Lipofectamine Stem转染试剂

在 PSC 和 NSC 中可实现高达 80% 的转染效率，在 MSC 中可实现高达 45% 的转染效率

• 通用：可共递送 DNA（高达11 kb）、RNA 和 Cas9 蛋白质复合物
• 对细胞作用温和：在提供低毒性、持续细胞增殖的同时而不诱导分化
• 灵活：可转染贴壁和悬浮细胞，为电穿孔方法的简单替代方案

图 1.使用 Essential 8 培养基在玻连蛋白包被板上培养人 ES 细胞（H9），并用 1μL的 Lipofectamine Stem转染试剂转染GFP-表达构建体（500 ng总质粒DNA），得到定时相差（左）和荧光（右）影像。从转染开始观察培养物 48 小时。

对于许多研究人员来说，干细胞转染是一项重要技术，但是干细胞的敏感性使得使用试剂进行转染的实验方案难以达到高效率。为了显著提高转染效率，Invitrogen Lipofectamine Stem转染试剂提供了一种简单、稳定、可重复的方法，将 DNA、RNA 和 RNP（如 Cas9 / gRNA 复合物）递送到广泛种类的干细胞中，包括多能干细胞、神经干细胞和间充质干细胞（图 2）。Lipofectamine 转染试剂系列的最新 产品有助于在维持高效转染的同时，最大限度保持细胞存活并在未分化状态下生长。

基因编辑、基因表达和定向分化等研究应用的成败取决于将 DNA、RNA 和/或 Cas9 蛋白复合物递送至干细胞中的有效性和效率。涉及大构建体导入的实验通常使用电穿孔法，因为试剂转染的结果不佳。Lipofectamine Stem转染试剂具有广泛的干细胞转染功能，可转染最大 11 kb 的 DNA 质粒。进行基因编辑时，Lipofectamine Stem转染试剂可共转染 Cas9/gRNA 复合物 以及单链 DNA，实现同源定向修复。此外，Lipofectamine Stem转染试剂可用于转染 mRNA 以用于使用干细胞的基因 表达 或定向分化研究。所有这些属性,使这款通用试剂成为干细胞研究工具包的理想新成员，也是电穿孔方法的简便替代方案。

转染干细胞时，确保培养条件可支持细胞在未分化状态下持续增殖非常重要。虽然外源性构建体的引入可能产生预期内和意外的结果，但是 Lipofectamine Stem转染试剂对增殖没有不利影响（图 5）。

多能干细胞的培养系统有许多选择，包括使用滋养层的培养体系和使用基质代替滋养层的无滋养层培养体系。Lipofectamine Stem转染试剂可与各种培养系统结合使用。以下是在您所选培养系统中提高转染效率的一些提示：

1. 对于 PSCs 作为细胞团簇传代并在滋养层或 Geltrex 基质上作为大克隆生长的培养条件，在传代和重新接种时对悬浮细胞进行转染可使试剂最大程度地接触到所有细胞，提高转染效率。这种方法可用于单层培养以确保高转染效率，也可作为电穿孔的替代方法。
2. 当转染于Geltrex 或 Matrigel 基质上生长的贴壁细胞时，应确保以 30-60％ 的最佳密度将小团簇或单个的多能干细胞接种，使其在转染后24 至 48 小时的时间内可以继续扩增。
3. 当转染贴壁培养物时，可在玻连蛋白或层粘连蛋白上培养细胞，使细胞扩增出更多的单层，从而提高转染效率。
4. 尽管Lipofectamine Stem转染试剂可兼容大多数培养系统，但某些干细胞培养基中的成分可能会干扰脂质体转染。在这些情况下，在转染实验开始最初的1-4小时使用 Opti-MEM 培养基 ，然后再添加您选用的培养基，可以最大限度地减少这种干扰，同时细胞仍然能够持续扩增。有关具体细节，请参阅 Lipofectamine Stem 转染试剂用户指南。

除了  Lipofectamine Stem 转染试剂用户指南提供的实验方案，我们还制定了干细胞专用实验方案，这将有助于指导您使用各种干细胞类型（ESC、NSC或MSC）和培养基实现低毒性的高效转染。该实验方案涵盖细胞生长、培养条件、传代以及获得成功的转染结果。