产品简介
Peaks
峰面积精度
压力
保留时间
基线

您的 HPLC 或 UHPLC 分析存在问题？以下部分提供 LC 故障排除帮助，其中列出了常见 UHPLC 和 HPLC 问题的症状，根本原因和解决方案，以及纳米 LC ，荧光和电雾式检测等特殊技术的更全面解决方案。附加资源包括：

HPLC 仪器手册›
各仪器手册的故障排除部分提供了特定的错误代码和消息列表，以识别和排除 Thermo Scientific HPLC 仪器和相关设备操作期间可能出现的详细问题。 

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在我们的知识库中查找最新，完整的故障排除提示，提示和工具集合。使用知识库搜索关于已停用 Thermo Scientific 产品的故障排除信息。  

版本说明 Chromeleon CDS ›
我们采用 Thermo Scientific Chromeleon 7.3.2 色谱数据系统 (CDS) ，推出了一款适用于 Thermo Scientific Vanquish HPLC 和 UHPLC 仪器的内置故障排除工具。它提供了解决方案来修复连接到 Chromeleon 7.3.1 CDS 的 Vanquish 设备上的错误消息和错误代码。如果可用的诊断测试有助于确定原因或解决问题，将显示最后一个测试结果或状态，并且可以直接从 Chromeleon 7.3.2 中的故障排除工具启动测试。  

No peaks
可能的原因溶液
仪器故障，洗脱条件错误探测器是否显示典型基线噪声？如果探测器输出只是一条平坦的线，则探测器或数据传输失败。

注入已知的试验物质，而不使用色谱柱，并检查检测器响应。
无进样，样品量不足确保样品被吸入样品定量环中。检查是否进行了注塑 (运行开始时的压降)。
高背景电流 / 噪声 (电雾式检测， CAD)检查流动相质量。请参见“基线”部分。阅读技术说明。
样品挥发性太强 (电雾式检测， CAD)通过流动进样分析检查响应。检查分析物的蒸汽压力。阅读技术说明。
Peak tailing
可能的原因溶液
碱性化合物与硅烷醇基团相互作用使用 B 型 (高纯度) 硅胶或屏蔽相 (如极性嵌入基团)。使用竞争基准，如三乙胺 (TEA)。或者 (与 A 型硅胶柱) ，请使用聚合物柱。使用高离子强度的缓冲液 (置换效应 - 与 LC/MS 不兼容)。
缓冲区容量不足增加缓冲液浓度。
在固定相中与痕量金属螯合在流动相中加入竞争性螯合剂 (如 EDTA)。
额外的柱体积太大使用短毛细管连接。检查连接毛细管的内径：0.13 mm (0.005 in.) 适用于 UHPLC 色谱柱和 0.18 mm (0.007 英寸) 适用于传统 HPLC 色谱柱。柱外体积不应超过最小峰值体积的 1/10。使用 Thermo Scientific Viper 或 nanoViper 手拧接头系统毛细管。
色谱柱降解替换列。在高温下: 避免与腐蚀性缓冲液 (例如磷酸盐) 配合使用高温 - 降低至非关键温度 (例如 40 °C) ，替代色谱柱类型 (例如混合色谱柱)。高pH值: 使用高 pH 兼容色谱柱类型。
色谱柱空隙 (特别是在 UHPLC 压力下)替换列。尝试反向柱 (出口到废液) 冲洗。预防措施: 缓慢增加柱流，以避免对柱的压力冲击。避免腐蚀性 pH (检查色谱柱规格)。可在低于 70%-80% 的压力下常规操作色谱柱。
毛细管连接不正确检查接头是否正确放置金属环。使用 Viper 或 nanoViper 手拧接头系统毛细管。
峰前
可能的原因溶液
筛板被堵塞，柱头上有颗粒更换柱前筛板。如果前沿快速恢复，请尝试定位粒子的来源 (样品，洗脱液，泵机制，注塑阀)。
列中的通道替换列。检查应用条件是否在色谱柱规格范围内 (例如，压力和 pH 值范围)。
列过载减少样品量。增加柱体积 (使用更大内径)。
