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商业化供应的 PCR 酶和反转录酶
以创新和品质助您实现目标
- 性能经改善的新一代酶，源于体外蛋白改造
- 提供定制化功能测试、定制化包装和装填，满足您所开发分子检测产品的需求和规范
- 可提供不含甘油的可冻干酶，兼容冻干检测试剂
- 使用 ISO13485 或 ISO9001 认证设备生产，确保产品的高质量及稳定的批间重复性
联系我们：如果您想咨询是否可提供样品，请通过MDxenzymes@thermofisher.com联系我们
分子诊断研讨会:
PCR 酶和反转录酶
对于核酸检测产品的开发，PCR 酶的选择至关重要。我们在酶学和体外蛋白改造方面的知识和专业能力使我们能够开发和供应一系列的 DNA 聚合酶，这些酶基于热启动技术、扩增速度、对 PCR 抑制剂的耐受水平、是否兼容冻干等特性的不同组合（表1）。
产品优势
- 高灵敏性和高特异性，可检测低拷贝 DNA 靶点
- 将激活时间最小化，快速获得结果
- 对于不同靶点均可强劲扩增，包括纯度不佳的模板
- 可提供可冻干产品（Lyo-ready）
表 1.DNA 聚合酶选择表。
| 特点 | Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶 | Platinum Taq DNA 聚合酶 | AmpliTaq Gold DNA 聚合酶 | LibertyTaq DNA 聚合酶 | 野生型 Taq DNA聚合酶 | Phire Hot Start II DNA 聚合酶 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 热启动 PCR | 抗体修饰 | 抗体修饰 | 化学 修饰 | 独有技术 | 否 | 基于亲合体 |
| 是否兼容 TaqMan 探针 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 否 |
| 激活时间 | 2 分钟 | 2 分钟 | 10 分钟 | 0 分钟 | 0 分钟 | 0 分钟 |
| 延伸速度 | 15 sec/kb | 30–60 sec/kb | 30–60 sec/kb | 30–60 sec/kb | 30–60 sec/kb | 10–15 sec/kb |
| 灵敏度 | +++ | +++ | +++ | + | + | + |
| 特异性 | +++ | +++ | +++ | + | + | ++ |
| 抑制剂耐受性 | +++ | + | + | + | + | +++ |
| Lyo-ready（提供可供干形式）* | 根据需求 | 是 | 根据需求 | 是 | 是 | 是 |
*Lyo-ready 表示不含甘油的可冻干酶。
备注：“+”=差；“++”= 中等；“+++”=建议选择。
随着2003 年 Thermo Scientific Phusion高保真DNA聚合酶的引入，即使对于最困难的模板也能成功扩增。这为高保真PCR建立了新的性能标准。根据您核酸检测的复杂程度和实验要求，从我们的高保真酶系列中选择各种形式式、缓冲液和dNTP溶液（表2）。
产品优势
- 市场上最高的保真度（>Taq聚合酶的300x）
- 对常见PCR抑制剂的超强耐受性
- 扩增循环时间更短，可快速获得结果
- 对宽范围靶标均可强劲扩增
表 2.高保真DNA聚合酶选择表
| 特点 | Platinum
| Phusion Hot Start II高保真DNA聚合酶 | Phusion U热启动DNA聚合酶 | Phusion高保真DNA聚合酶 |
|---|---|---|---|---|
| 保真度与Taq 聚合酶 | >300x | 52x | 25x | 52x |
| 热启动PCR | 基于抗体 | 基于亲合体 | 基于亲合体 | 否 |
| 靶基因长度 | ≤20 kb | ≤20 kb | ≤20 kb | ≤20 kb |
| 延伸速度 | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb | 15–30 sec/kb |
