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聚糖在膜蛋白和分泌性蛋白中扮演着多种结构性和功能性角色,在其合成过程中大多数蛋白质都会经历一定程度的糖基化。 全球监管机构,包括 FDA 和 EMA 在内,不断提高对制造商全面分析治疗药物糖基化以及证明过程如何影响聚糖成分的要求。
蛋白质生物治疗药物糖基化模式的变化已证明可影响其半衰期、稳定性、安全性和效果。 总之,聚糖分为两大组:0-连接聚糖和 N-连接聚糖。 O-连接糖基化指的是通过氧原子将低聚糖粘附至丝氨酸或苏氨酸残留基,N-连接糖基化指的是通过氮原子将低聚糖粘附至天冬酰胺酸。
60% 以上的治疗用蛋白质在加入 N- 或 O-连接聚糖进行生物合成后经过翻译后修饰。 生物治疗药物糖基化可能受到许多过程相关因素的影响,比如 pH 值、碳源、溶解氧、生产过程中的温度以及表达系统的选择。
虽然糖基化是最常见的蛋白质翻译后修饰,单从分析的角度看也是要求最高的方式。 为了保持一致的生物治疗糖基化模式,高效的制造工艺和有效的聚糖表征必不可少。 糖蛋白的完整分析可提供关于低聚糖的一级结构以及通过多种不同分析方法获得的个别糖基化部位变异的信息。
要查看与聚糖分析有关的产品和工作流程,请访问我们的聚糖分析产品页面。
完整糖蛋白分析用于确定糖基化的模式和程度。 由于粘附的聚糖部分具有异质性,使用高分辨率高质量精度 (HRAM) 质谱分析 (MS) 结合色谱分离可以最出色地执行完整糖蛋白分析,能够深入了解蛋白质或生物治疗药物中出现的各种糖型。
可以执行肽水平的聚糖分析,目标是获得糖基化部位的聚糖成分和肽序列。
监测特定聚糖种类或者测定特定聚糖组的相对数量为生物治疗药物开发提供了重要信息。 由于聚糖结构复杂,所以在蛋白质释放聚糖时执行定量分析和鉴定。 N-连接聚糖通过酶处理进行释放,而 O-连接聚糖需要通过化学方法才能释放,因为不存在这种用途的酶。 聚糖没有发色团,因此对传统 LC-UV 检测响应较差;同样地,通过 LC 荧光检测进行高灵敏度分析之前通常标记荧光标签,最常见的标签为 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB)。 MS 已成为聚糖结构解析的最重要工具之一。 但是,由于大多数聚糖不能有效电离,所以也可以执行 2-AB 标记以提高灵敏度。
立即访问适用于来自治疗性蛋白质的 2-AA、2-AB 标记 N-聚糖的 12 种以上的 IC 和 UHPLC 方法。 或者访问来自 NIBRT Ireland 的最新特色应用——通过 UHPLC-FLD 结合 MS 确认快速分析生物治疗抗体中的 N-聚糖种群。
单糖成分,即岩藻糖、半乳糖胺、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,通常确定为与蛋白质结合的糖单位的数量和成分,而且会影响生物治疗药物的疗效。 单糖为弱酸,在基本条件下可以使用阴离子交换色谱进行分离。 样品经过酸性水解后可释放单糖,经过色谱分离后可通过高效阴离子交换色谱与脉冲安培检测 (HPAE-PAD) 进行分析。
HPAE-PAD 是一种成熟的碳水化合物分析方法,通过碳水化合物的羟基和羧基之间基于电荷、大小、成分、异构性和键合的特异性相互作用分离碳水化合物。
糖基化是重要的细胞内过程,涉及各种酶和底物的相互作用。
在本应用中展示了对释放的荧光标记 N-聚糖进行聚糖分析和结构表征的完全集成的工作流程。
碳水化合物分析,又称为糖基化分析、聚糖分析,或者有时简称为糖分析,随着药物开发、癌症研究、干细胞研究和生物燃料开发多样化而日益重要。
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