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Maxima 反转录酶
Thermo Scientific Maxima 反转录酶在 cDNA 合成方面具有出色的性能，将产品的价值最大化。Maxima 反转录酶旨在为 RT-PCR 或 RT-qPCR 中的 cDNA 合成提供增强的一致性和高效性。可以多种产品形式进行提供（如单酶、反转录试剂盒和预混液）。 Maxima 反转录试剂盒和预混液还可整合 gDNA 去除步骤，提供高效、简化的实验流程。
专题视频：Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒演示
Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit with dsDNase将基因组 DNA 去除步骤和 cDNA 合成结合在一个简单的、单管反应的实验流程中，可在短短 15 分钟内完成cDNA合成。
Maxima H Minus 反转录酶经分子改造技术引入有利突变并筛选获得，与野生型M-MuLV酶相比，其热稳定性、持续合成能力和扩增活性均有明显提高。这些特性使其可在不同模板的反转录中提供更高的 cDNA 产量，以及对具有复杂二级结构 RNA 模板的高效 cDNA 合成。
同时 Maxima H Minus 反转录酶可以更高效地合成全长 cDNA 。在 cDNA 合成中，RNase H 会降解 RNA-DNA 复合体中的 RNA 模板；由于该酶 RNase H 活性缺失，所以有助于防止 RNA 模板的过早降解。在 RT-qPCR 中，Maxima H Minus 反转录酶还可以对宽范围的模板起始量进行高效 cDNA 合成，提供灵敏、准确的 cDNA 定量。
高热稳定性
Maxima H Minus 反转录酶相比其它同类反转录酶，可在较宽的温度范围内获得高产量的全长 cDNA （图 1）。其高反应温度耐受性可实现对具有复杂二级结构 RNA 模板的高效反转录，并有助于增强引物结合特异性，提高总产量。
图 1.在较宽的温度范围内获得高产量 cDNA。根据推荐的 实验方案，在一定温度范围内（42 °C、50 °C、55 °C、60 °C、65 °C），使用 1 μg Invitrogen Millennium RNA markers (poly(A)-tailed)、Oligo(dT)18 引物和 （A） Maxima H Minus 反转录酶（20U）进行 cDNA 合成。 同时按照各个供应商推荐的实验方案，对其它供应商的反转录酶进行类似反应，包括 （B） Takara PrimeScript RT、 （C） Promega GoScript RT 和 （D） NEB ProtoScript II RT。反应产物通过碱性凝胶电泳进行分离。
高持续合成能力
借助独有突变，Maxima H Minus 反转录酶与野生型 MMuLV 反转录酶相比，其持续合成能力提高了 50 倍。该反转录酶可针对多种类型 RNA 模板进行全长 cDNA 合成 （图 2）。
图 2. 两步法 RT-PCR 中的靶标扩增（达 20 kb）。按照供应商推荐的实验方案，使用Maxima H Minus 反转录酶对源于人类细胞（泳道 1 和 2）或小鼠细胞（泳道 3 和 4）的总 RNA（1 μg）进行反转录。得到的 cDNA 产物用作 PCR 的模板。M：Thermo Scientific GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
高效 cDNA 合成
Maxima H Minus 反转录酶可对宽范围的模板起始量进行高效 cDNA 合成，在 cDNA 产量和线性度方面均优于其它供应商的 RT 产品，是 RT-qPCR 实验的理想选择 （图 3）。Thermo Scientific Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒中的预混液有助于进一步提高实验可重复性，同时节省反应体系配制时间。
图 3.对宽范围的 RNA 起始量进行高效反转录。 相比其它供应商的反转录试剂盒，Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒始终可提供更高的反转录效率。扩增曲线显示了 log（ΔRn）随 PCR 循环数的变化。使用 HeLa 细胞总 RNA （1 μg-1 pg）的 10 倍连续稀释液对人 β-2 巨球蛋白基因进行 RT-qPCR 分析。使用 Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒和其它 7 种商业化第一链 cDNA 合成试剂盒进行第一链 cDNA 合成。 使用 TaqMan Universal Master Mix II, with UNG 在 Applied Biosystems ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。
Maxima H Minus 反转录酶可提供方便的单管式预混液形式，操作流程简便，从而可实现 RT-qPCR 结果的出色一致性。
在较宽动态范围内的高线性度
Maxima H Minus cDNA 合成预混液可在较宽模板浓度范围内保持高反转录效率和良好的线性度 （图 4）。所得到的线性度表明，对于大量或少量 RNA 模板起始量，可实现对不同转录本的可靠定量。
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图 4.Maxima H Minus cDNA 合成预混液具有较宽的动态范围。标准曲线表明其在较宽的 RNA 起始量范围内具有较高的线性度（R2 = 0.999）；这表明不管总 RNA 丰度如何，均可对 cDNA pool 中特定 RNA 转录本进行准确定量。使用 HeLa 细胞总 RNA（1 μg-0.1 pg）的 10 倍连续稀释液扩增人 18S RNA 基因。使用 Maxima H Minus cDNA 合成预混液合成第一链 cDNA。使用 Thermo Scientific Luminaris Probe qPCR Master Mix, low ROX在 Applied Biosystems ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。