| 兼容TaqMan探针 | 否 | 否 | 否 | 否 |
| 抑制剂耐受性 | ++++ | +++ | ++ | ++ |
| dUTP耐受性 | 否 | 否 | 是 | 否 |
| 多重性 | 是 | 是 | 是 | 否 |
| Lyo-ready（提供可供干形式）* | 根据需求 | 是 | 根据需求 | 根据需求 |
* Lyo-ready 是具有低甘油含量（<1％）的可冻干酶。
备注：“+”=差；“++”= 建议选择；“+++”=出色。
我们提供完整的反转录产品线，从野生型M-MuLV 反转录酶到 Invitrogen SuperScript 系列反转录酶。SuperScript 反转录酶具有许多突出特性，如增强的灵敏度和缩短的反应时间(表3)。基于我们专有的体外蛋白改造技术，可向反转录酶中引入多种有利突变，大大提高了酶的热稳定性、对抑制剂的耐受性和持续合成能力。另外，我们的反转录酶还可以可冻干酶的形式提供，为基于RT-qPCR分子诊断产品的开发提供更大的灵活性。
产品优势
- 对困难样本也能实现稳定的cDNA合成
- 高效率和高灵敏度，即使反应中存在 RT 抑制剂
- 增强的热稳定性和持续合成能力
- 低残留宿主细胞DNA，将出现假阳性结果的概率降至最低
表 3.反转录酶选择表
| 特点 | SuperScript IV 反转录酶 | SuperScript III 反转录酶 | Maxima 反转录酶 | RevertAid 反转录酶 (M-MuLV) |
|---|---|---|---|---|
| 最佳反应温度 | 50˚C | 50˚C | 50˚C | 42˚C |
| RNase H 活性 | 无 | 无 | 有 | 有 |
| 是否可提供RNase H- 形式 | NA | NA | Maxima H Minus 反转录酶 | RevertAid H Minus 反转录酶 |
| 反应时间 | 10 分钟 | 50 分钟 | 30 分钟 | 60 分钟 |
| 抑制剂耐受性 | ++++ | + | +++ | + |
| 灵敏度 | ++++ | +++ | +++ | ++ |
| Lyo-ready* | 是 | 是 | 是 | 是 |
*Lyo-ready 表示不含甘油的可冻干酶。
备注：“+”=差；“++”= 中等；“+++” = 优；“++++”=建议选择。
我们的dNTP已经过广泛测试和验证，可用于多种分子生物学应用，包括RT-qPCR和二代测序等高度灵敏的技术（表4)。
产品优势
- 每种dNTP均使用专用设备制造
- 经测试，不含RNA酶或DNA酶以及qPCR、PCR和RT抑制剂污染
- 稳定长达36个月；经100次冷冻/解冻循环后，dNTP制剂仍保持稳定>
- 经HPLC验证，纯度（99≥％）
- 单个dNTP溶液或混合物可大规模生产（> 1,000 L）
表 4.质量检测有助于确保dNTP在基于DNA和RNA检测产品中具有高性能。
| 参数* | 检测方法 |
|---|---|
| 外观 | 无色透明溶液 |
| pH 值 | 7.3–7.5 |
| 浓度 | 100 ±3 mM |
| 碱基纯度（HPLC） | >99.5% 脱氧核苷 |
| 纯度（HPLC） | ≥99% 三磷酸盐 |
| 焦磷酸盐 | <0.003 pmol PPi/pmol dNTP |
| 内脱氧核糖核酸酶和切口活性 | 将超螺旋质粒DNA与dNTP一起孵育后检测不到 |
| 内切和外切脱氧核糖核酸酶 | 放射性标记的单链和双链 寡核苷酸与dNTP孵育后检测不到 |
| 核糖核酸酶 | 将RNA转录本与dNTP一起孵育后检测不到 |
| 人类DNA | 经qPCR测试，使用人类基因组DNA中Alu重复序列进行扩增 |
| 大肠杆菌DNA | 在定量PCR测试中无法检测到，该检测使用大肠杆菌23S rRNA 片段进行扩增 |
| 功能测试 | 用两步式RT-qPCR中进行功能测试，在逆转录反应中使用不同起始量的RNA 转录，然后用热启动Taq DNA聚合酶进行扩增 |
*标准质量控制程序的参数可能因不同的定制产品而有所差异。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。