样品溶解在强洗脱液中将样品溶解在起始流动相中。降低样品溶剂强度或进样体积。阅读应用笔记: 通过自定义进样程序克服方法转移过程中的强大溶剂效应并改善峰值结果。
Broad peaks
可能的原因溶液
检测器流通池体积过大流通池体积不得超过最小峰值体积的 1/10。通过 UHPLC 或微孔柱使用较小体积的流通池 (即微量或半微量)。
早期峰比后来洗脱峰更宽柱外体积过大。检查毛细管内径和长度，样品定量环大小，流通池等
检测器响应时间 (时间常数) 过长在最窄峰的半高选择小于峰宽 1/4 的响应时间。使用 Chromeleon 色谱分析数据系统 程序向导优化响应时间 (时间常数) 设置。
高纵向弥散等度分离：保留时间过长。使用梯度洗脱或更高的等度流动相；使用更少的固定相 (例如 C8 而不是 C18)。线性速度太慢：检查流速。
电雾式检测器 (CAD) 与例如 UV 检测进行比较由于雾化，电雾式检测将扩大峰值范围比紫外更大。
鬼峰
可能的原因溶液
只有部分峰宽：上一次进样的晚期洗脱峰延长运行时间。增加梯度的洗脱强度 (较高的有机物含量)。在运行结束时，用强洗脱液冲洗色谱柱。
污染 (通常为进样器或色谱柱)冲洗采样器，更换容易受到污染的部件 (例如，针头或针头密封)。 
用强淋洗液冲洗色谱柱 (也检查色谱柱说明；如果可能，可反向流动方向冲洗)。
样品中的干扰使用 样品纯化技术 ，例如固相萃取 (SPE)。
受污染雾化器 (电雾式检测， CAD)雾化室可能需要清洁。删除列。用 50/50 水清洗电雾式检测器：甲醇 2.0 mL/min ，持续数小时。将流速调整到 0.2 – 0.4 mL/min ，过夜。重新检查原始流动相成分的噪声水平。
洗脱液污染 水质: 通过色谱柱运行不同量的水，并根据体积测量富集时间。用 HPLC 级水替换水。污染物也可能是脱气机中细菌生长，淋洗液修饰剂 (例如降解的 TFA) 或不当的液体处理 (例如，不带手套制备的氨基酸流动相) 引起的。
分离或双峰
可能的原因溶液
色谱柱或保护柱入口污染 1.更换护罩。
2.用强流动相冲洗色谱柱，反冲至废液 (如果可能)。
3.更换分析柱。
样品溶剂太强在流动相模式下制备 / 稀释样品。阅读应用笔记: 克服方法转移过程中的强溶剂效应和使用自定义进样程序改善峰值结果。
共洗脱与未知干扰执行高效的样本清理。通过更改流动相或色谱柱来调整选择性。
转子密封件磨损更换转子密封件。对于极端 pH 应用，请检查密封聚合物的兼容性。
温度不匹配主要发生在柱内径 > 为 3 mm 且柱温高的情况下。使用洗脱液预热器确保洗脱液温度不会导致柱温梯度升高。
毛细管连接不当主要发生在柱内径为>3 mm且柱温较高的情况下。使用洗脱液预热器，以确保洗脱液温度不会导致柱上的温度梯度。
填料完整性损失 (UHPLC 应用)替换列。检查转向柱的额定压力，并在压力规格的 70 – 80% 以上工作。缓慢增加柱上的压力，以避免压力冲击。
负峰值
可能的原因溶液
分析物的吸收 / 荧光低于流动相1.改变紫外 / 荧光检测波长。
2.使用具有较低背景吸收 / 荧光的流动相。
3.将样品溶解在流动相中。
模拟输出接口的极化错误检查模拟输出中的电缆极性。
参考波长设置不正确 (DAD)样本不得在参考波长范围内吸收。如有可能，请使用无参考波长的方法。
排水加标 (电雾式检测， CAD)确保 PEEK 管路位于排水 / 通风组件内。
物质的荧光被基质或流动相 (FLD) 淬灭1.评估流动相组成的变化。
2.考虑使用阴性峰进行定量。
信噪比太低
可能的原因溶液
非理想的荧光检测器设置 (FLD)扫描最佳激发和发射波长，优化光电倍增管的增益，仅使用高质量流动相，设置合适的响应时间。
非理想紫外检测器设置 (DAD)扫描最佳吸收波长，设置适当的响应时间并根据操作手册优化狭缝宽度和带宽。使用合适的流通池，即 Lightpipe 10 mm 与 60 mm。
