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酶活性即酶反应速率 - 通常表示为单位时间内转换的底物(或形成的产物)单位数。酶活性取决于多种因素。因此,测量酶活性是一项精确的工作,需要技术知识、技能和技艺以及现代实验室仪器。
酶测定是测量酶反应速率(酶活性)的实验室方法。这些测定还有助于开发分析技术和研究酶催化机制。它们对酶动力学和酶抑制的研究至关重要。通常,该测定可通过加入/不加入辅酶进行激活来确定酶活性。通过测量反应期间底物或产物浓度的变化可以监测活性。
酶动力学是有关酶催化化学反应的研究。在酶动力学方面,技术人员会测量反应速率和研究不同反应条件的影响。研究酶动力学可以揭示该酶的催化机制、它在代谢中的作用、如何控制其活性以及药物或激动剂如何抑制酶的作用。
酶的测定可以用直接法、间接法或偶联法。如果是直接测定法,将底物加入样品中,则可确定最终产物,并且底物或测定试剂可由酶直接修饰。通过与其他试剂的相互作用或其它反应产生信号。
开发用于酶测定或酶活性的可靠分析方法涉及多个不同步骤。总体方法开发繁琐又耗时。方法开发开始于通过实验设计 (DoE) 确定关键方法变量,其中需要检测多组样品以确定酶活性。灵活的方法参数,适用于各种酶类型:测量波长、空白测量、缓冲液添加、试剂添加、底物添加、酶特异性孵育温度、酶特异性孵育时间和数据采样持续时间,这些都可使酶测定方法开发和方法从研发 (R&D) 到 QA/QC 实验室的转移更加简单可靠。
根据酶的类型及其灵敏度, 可使用 多种不同的分析方法。大多数酶测定基于光谱技术,其中两种较常用的是吸收和荧光。
基于光度测定法、荧光测定法、96 孔、384 孔甚至 1536 孔微孔板的酶测定可成为传统分光光度计的高通量替代方案。微孔板法适用于使用 200 μL 测定容量的高通量分析,通常用于生命科学应用。然而,微孔板法受到温度稳定、吸收校正和边际效应的限制。
使用紫外可见光分光光度法测量酶参数可能会很慢。但令人兴奋的是,如今已实现效率上的革新。打破紫外可见光分光光度酶测定的限制。Gallery Enzyme Master 系统 - 较早专为酶测定应用而设计的自动化酶分析仪,结合了耐用的硬件和新定制软件。这些一流解决方案简化了酶方法开发并具有可靠的常规酶测定/活性检测性能,以实现高效的无人值守流程。您将认识到完全自动化试剂加入、孵育和测量的价值,确保您的方法和结果可在其他实验室轻松重现,同时还可节省时间和人力成本。
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酶测定是一项精确的工作,可能受到多个变量的影响。结果准确性高度依赖于 pH 值和温度的稳定性。
酶在各种工业应用中均发挥着关键作用。酶测定、酶活性和酶动力学的精确测量至关重要。
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