP 反应。环介导等温扩增是一种单管 DNA 扩增技术。它使用 4-6 对引物，这些引物形成环状结构来促进后续的扩增。Bsm 具有较强的链置换活性，最佳反应温度为60℃。扩增非常有效，DNA 可在 15 分钟内被复制10亿倍。这种酶对复杂样本中的抑制剂有很强的耐受能力，所以植物组织、血液、尿液或唾液只需极少处理即可进行检测。
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