减少荧光响应
可能的原因溶液
脱气不足导致淬火检查脱气机的工作情况。
由仪器或样品引起
可能的原因溶液
样品或采样器问题进行多次进样以区分采样器和样品相关问题：
1.峰值面积之和的变化→注射器。
2.只有部分峰值区域会有所不同→样品不稳定。要验证：注射已知稳定的混合物→峰面积不应变化。
3.如果某些峰的峰面积仍不同，请检查 3。 系统压力稳定性和短期流量稳定性。
峰积分设置
可能的原因溶液
集成分隔符的位置会有所不同检查软件集成设置。
例如，支持 Chromeleon 色谱 分析数据系统帮助。最好，有助于 Chromeleon 7 COBRA 算法，使其可确定理想的设置。避免自动数据速率设置并使用固定数据速率。
波动基线
可能的原因溶液
泵脉冲，混合波纹等导致的不可重现集成请参阅基线表，症状：定期基线波动。
注射量变化
可能的原因溶液
自动进样器可从样品瓶抽气检查进样针的样品填充高度和采样高度。
样本降解使用适当的储存条件，例如恒温自动进样器。
自动进样器流体中有空气按照相应操作说明中列出的步骤冲洗自动进样器液流系统。
喷油器针堵塞或针尖变形更换针头。去除自动进样器流体中的空气。
自动进样器吸速度过高，具有气体含量的样品降低牵引速度至少需要 2-3 秒。在绘制样本后设定一个延迟时间 (例如 3 秒)。 
对样品进行脱气和 / 或降低抽气速度
进样器密封件泄漏，注射器中出现气泡检查喷油器密封件，吹扫注射器。
自动进样器，进样阀和 / 或注射器阀未拧紧检查密封件并拧紧采样器进样过程中所涉及的接头。
探测器设置不当
可能的原因溶液
错误的检测波长在紫外 / 荧光光谱侧面测量可以影响精度。在光谱 / 光谱的顶点附近选择检测波长或激发 / 发射波长对。如果分析物的光谱差异很大，可能需要波长开关。
响应时间过短，噪声过大，在跟踪级别不精确集成确保使用适当的响应时间 (或时间常数) 设置。通常设置一个响应时间，在最窄峰的半高时峰宽约为 1/4。有关详细信息，请遵循操作说明。
雾化器温度不正确 (电雾式检测， CAD)检查雾化器温度设置。如果在流动相中使用大量 THF 或卤化溶剂，请将温度设置为 30 °C 如果分析物为半挥发性物质，可能需要关闭雾化器加热器以恢复响应。
数据点不足为实现可重现的峰积分，将每个峰的数据采集速率设置为至少 20-30 个数据点。
前一次进样的分析物转移
可能的原因溶液
残留 (从针头，样品定量环，针座)扩展自动进样器清洗选项以减少残留。清洁针，针座和转子密封件。
柱记忆效应在样品后运行空白样品 (无进样)。如果检测到峰，则会出现列记忆效应。
带强洗脱液的冲洗色谱柱。反转列 (如果允许) 并再次刷新列。替换列。
压力过高 / 增加
可能的原因溶液
缓冲沉淀1.检查缓冲液与最大有机物含量 (在烧杯中) 的兼容性。
2.较低有机物含量的冲洗系统和色谱柱。
3.系统地研究液流系统以定位堵塞的部件 (从检测器到泵)。
毛细管弯曲系统地研究流体学以找出被阻塞的部分（从检测器到泵）。
微粒位于混合器，筛板，保护柱或色谱柱上μm 适合色谱柱粒径 μm 的预过滤流动相 (例如， 0.1-0.2 μ m μm μm 用于亚 2 μ m 颗粒， 0.45 μ m 适用于 3-5 μ m 颗粒)。相应过滤样品。检查密封机械部件 (活塞密封件，转子密封件)。
列老化 / 阻塞在色谱柱的使用寿命内，逐渐增加压力正常。异常压力增加：检查连接管路，温度控制，更换柱。
压力随坡度变化正常。系统压力取决于系统流体系统中流动相成分的粘度。
液体进口或雾化器堵塞 / 堵塞 (电雾式检测)检查电雾式检测器的反压。反压应低于 10 bar (145 psi)。
流量过高或柱温设置过低正确设置。
压力过低
可能的原因溶液
毛细管连接泄漏1.检查接头是否紧固，特别是在柱前。带手拧接头的 PEEK 毛细管可滑出理想位置。
