HPLC-CAD 实验室设置

 
 
 
产品简介

 
 
 
HPLC-CAD系统设置

安装 CAD 前要考虑的主要因素包括之前与您的 LC 系统，气体供应，排气和实验室条件配合使用的流动相类型。

HPLC 仪器

最好的情形是，您可以使用专用 LC-CAD 系统，无需与非挥发性添加剂 (如磷酸盐缓冲液或非挥发性离子配对试剂) 配合使用。但是，如果您确实计划将 LC 仪器用于多种方法，即使在 CAD 断开时，也应避免使用非挥发性流动相添加剂。

当然，这种情况可能不适合您的预算或实验室空间，因此下一个最佳做法是进行大量冲洗和更换 LC 系统的所有浸湿部件，这些部件可能会具有“记忆效应”，从而保留非挥发性物质。

记忆效应是指在先前运行中使用的半挥发性和非挥发性化合物缓慢持续释放，从而导致基线干扰，噪声和更高的背景电流。通常，此交换包括您的溶剂管线，入口筛板和色谱柱。

冲洗用于非挥发性缓冲液的色谱柱中的无机盐可能需要极长的时间，因此考虑专门用于与 CAD 友好型流动相配合使用的色谱柱。

在严重污染的情况下，您可能需要换用脱气机纯化柱等其他组件。

氮气供应

CAD 需要 4.8 bar (70 psi) 的恒定气体供应压力，最大供应压力为 6.2 bar (80 psi) ，通常使用 4 L/min 的氮气。

≥应确保气源纯度> μm 95% ，不含水蒸气，碳氢化合物 / 油蒸气和颗粒 (0.1 μ m)。如有必要，请使用亚微米颗粒或碳过滤器与气体源附近的水冷凝阱结合。

如果溶剂不是高度易燃，您可以在 CAD 中使用加压空气—我们强烈推荐氮气。对于诸如 THF 之类的溶剂，形成易燃或易爆混合物，您必须使用纯度为 99% 的氮气。

您可以使用三种常用方法向 CAD 供应氮气：发电机，气瓶和液氮罐。在所有这些选项中，我们建议您使用气体发生器，以帮助按需不间断地从压缩空气源供应干燥氮气。

排气设置

CAD 排出的气体可能含有易燃，有毒或腐蚀性的部件，因此您必须将探测器连接到排气系统以安全去除实验室中的排气。

避免将气体排气连接到强负压或脉动压力通风系统，因为这可能会导致 CAD 内的压力不稳定，从而导致性能下降。请勿将主动式排气泵连接到 CAD 排气系统。

您还需要防止 CAD 运行时排气压力平衡发生中断。使用相同的排气孔打开和关闭通风罩可能会导致基线 CAD 信号发生变化。 

基本排气指南包括：

实验室环境

稳定的实验室环境有助于减少基线伪影，噪声和漂移，并提高检测器的整体性能。 防止实验室设置中断的较佳方法包括：

1. 避免温度波动

• 不要将 CAD 置于阳光直射，靠近加热或冷却源或空气管道下
• 避免温度发生重大变化且气流强度较大的位置
• 一致的交流 / 加热设置
• 气流不均匀

2. 提供良好的氮气和排气条件

• 稳定且稳定的气体供应
• 无需脉动排气

 
 
 
如何启动 CAD

除了遵循 HPLC 的标准最佳实践和注意事项外，我们还建议您在准备 CAD 以供操作时遵循以下指导原则：

1. 根据型号，验证在设备或软件上设置了正确的雾化器气体压力设置 (如雾化器证书中所述)。
   
   
2. 在打开流动相流之前，务必打开氮气流量。打开气流后至少等待 5 分钟，然后再打开液体流量。否则可能会使探测器淹没。
   
   
3. 确保您在控制软件中设置了较高的流速限制，并且不会超过 CAD 的流速等级。
   
   
4. 与 VWD 或 DAD 的温度平衡类似，您应该在开始分析之前让 CAD 平衡。使用蒸发温度 (EvapT) ，流动相组成和流速等初始分析条件平衡，并使基线和噪声水平保持稳定。 

 
 
 
如何关闭 CAD

必须遵循这些程序以去除有害物质，并确保在流动相溶剂蒸发时， CAD 中的任何位置都不会存在任何残留物。否则，剩余的静态液体 (尤其是酸性修饰剂) 可能会腐蚀 CAD 中的某些组件。

适合短待机时间 (例如过夜)

1. 保持氮气流至 CAD ，以防止任何积聚或残留。
   
   
2. 将 μL 相流速降低至 50 μ L/min ，直至恢复正常运行。
   
   
3. 将自动进样器中的进样阀设置到注射位置。
   
   
4. 确保柱温不超过 40 °C。

对于长时间 * 停机时间 (例如，一周或更长时间)

1. 使用适当的纯溶剂 (最低 LC/MS 级) 冲洗您的 HPLC-CAD 系统。确保将残留样品组分，色谱柱或缓冲液中的杂质完全去除检测器中。
   
   
   • 如果不使用缓冲器，请用甲醇等方法冲洗系统。
     
     
   • 如果使用缓冲液，请用多种体积 (例如，标准系统 1.0 mL/min ， 10 分钟) 的甲醇和水冲洗系统 (50 ： 50) ，以防止在液流中积聚盐。如果检测器中的溶剂不与水混溶，请使用适当的中间溶剂。
      
2. 从流路中去除色谱柱，然后用高纯水和甲醇 50/50 (v/v) 混合物清洁系统和检测器至少 1 小时
   
   
3. 如果您看到高背景电流，明显的漂移或高噪音水平，请延长此冲洗周期，直到恢复良好的工作条件。
   
   
4. 接下来，使用纯 LC-MS 级异丙醇冲洗系统。
   
   
5. 停止流动相，但保持气体流至 CAD 5 分钟，让探测器干燥。
   
   
6. 关闭气流，然后等待系统压力达到零。
   
   
7. 关闭探测器的气体供应。

* 有关如何在长时间关闭后运输和启动 CAD 探测器的详细信息，请参阅我们的操作手册。

 
 
 
如何清洁您的 HPLC-CAD 系统

1. 如果您的 CAD 开始持续显示高噪声，您应首先排除问题是来自 LC 系统还是流动相。
   
   
   • 通过冲洗适当的纯溶剂 (如水) 来清洁流路，并验证 CAD 信号是否低，大约为 1 pA。
      
2. 如果您确定 LC 系统和流动相不是问题，则可能的根本原因是雾化器，雾化室或蒸发管受到污染。更积极的冲洗程序有助于清除污染并恢复 CAD 性能。
   
   
   • 用合适的清洁溶剂混合物冲洗 (不带柱) 系统 - 如 Thermo Scientific ChromaCare LC-MS 仪器冲洗溶液： LC/MS 级乙腈，甲醇，水和 2- 丙醇的四元混合物，或超纯水 / 甲醇的 50/50 (v/v) 混合物。
      
3. 在冲洗 CAD 系统时监控背景电流。在大多数情况下，背景电流会随着时间的推移而降低，数小时后，您将看到正常的背景电流。
   
   
   • EvapT 的增加周期 (35 °C 时 20 分钟， 70 °C 时 20 分钟， 35 °C 时 20 分钟) 可以帮助更快地重新建立良好的运行条件。
     
     
   • 如果在冲洗 24 小时后背景电流没有显著改善，我们建议维修技术人员进行全面的预防性维护，包括清洁雾化器，雾化室和蒸发管。

 
 
 
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