一致的反转录效率
不管是低 RNA 起始量还是高 RNA 起始量，Maxima H Minus cDNA 合成预混液的反转录效率均高于其它供应商的反转录产品 （图 5）。更高的反转录效率意味着可使用更少的 RNA 模板，并可准确检测低表达的转录本。
图 5.Maxima H Minus cDNA 合成预混液的增强反转录效率。 相比其它供应商的反转录产品，Maxima H Minus cDNA 合成预混液在较宽的 RNA 起始量范围内均具有更高的反转录效率。使用 HeLa 细胞总 RNA（1 μg -0.1 pg）的 10 倍连续稀释液扩增 人 18S RNA 基因。使用 Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix、 Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR以及其它四个供应商的反转录产品进行第一链 cDNA 合成。使用 Luminaris Probe qPCR Master Mix, low ROX 在 ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。扩增曲线显示了 ΔRn 随 PCR 循环数的变化。
对 96-基因 panel 中一系列靶标进行可靠反转录
在针对一系列 96 个靶基因的 RT-qPCR 中，当将获得的数据归一化为使用Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 获得的数据时，可看出 Maxima H Minus cDNA 合成预混液相比其它供应商的 RT 预混液始终具有更高的反转录效率 （图 6）。
图 6.始终较低的 Ct 值。 相比其他市售预混液，Maxima H Minus cDNA 合成预混液针对各种靶标均可提供更高的 cDNA 合成效率。使用 96-gene Applied Biosystems TaqMan Assay panels （含 100 ng HeLa 总 RNA 起始量），将 Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix 与 Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 以及其它供应商的反转录预混液进行比较。使用 Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 作为参考标准，分别显示了 panel 中 96 个基因的 ΔCt 值（ΔCt = Ct Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix 或其它同类产品 – CtMaxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR）。
方便、整合的 gDNA 去除步骤
Maxima H Minus cDNA 合成预混液可随附提供双链特异性 DNase（dsDNase），与传统 DNase I 相比，dsDNase 可更快、更有效、更彻底地去除 gDNA。经 dsDNase 处理的 RNA 样本未见 RNA 完整性或 RNA 量下降。 在 cDNA 合成之前使用 dsDNase 处理可以尽可能降低使用常规 DNase I 处理后的样本损失风险。
Maxima H Minus 反转录酶经分子改造技术引入有利突变并筛选获得，与野生型M-MuLV酶相比，其热稳定性、持续合成能力和扩增活性均有明显提高。这些特性使其可在不同模板的反转录中提供更高的 cDNA 产量，以及对具有复杂二级结构 RNA 模板的高效 cDNA 合成。
同时 Maxima H Minus 反转录酶可以更高效地合成全长 cDNA 。在 cDNA 合成中，RNase H 会降解 RNA-DNA 复合体中的 RNA 模板；由于该酶 RNase H 活性缺失，所以有助于防止 RNA 模板的过早降解。在 RT-qPCR 中，Maxima H Minus 反转录酶还可以对宽范围的模板起始量进行高效 cDNA 合成，提供灵敏、准确的 cDNA 定量。
高热稳定性
Maxima H Minus 反转录酶相比其它同类反转录酶，可在较宽的温度范围内获得高产量的全长 cDNA （图 1）。其高反应温度耐受性可实现对具有复杂二级结构 RNA 模板的高效反转录，并有助于增强引物结合特异性，提高总产量。
图 1.在较宽的温度范围内获得高产量 cDNA。根据推荐的 实验方案，在一定温度范围内（42 °C、50 °C、55 °C、60 °C、65 °C），使用 1 μg Invitrogen Millennium RNA markers (poly(A)-tailed)、Oligo(dT)18 引物和 （A） Maxima H Minus 反转录酶（20U）进行 cDNA 合成。 同时按照各个供应商推荐的实验方案，对其它供应商的反转录酶进行类似反应，包括 （B） Takara PrimeScript RT、 （C） Promega GoScript RT 和 （D） NEB ProtoScript II RT。反应产物通过碱性凝胶电泳进行分离。
高持续合成能力
借助独有突变，Maxima H Minus 反转录酶与野生型 MMuLV 反转录酶相比，其持续合成能力提高了 50 倍。该反转录酶可针对多种类型 RNA 模板进行全长 cDNA 合成 （图 2）。
图 2. 两步法 RT-PCR 中的靶标扩增（达 20 kb）。按照供应商推荐的实验方案，使用Maxima H Minus 反转录酶对源于人类细胞（泳道 1 和 2）或小鼠细胞（泳道 3 和 4）的总 RNA（1 μg）进行反转录。得到的 cDNA 产物用作 PCR 的模板。M：Thermo Scientific GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
高效 cDNA 合成