2.使用 Viper 或 nanoViper 手拧接头系统 的毛细管实现几乎为零的死体积连接。
流量过低或柱温设置过高正确的设置。
波动的压力
可能的原因溶液
空气滞留在泵中1.脱气洗脱液，最好采用在线真空脱气或氦气喷射。
2.用温和的反压清洗泵。
3.例如，用注射器在泵出口处主动抽吸液体。
4.临时用脱气有机溶剂更换水，并吹扫相应的淋洗液管线。然后，切换回脱气水。
泵的进口或出口单向阀脏了取出止回阀芯，将其放入装有适当液体 (例如甲醇) 的容器中，然后用超声波清洗。
油泵单向阀或活塞密封件故障高压配比：通过将压降与泵循环相关来确定故障泵块。更改 % B 并观察压降频率如何变化。使用 Thermo Scientific Chromeleon 色谱分析数据系统软件的泵诊断功能来识别故障部件。
溶剂管路筛板堵塞更换溶剂管路筛板。
减少保留时间
可能的原因溶液
固定相的降解替换列。检查色谱柱的 pH 值要求，通常为 pH 值 2-8 ，适用于基于硅胶的 RP 色谱柱。
平衡不足增加平衡时间，至少是柱体积的 5-10 倍。
列过载减少样本量。增加柱体体积（使用更大的内径）。
增加流速检查流速设置，对流速精度进行 OQ。
在低有机物含量下固定相去湿使用与低有机含量物质 (例如极性嵌入相) 相容的固定相。在增加压力时，便于重新润湿色谱柱的有机物含量。有关详细信息，请查看柱保养手册。
移动相组成1.检查预混合流动相，确保液体均匀。
2.进行 OQ 配比测试。
3 A) 高压配比：检查水性淋洗液中是否有泄漏或气泡。 b) 低压配比：检查 / 调整比例阀。
增加保留时间
可能的原因溶液
移动相组成1.检查预混移动相，确保液体是均匀的。
2.执行OQ配比测试。
3. a) 高压配比：检查水性洗脱液中是否有泄漏或气泡。b）低压配比：检查/调整配比阀。
固定相上的活性部位使用有机修饰剂基座 (如 TEA) ，增加缓冲强度或使用较高覆盖范围的色谱柱填料。
减少流速毛细管连接泄漏。检查流量设置。
柱前死体积 (主要是纳升 / 毛细管应用)如果峰晚期，但不宽，则分离柱前有死体积。如果峰宽且晚期，则死体积位于柱后。
散射保留时间
可能的原因溶液
平衡不足增加平衡时间，至少5-10倍柱体积。
不精确的洗脱液配比进行 OQ 洗脱液配比测试。清洁 / 更换油泵单向阀，或致电维修部门以调整 / 更换比例阀。
缓冲区容量不足将缓冲液浓度增加 > 20 mM。在缓冲范围内的 pH 值下工作。
喷射与泵循环不同步 (低压配比) 激活软件中的功能，例如 Chromeleon 色谱分析数据系统的泵驱动程序。
改变柱温将色谱柱置于色谱柱恒温器中。监测烘箱温度。
定期基线波动
可能的原因溶液
泵的压力波动记录泵压力通道以识别临时或永久压力波动。泵影响通过与泵循环同步的基线波动来表示。吹扫泵，检查一般功能 (例如，诊断测试) ，从泵面板读取预压缩值并与手动 (仅限 Thermo Scientific 泵) 中的值进行比较。检查是否为所应用的淋洗液 / 流速选择了合适的混合体积。
泵流中有空气1.脱气洗脱剂，最好使用在线真空脱气或氦气喷射。
2.吹扫泵。
3.通过泵主动抽吸液体，例如在泵出口处用注射器抽吸。
4.用脱气有机溶剂暂时替换水，并吹扫相应的洗脱剂管线。之后，切换回脱气水。
选择了错误的参考波长 (DAD)样品不得在参考波长范围内吸收。如有可能，使用无参考波长的方法。
混合不足周期性的波形噪音。效果强度与淋洗液，检测器类型和检测器布局有关。‘s 制造商的建议，增加混合体积。
接地不当整个 HPLC 系统应插入同一电路。将电路与强电流耗电设备隔离，或使用隔离变压器过滤电流波动。
吸收溶剂检查流动相是否存在降解，特别是水性缓冲液。借助 DAD ，在故障排除过程中关闭参考波长。准备新的流动相。
光学部件安装不当检查灯和流通池是否正确定位。
流动相降解准备新的流动相，并用其冲洗系统。如果需要，反冲色谱柱 (增加反压)。
