TrypLE™ 细胞解离与采用 Countess® II FL 自动细胞计数仪进行细胞计数

Countess® II FL 自动细胞计数仪是一种由 Invitrogen 设计生产的台式仪器，利用台盼蓝染色法进行细胞计数与细胞活力测量。Countess™ 提供快速、简易且准确的细胞计数方式，无需使用血细胞计数器，因此可避免细胞手动计数的枯燥与主观性。
 
GIBCO® 品牌的 TrypLE™ Select 与 TrypLE™ Express 是高纯度重组丝氨酸蛋白酶，不含动物源成分 。TrypLE 旨在以一种更温和的方式除去塑料培养瓶和平皿表面的贴壁细胞。此外，它在室温下稳定，可直接替代胰蛋白酶。

• 本实验方案详细陈述了采用 TrypLE 细胞解离产品与 Countess® II FL 自动细胞计数仪来获得准确细胞计数结果的流程。

采用 TrypLE™ 细胞解离试剂进行细胞解离

1. 在 37℃ 下预热 TrypLE™。


2. 将培养瓶（或者平皿）内的生长培养基吸走，用 5 mL 不含钙镁的 Dulbecco 磷酸盐缓冲液 (D-PBS) 洗涤细胞，轻轻地来回晃动细胞瓶。慢慢倒出 D-PBS。


3. 向瓶内加入合适体积的预热 TrypLE™ Select 或 TrypLE™ Express（即，T25 cm² 瓶中加 1 mL，T75 cm² 瓶中加 3 mL）。轻轻晃动瓶子，使得溶液能够完全覆盖细胞层。


4. 在 37℃ 下孵育直至可见细胞分离（每5分钟观察一次）。轻轻拍打瓶子，使细胞分散。


5. 添加合适体积的完全生长培养基，重悬细胞，并用移液器反复吸吹以打散可能存在的细胞团。

采用 Countess™ 自动细胞计数仪进行细胞计数与活性测定

1. 接通电源启动仪器。


2. 在进行细胞计数前，先依次按 Settings（设定）和 Cells（细胞）将模式调到 Cell（细胞）模式


3. 按 Parameters（参数）按钮以确保设定正确。


4. 从步骤5中取 10 μL 细胞悬液，加入到 10 μL 0.4% 台盼蓝染料中。用移液器上下吹吸，轻轻混匀液体。


5. 添加 10μL 样品混合物到 Countess 细胞计数室载玻片一侧的半月形计数腔孔内。


6. 将载玻片样品 A 侧先插入 Countess™ 的载玻片端口，直到听到轻柔的咔哒声。可从一个腔 (A) 或两个腔（A 和 B）对样品进行计数。


7. 按下 Zoom（变焦）按钮，使用聚焦旋钮来优化图像分析：
   
   
   • 活细胞具有明亮的中心区域与暗淡的边缘。
   • 死细胞整个细胞呈均一的蓝色，无明亮的中心区域。


8. 使用网格定位载玻片，并检查多个区域内的图像。如有必要，使用 Focus lock（聚焦锁定）旋钮锁定聚焦。


9. 按下 Count cell（计数细胞）按钮获取结果。


10. 记录细胞计数结果或者读数后保存。


11. 按下 more data（更多数据）按钮来查看数据详细信息与数据的图解表示。


12. 取出并正确处理废弃载玻片。
    

如需 Countess™ 自动细胞计数仪的详细使用说明，请参阅 www.lifetechologies.com/countess 上的手册