HPLC 熟悉
最佳实践
学习中心
产品导览
耗材指南
获取支持

我们为您提供交互式 HPLC 导入文档，供您进行自学。我们的 HPLC 熟悉文档涵盖了 HPLC 仪器的基本介绍和操作，确保您拥有良好的启动体验。不完整的 HPLC 熟悉会导致仪器使用不当，因此请确保您的团队成功完成本教程。本简介既不包括也不取代任何应用，技术或专家培训。​

访问 LC Familizatio 以下载最新的 HPLC 熟悉资料。

访问 HPLC 培训 & 教育 ，了解我们广泛的应用，技术或专家培训可能性。

正确的溶剂质量，制备和处理是 HPLC 操作和结果成功的关键。最佳系统平衡，处理和预防性检查是获得可重现且可靠 HPLC 结果的关键。这些建议描述了一般使用标准 LC 仪器的最佳实践。有关特定 HPLC 仪器的最佳实践，请参阅上述相关熟悉文档或其操作手册。

HPLC 和 UHPLC 溶剂和添加剂指南

仅使用与 HPLC 流路和检测原理所有部件兼容的溶剂和添加剂

  • 使用四氢呋喃，三氯甲烷，酮，二甲基亚砜或氢氧化铵作为溶剂，可缩短流路中零件的使用寿命，尤其是活塞密封件
  • 通过使用浓酸 (如硫酸和硝酸) 或己烷，乙酸乙酯和甲醇的混合物，可以缩短流路中某些湿部件的使用寿命
  • 无水甲醇，特别是当存在甲酸或三氟乙酸时，会导致钛表面出现应力失效，因此请至少加入 3% 水以防止出现这种情况
  • 避免使用 100% 有机溶剂或水性溶剂，在 solvent​ 水溶液中加入 5% 至 10% 有机溶剂，或者分别在有机溶剂中加入 5% 至 10% 水性溶剂
  • 避免使用三氟乙酸与质谱检测 (最大 0.1% TFA ，仅当 HPLC 分离基本需要时)
  • 仅使用电雾式或质谱检测的挥发性缓冲液 (例如乙酸铵)​
  • 不要使用铝制储液槽中的甲醇，通常是避免在铝材容器中储存和使用溶剂

只能使用高纯度溶剂和添加剂，无杂质并防止任何污染

  • 进入 HPLC 系统的颗粒可阻断毛细管和阀门，增加磨损并损坏 HPLC 色谱柱或系统
  • 尤其是对于水溶剂，藻类和其他微生物而言，可以生长并沉积在系统中，并阻断溶剂管线过滤器
  • 毛细管和过滤器堵塞可能导致系统压力增加或不稳定
  • 考虑到大多数添加剂甚至瓶装水在打开后有有效期
  • 考虑杂质与样品中可能存在的反应性

仅 solvents​ 新鲜，脱气并适当制备的 μ l 和溶液

  • 清洁玻璃器皿时，避免使用去污剂 (考虑去污剂的紫外吸光度)
  • 请注意用于溶剂制备的设备的清洁度和兼容性，例如有机溶剂可以从低质量塑料移液器中浸出增塑剂和其他化学剂
  • 在 µm 盐溶液或缓冲液制备完成时，使用膜过滤 (0.2 μ m) 去除任何颗粒物质并减少微生物生长
  • 为减少藻类的生长，使用琥珀色玻璃器皿并使用适合的添加剂，如甲酸，用于水性溶剂

HPLC 级溶剂和添加剂必须至少用于标准 HPLC 应用

  • 根据应用要求使用过滤的高质量和高纯度溶剂和添加剂，例如， UHPLC 级或 LCMS 级
  • 对于梯度操作，使用明确指定为梯度等级质量的溶剂和添加剂
  • 对于梯度操作，调整溶剂中的添加剂浓度以避免基线漂移
  • 如果 HPLC 系统中使用荧光检测器，请使用荧光级溶剂
  • 考虑到瓶装 HPLC 级水通常含有离子污染，因此，请使用更高质量的尤其是对于带电雾式或质谱检测
  • 请 µm 高质量水，例如瓶装 UHPLC 级或 LCMS 级 (0.2 μ m 带滤芯) ，尤其是用于电雾式或质谱检测