非周期性，高噪声
可能的原因溶液
流动相质量确保 μm HPLC 级或更好的流动相质量，尤其是对于亚 2 μ m 粒径色谱柱和蒸发检测器 (例如电雾式检测器， CAD) ，尽可能使用粒径最低的流动相。
→时间 (时间常数) 设置太短， 噪声增加确保使用适当的响应时间。通常将响应时间设置为最窄峰值半高处峰值宽度的约1/4。详情请参阅操作说明。
光学带宽设置 (UV 检测器) 过窄使用低光带宽设置以获得最佳光学分辨率。增加带宽设置以获得最佳信噪比。有关详细信息，请参阅探测器操作说明‘s。
非挥发性流动相 (电雾式检测)确保使用电雾式检测中的挥发性缓冲液和添加剂。阅读技术说明。
雾化器（带电气溶胶检测）雾化室可能需要清洁。删除列。用 80/20 水冲洗您的电雾式检测器： 2.0 mL/min 下的甲醇冲洗几小时。将流速调整为每分钟0.2-0.4毫升，持续整夜。重新检查原始移动相组成的噪声水平。
氮气供应 (用于蒸发探测器)确保使用纯度 99% 的氮气，不含水蒸气和颗粒。必要时更换两级过滤器。
灯太旧 (光学探测器)检查灯的使用寿命并检查点火次数。如果需要，更换灯泡。如果在更换灯泡后噪音很大，请检查是否正确安装了灯泡。
基线漂移高
可能的原因溶液
探测器灯 / 光学温度不稳定让探测器预热。这可能需要 30 分钟到几个小时，具体取决于光学设计。有关详细信息，请参阅探测器‘s 操作说明。
移动相不均匀在一天或更长时间闲置后，轻轻涡旋淋洗液瓶以均质化其储液槽中已存在的淋洗液。
色谱柱污染用强淋洗液冲洗色谱柱。如果可能，尝试反转色谱柱 (检查色谱柱的规格)。
非定期，高噪声 (电雾式检测) 中讨论的原因非定期，高噪声电雾式检测中讨论的解决方案
梯度操作 (电雾式检测)通过使用适当的流动相质量，尽可能降低梯度基线效应。尽可能使用浅色梯度方法。使用反向梯度。阅读技术说明。 
新的探测器灯持续几小时，让灯达到恒定的光强度
非恒定环境条件确保实验室温度和湿度保持恒定。通过 Chromeleon 色谱数据系统软件，借助检测器温度通道，记录温度波动。检查灯和流通池盖是否处于正确位置且前面板盖已关闭。
污染的流动细胞清洁流通池 (有关推荐的程序，请参阅操作说明)。如果必要，更换流动池。
缓慢的柱平衡
可能的原因溶液
离子配对应用正常。离子配对应用始终需要较长的初始平衡时间。离子对试剂的烷基链长度更短，与更长的链相比，可实现更少的平衡。
尖峰
可能的原因溶液
流通池内的空气流系统通常，气泡随机出现。识别方式：
1.在不同波长下观察类似的刺突高度
或
2.对流动池施加轻微的反压 (加标消失)。
解决方案: 确保连接牢固。脱气流动相，在流通池后使用反压调节器 (例如， 100 psi ，检查流通池规格)。
排水尖峰（带电气溶胶检测，CAD）检查废液瓶和排气 / 排气组件处是否泄漏。检查排水管内是否存在内部管路。
雾化器（带电气溶胶检测）雾化室可能需要清洁。删除列。将您的带电气溶胶探测器用80/20的水：甲醇以2.0毫升/分钟的速度冲洗几个小时。将流速调整为每分钟0.2-0.4毫升，过夜。重新检查原始移动相组成的噪声水平。
柱温明显高于流动相的沸点在流通池后使用反压调节器 (例如，检查流通池规格)。 如果有的话，请使用柱后冷却器。考虑关闭流通池加热 (FLD)。
接地（带电气溶胶检测）确保电雾式检测器在与 LC 系统相同的电路上运行，并插入电涌保护器。
色谱柱储存，无盖用强流动相填充色谱柱，并确保正确储存色谱柱，通常 (RP 相) 储存在无缓冲液，高有机液体中。
电气干扰确保首先排除以前的加标原因。峰值通常不是随机的，但例如与循环强功耗设备有关。此外，峰值只能由电网中的电流波动引起。解决方案：将电路与强电流耗电元件隔离，或使用 UPS (不间断电源) 过滤电流波动。

 
 
 
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