荧光成像中的光漂白效应及其消除方法

如何改进光漂白效应

尝试使用不同的染料

一些染料经过特殊调配具有更强的光漂白耐受性。如果您发现所选用的染料发生了很强的光漂白现象，或许可以在实验设置时尝试一些其他染料或新型染料看看效果是否更好。

尝试使用中性密度的滤光片

您也可尝试使用中性密度的滤镜降低照射样本的光子数量（但您的靶信号也会随之减弱），或改变显微镜的增益设置以使用更少的光线。唯一需要注意的是，当您需要对样本的成像结果进行对比时，应确保所有样本都采用了相同的设置。

最小化曝光程度

减少光漂白效应的最简单方法就是减小样本在激发光照下的曝光程度，可通过多种不同的方式实现这一目的：

• 找到您希望成像的区域，并使用透射光进行对焦，然后使用荧光按需拍摄图像。
• 找到样本目标旁边的一个区域，并使用荧光进行对焦，然后移至邻近目标视野并按需拍摄图像。
• 找到希望成像的样本区域，但使用短于最佳的曝光时间进行对焦，也可结合使用像素组合技术以减少曝光时间。

建立光漂白曲线

某些荧光基团非常稳定，您无需过分担心光漂白效应；但也有一些荧光基团一点都不稳定；或者您也可能想专门观察荧光强度的微弱变化。在上述几种情况下，您可能都需要创建光漂白曲线，利用该曲线，您可以及时修正由光漂白造成的而非实验条件（如药物处理）所致的荧光强度损失。

使用可提供抗衰减保护的封片剂

如果您要对固定细胞进行成像，并想避免光漂白效应，则可选用一些商业封片剂对样本进行抗衰减保护，这些封片剂的保护效果主要取决于您使用何种荧光基团，您可能需要尝试不同的配方以找到最适合的一款，具体请参见封片剂部分。