在灌装溶剂储液罐之前，请用高纯度溶剂彻底冲洗储液罐

  • 每周至少更换溶剂，并且始终完全更换储液罐中的溶液
  • 切勿将溶剂添加到储液罐中，因为这会导致溶剂成分的变化和污染
  • 切勿再循环或再循环溶剂，以确保活塞密封寿命并避免系统中的颗粒物
  • 考虑溶剂和添加剂中的 impurities​ 紫外吸光度
  • 考虑三氟乙酸或甲酸在 210 nm 处吸收
  • 考虑溶剂的特殊特性，如黏度，可混溶性，沸点，紫外吸收， 以及在梯度过程中所有比例的盐溶解度

在非钝化样品瓶和玻璃器皿中，可能存在大量硼酸盐，硅酸盐，钠或未知物质的离子浸出物 (在此使用电雾式检测器检测)。 这些离子物质可能与样品分析物发生反应，并可能以多种方式改变分析结果。

只能根据赛默飞世尔科技的建议使用合适的溶剂管线过滤器

  • 定期检查过滤器筛板的渗透性，必要时予以更换
  • 为避免液管路中出现气泡，务必将储液槽放置在溶剂架顶部，确保系统堆叠
  • 在使用前，用 LCMS 级溶剂冲洗用于电雾式检测或 LCMS 应用 (包括刻度量筒) 的玻璃器皿；最好单独储存此类玻璃器皿
  • 使用水净化系统中的水时，如果净化系统未正确和定期保养，可能会发生各种污染
HPLC 和 UHPLC 仪器制备和启动指南

务必使用新溶剂并定期更换

  • 有了预混合溶液，请特别确保它们被正确制备，过滤和新鲜
  • 在灌装溶剂储液罐之前，请用要存放的溶剂或溶液彻底冲洗
  • 一定要用合适的堵头关闭储液罐盖中的开孔
  • 务必将溶液容器放在系统顶部的溶液架内，以避免液管路中出现气泡
  • 当更改为不同类型的溶液时，确保之前和新溶液可混溶
  • 从缓冲液或盐溶液更换为有机溶液之前，或者反之亦然，其使用去离子水彻底冲洗系统约 10 分钟，且系统反压至少为 200 bar
  • 清洗泵，然后用新的溶剂彻底冲洗溶液管路
  • 确保溶剂和密封清洗管路在流路中的任何地方都没有扭结，挤压或挤压

HPLC 样品瓶，瓶盖和孔板的建议

  • 根据应用需要使用样品瓶，盖和孔板，例如经 LCMS 认证的样品瓶，适用于电雾式或质谱检测
  • 请勿使用可能会导致自动进样器针头打孔材料的瓶盖或孔板密封件
  • 仅使用不含滑石粉，未填充硅胶或基于 PTFE 的样品瓶隔垫或孔板盖垫，以防止可能导致系统中反压问题或堵塞的颗粒
  • 请勿在凹腔区域使用密封带和重复密封带，以避免污染，特别是在进样针上
  • 请勿使用铝密封胶带防止铝颗粒被打孔，例如，卡在针座上
  • 最好遵循此选择帮助： SureSTART 收集 - 样品瓶和孔板

开始样品分析之前

  1. 启动探测器模块，例如打开灯或气流
  2. 确保溶剂瓶中的溶剂类型和数量适合您的应用
  3. 检查瓶内密封清洗系统的状态和密封清洗液位；最好激活 (开始) 密封清洗系统
  4. 启动泵清料 (所有通道，包括未用于应用的通道) ，然后等待泵清料完成
  5. 用合理流速的应用的起始溶剂冲洗整个色谱系统，以冲洗掉任何其他溶剂
  6. 为您的应用安装合适的 HPLC 色谱柱
  7. 关闭 HPLC 系统的所有门
  8. 预热 (或冷却) 所有温控设备并等待相应 (设置) 温度达到并保持稳定
  9. 启动泵，观察压力增加并等待泵压力稳定 (漂移和波动在应用的合理限度内)
  10. 监测探测器信号并等待检测器信号稳定 (漂移和噪声在应用的合理限度内)
  11. 对检测器基线执行自动归零
  12. 如果泵压力和检测器基线在特定时间范围内稳定，则系统即可进行样品分析
  13. 最好运行 HPLC 色谱柱检测以验证性能和适用性
HPLC 和 UHPLC 仪器操作指南

