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BacMam 离子通道
BacMam 系统已用于制备可轻松转导到哺乳动物细胞中的 K+ 和 Na+ 离子通道试剂。 凭借这种可转导性，可在药理学相关细胞类型中加快检测方案的开发。
BacMam 系统
离子通道对许多细胞功能和过程至关重要。 将离子通道作为药物靶标进行研究所面临的一个挑战是生成稳健的细胞模型。 为应对这一挑战，我们已使用 BacMam 系统开发了一套离子通道试剂。 BacMam 技术的基础是，使用一种昆虫细胞病毒（杆状病毒）实现基因在哺乳动物细胞中的高效递送和表达（图1）。
图1.该示意图描绘了 BacMam 介导的向哺乳动物细胞中递送基因的机制。细胞吞饮 BacMam 颗粒，并在特定哺乳动物启动子的作用下表达基因。该过程在转导后 4-6 小时内，在U-2 OS 和其他类型细胞中隔夜才能完成。
转导工作流程和适用的细胞
使用 BacMam K+ 和 Na+ 通道试剂盒成功转导的细胞类型包括 U-2 OS、HEK 293、tSA-201、CHO、HUVEC 和 HeLa。 我们不推荐使用造血细胞，因为这类细胞始终表现出很差的 BacMam 转导效果。 BacMam K+ 和 Na+ 通道试剂盒包括一种病毒储备液（BacMam 试剂，组分 A）和一种可增强表达的增强剂试剂（BacMam 增强剂，组分 B）。 增强剂在使用前复溶于 DMSO（组分 C）并按照实验方案中的指示添加至细胞中（图2）。
图2. 使用拓展方案，BacMam 介导的向哺乳动物细胞中递送基因的工作流程。
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便利的检测形式
作为即用型病毒储备液，BacMam 离子通道试剂能够立即运行检测（如剂量反应曲线或膜片钳实验）或在转导后冻存细胞以供日后使用（图4和5）。
对于 BacMam K+ 通道试剂，我们提供 FluxOR™ 钾离子通道检测试剂盒以便使用高灵敏度荧光染料测定电压和配体门控钾通道中的离子通量。
对于 BacMam K+ 通道试剂，我们提供 FluxOR™ 钾离子通道检测试剂盒以便使用高灵敏度荧光染料测定电压和配体门控钾通道中的离子通量。
图3. 在 FluxOR™ 钾通道检测中使用新鲜或冷冻 U-2 OS 细胞时两个 K+ 靶标的剂量反应。分离已转导的表达 Kv1.3（图 A）或 Kv7.2/Kv7.3（图 B）的 U-2 OS 细胞，直接铺板用于检测或在液氮中冷冻一周，解冻后用于检测。
图4.表达 BacMam hERG (Kv11.1) 和 BacMam Nav1.5 离子通道的 U-2 OS 细胞的自动膜片钳 (APC) 测量。根据方法所述，U-2 OS 细胞与5%体积比的每种构建体进行共转导。左下图显示了在 Ionworks HT™ 仪器中应用于细胞的两步电压方案。对细胞保持 –100 mV 的电压，并应用尾电流方案（蓝色线）以测定左图中显示的 hERG 介导的外向尾电流。第二步（红线）则调至 0 mV 以捕获 NaV1.5 所携带的内向峰电流，如右图中的扩展时标所示。
多个亚基通道的灵活表达
BacMam 技术也可用于灵活表达多个亚基靶标，例如通过共表达折叠成四聚体的 Kv7.2 (KCNQ2) 和 Kv7.3 (KCNQ3) 亚基而形成的功能性电压门控钾通道（图5）。 可将多种构建体或单一物种靶标滴定到细胞中，以实现化学计量和在特定检测中获得最佳的表达和信号窗口。
图5. 单独表达（左图）或共表达（右图）的 Kv7.2 和 Kv 7.3 的 FluxOR™ 钾离子通道检测标签。 根据方法所述，使用每种构建体按 5% 体积比单独或共同对细胞进行转导，然后进行 FluxOR™ 检测。 使用对照病毒（无效 BacMam）显示检测中的背景活性水平（最低线）。 按 1:5 体积比注入刺激物，使得最终添加的钾浓度为 10 mM 以及最终添加的铊浓度为 2 mM。
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。
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