Maxima H Minus 反转录酶可对宽范围的模板起始量进行高效 cDNA 合成，在 cDNA 产量和线性度方面均优于其它供应商的 RT 产品，是 RT-qPCR 实验的理想选择 （图 3）。Thermo Scientific Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒中的预混液有助于进一步提高实验可重复性，同时节省反应体系配制时间。
图 3.对宽范围的 RNA 起始量进行高效反转录。 相比其它供应商的反转录试剂盒，Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒始终可提供更高的反转录效率。扩增曲线显示了 log（ΔRn）随 PCR 循环数的变化。使用 HeLa 细胞总 RNA （1 μg-1 pg）的 10 倍连续稀释液对人 β-2 巨球蛋白基因进行 RT-qPCR 分析。使用 Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒和其它 7 种商业化第一链 cDNA 合成试剂盒进行第一链 cDNA 合成。 使用 TaqMan Universal Master Mix II, with UNG 在 Applied Biosystems ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。
Maxima H Minus 反转录酶可提供方便的单管式预混液形式，操作流程简便，从而可实现 RT-qPCR 结果的出色一致性。
在较宽动态范围内的高线性度
Maxima H Minus cDNA 合成预混液可在较宽模板浓度范围内保持高反转录效率和良好的线性度 （图 4）。所得到的线性度表明，对于大量或少量 RNA 模板起始量，可实现对不同转录本的可靠定量。
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图 4.Maxima H Minus cDNA 合成预混液具有较宽的动态范围。标准曲线表明其在较宽的 RNA 起始量范围内具有较高的线性度（R2 = 0.999）；这表明不管总 RNA 丰度如何，均可对 cDNA pool 中特定 RNA 转录本进行准确定量。使用 HeLa 细胞总 RNA（1 μg-0.1 pg）的 10 倍连续稀释液扩增人 18S RNA 基因。使用 Maxima H Minus cDNA 合成预混液合成第一链 cDNA。使用 Thermo Scientific Luminaris Probe qPCR Master Mix, low ROX在 Applied Biosystems ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。
一致的反转录效率
不管是低 RNA 起始量还是高 RNA 起始量，Maxima H Minus cDNA 合成预混液的反转录效率均高于其它供应商的反转录产品 （图 5）。更高的反转录效率意味着可使用更少的 RNA 模板，并可准确检测低表达的转录本。
图 5.Maxima H Minus cDNA 合成预混液的增强反转录效率。 相比其它供应商的反转录产品，Maxima H Minus cDNA 合成预混液在较宽的 RNA 起始量范围内均具有更高的反转录效率。使用 HeLa 细胞总 RNA（1 μg -0.1 pg）的 10 倍连续稀释液扩增 人 18S RNA 基因。使用 Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix、 Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR以及其它四个供应商的反转录产品进行第一链 cDNA 合成。使用 Luminaris Probe qPCR Master Mix, low ROX 在 ViiA7 实时荧光定量 PCR 系统上扩增 cDNA。扩增曲线显示了 ΔRn 随 PCR 循环数的变化。
对 96-基因 panel 中一系列靶标进行可靠反转录
在针对一系列 96 个靶基因的 RT-qPCR 中，当将获得的数据归一化为使用Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 获得的数据时，可看出 Maxima H Minus cDNA 合成预混液相比其它供应商的 RT 预混液始终具有更高的反转录效率 （图 6）。
图 6.始终较低的 Ct 值。 相比其他市售预混液，Maxima H Minus cDNA 合成预混液针对各种靶标均可提供更高的 cDNA 合成效率。使用 96-gene Applied Biosystems TaqMan Assay panels （含 100 ng HeLa 总 RNA 起始量），将 Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix 与 Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 以及其它供应商的反转录预混液进行比较。使用 Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 作为参考标准，分别显示了 panel 中 96 个基因的 ΔCt 值（ΔCt = Ct Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix 或其它同类产品 – CtMaxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR）。
方便、整合的 gDNA 去除步骤
Maxima H Minus cDNA 合成预混液可随附提供双链特异性 DNase（dsDNase），与传统 DNase I 相比，dsDNase 可更快、更有效、更彻底地去除 gDNA。经 dsDNase 处理的 RNA 样本未见 RNA 完整性或 RNA 量下降。 在 cDNA 合成之前使用 dsDNase 处理可以尽可能降低使用常规 DNase I 处理后的样本损失风险。
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