使用前务必平衡系统

  • 系统通电后 (即使在短期关机后)
  • 更改流量或温度设定点后
  • 更换溶液类型或 HPLC 色谱柱后
  • 梯度运行后 (确保重新平衡色谱柱)

泵最佳实践

  • 正确使用后密封清洗系统，以防止损坏活塞，活塞密封圈或支架环
  • 将脱气机与反相溶剂配合使用
  • 仅将正相溶剂与正相兼容的 HPLC 系统配合使用，并通过正相溶剂绕过脱气机
  • 定期对泵进行清污，以清除可能随时间推移而在流道中出现的气泡
  • 为确保耐用性，在清料过程完成后，务必从清料阀的硅胶管中排出液体
  • 对于手动清料的泵，仅用手指转动清料阀旋钮，因为过度拧紧可能会损坏清料阀密封件
  • 切换至其他类型的溶剂后，吹扫泵，然后冲洗整个 HPLC 系统 (预先移除 HPLC 色谱柱)
  • 定期冲洗您的 HPLC 系统以避免污染，特别是在使用含盐或缓冲液的流动相时

自动进样器最佳实践

  • 使用适用于您的应用的针头清洗液进行针头清洗以尽可能低的残留
  • 使用 100% 水时，每天更换针头清洗液
  • 在样品处理过程中，自动进样器保持关闭状态，以避免任何中断
  • 在您切换注塑阀之前，请确保泵流量已打开
  • 确保将打捆针装置移至维修位置，并固定打捆针装置以进行维护或运输

柱温箱最佳实践

  • 最好使用 Viper 毛细管套件，实现极短的毛细管连接
  • 请勿在同一个 HPLC 系统中混合不锈钢 (SST) 和 MP35N Viper 毛细管； nanoViper 和 PEEK Viper 可与 SST 或 MP35N Viper 毛细管混合
  • 务必注意流动方向 (例如，如列上所示)
  • 在整个分析过程中，柱温度应保持恒定
  • 考虑在 UHPLC 应用中使用预热器
  • 在操作过程中，务必关闭柱温箱
  • 环境条件 (例如通风或空调) 可能会延长等待时间，甚至会阻止柱温箱进入就绪状态

紫外检测器的最佳实践

  • 如果您打算在 24 小时内再次使用探测器，请勿关闭紫外线灯，因为点火开关会缩短灯寿命
  • 使灯和光学元件达到稳定的工作温度
  • 如果灯打开，切勿让流通池中无小流量 (例如 0.1 mL/min)
  • 考虑检测设置和流通池特性的影响 (请参阅操作手册)
  • 确保工作条件合适，例如温度稳定，无气流，无振动，无机械冲击

HPLC 操作最佳实践和提示

HPLC 和 UHPLC 仪器关闭指南

>标准 HPLC 系统的短期 (24 小时至 2 周) 关机程序

  1. 准备色谱柱进行储存。有关适当的存放条件，请参阅本栏的操作手册
  2. 从系统中取出色谱柱，然后插塞入口和出口，以防止色谱柱材料干燥
  3. 使用适当的接头 (例如 Viper 两通) 连接 LC 管路
  4. 将 10% 甲醇或乙腈混合物的溶液以 1 mL/min 的流速冲洗到 90% 去离子水混合物中，至少 30 分钟
  5. 从自动进样架中取出所有样品
  6. 检查废物容器并在必要时进行清空
  7. 关闭所有系统组件

标准 HPLC 系统的长时间 (两周或更长时间) 关机程序

  1. 准备存储的色谱柱。有关适当的长期储存条件，请参阅列的操作手册
  2. 从系统中取出色谱柱，塞住入口和出口，以防止色谱柱材料变干
  3. 使用适当的连接器（例如Viper Union）连接LC管
  4. 用10%甲醇或乙腈在90%去离子水中的混合物以1 mL/min的流速冲洗系统至少30分钟
  5. 至少，移除所有含水溶剂的储液槽，最好是所有含有有机溶剂的储液槽
  6. 以 1 mL/min 的流速用 100% 异丙醇或甲醇冲洗系统的所有溶剂管路至少 10 分钟
  7. 从自动进样架中取出所有样品
  8. 清空所有废物箱
  9. 关闭所有系统组件

纳流 LC 系统的关闭程序

  • 请参阅相应的操作手册

运输 LC 系统和设备的通用关闭程序

  1. 运行适用于您的 LC 系统的长时间关机程序 (参见上文)
  2. 确保彻底冲洗系统以进行消毒，特别是在系统接触有毒，易燃，腐蚀性或放射性物质时
  3. 仅 Vanquish ：如果需要更换或维修单个 LC 设备，请参阅操作手册，以便仅卸下其滑入式设备
  4. 将自动进样器针单元移动到维修位置，然后将其固定以进行运输
  5. 使用其主电源开关关闭所有 LC 设备
  6. 从溶液架上取出所有溶液储液槽和溶液管路
  7. 断开 LC 设备与所有废液管路之间的所有流量连接
  8. 将分析检测器流通池更换为运输或虚拟流通池
  9. 使用适当的端盖和开口端口 (例如， Viper 毛细管，溶剂管) 和相应的盲螺母关闭开口 LC 管路 (例如，阀，流通池)
  10. 卸下所有信号电缆和电源线
  11. 确保所有 LC 设备均已固定，并根据需要进行运输准备 (例如，固定检测器光学工作台，取出自动进样器支架等)
  12. 仅适用于Vanquish: 确保 Vanquish 系统底座未锁定，可用于在工作台上移动任何 LC 系统
  13. 根据配置和情况，移除溶液架，检测器，柱温箱，自动进样器， 并按照每份操作手册中的说明进行泵送
  14. 有关如何进一步准备特定 LC 设备进行运输或运输的详细信息和具体案例信息，请参阅相应的手册
HPLC Learning Center

您对HPLC的工作原理有疑问吗？

我们的HPLC学习中心涵盖了HPLC的基础知识、仪器的工作原理、开发和转换HPLC方法时需要考虑的事项以及典型应用。

访问我们的 HPLC 学习中心›

有关色谱分析数据软件，质谱分析和我们的 培训资源的信息，请访问 HPLC 培训 & 教育。

Vanquish 3D Product Tours

HPLC 和 UHPLC 仪器是由多个组件组成的复杂系统。您是否想看看我们的Vanquish HPLC/UHPLC系统内部是什么样子？

我们的交互式3D LC产品导览和虚拟演示可帮助您自主探索这些系统。每项演示都包含视频以及其他有关主要特点和功能的详细说明。

参加 Vanquish产品之旅›

希望您的色谱分析实现更高的分辨率、速度和一致性？我们广泛的产品系列提供各种LC色谱柱，以满足所有分离需求，包括改进的分辨率、增强的灵敏度、更快的分析速度和一致的性能。我们还关注样品的安全性和完整性。在我们齐全的产品线中，您总能找到适合自身应用、自动进样器和预算需求的合适样品瓶和瓶盖。

我们在产品选择和订购、产品应用和使用、仪器支持、现场服务履行、返厂维修或为您感兴趣的产品寻找经销商或分销商方面提供帮助。

联系技术支持›

 

 

CMD Wide-format style fixes
Style Sheet for Komodo Tabs
Style Sheet for Global Design System
CMD Wide-format style fixes
Style Sheet for Global Design System
Style Sheet for Komodo Tabs