Search Thermo Fisher Scientific
CultureOne神经元细胞培养添加剂
减少神经前体细胞混入、促进神经元更快成熟、稳定维持数周的培养体系。本视频比较了采用/不采用CultureOne添加剂培养超过5周后的明显结果差异。
神经元培养可维持5+周
CultureOne添加剂用于确保从人多能干细胞(hPSC)源神经干细胞(NSCs)分化的神经细胞在下游应用之中具有最高的利用率。
点击图片放大
CultureOne添加剂可以改善成像、RNA表达及电生理检测结果。相对于传统的分化方法，采用CultureOne添加剂分化2周后，成像结果显示神经细胞分布均匀(MAP2+)，NSCs (SOX1+)和细胞结块减少75%以上(A)。这些细胞具有更高的神经元mRNA表达，更低的神经干细胞 mRNA表达(B)，多电极阵列(MEA)测定时具有更高的发放频率。
A. 分化2周后呈像
传统分化
CultureOne添加剂
B. 2周后 qPCR测定mRNA表达
采用CultureOne添加剂从神经干细胞分化得到的神经元细胞在接受KCI去极化刺激时观察到细胞内钙增加，这意味着培养的细胞表达了更高的电压门控钙离子通道——这一神经元成熟和可兴奋的重要标志。与此同时，分化2周后神经突起更长的现象表明CultureOne添加剂促进了神经元成熟。
与通过抑制有丝分裂进行富集的方法（包括Ara-C和丝裂霉素C）进行比较。采用CultureOne添加剂分化得到的神经元细胞培养物表现出了更显著的神经突触生长和更低的细胞聚集和死亡现象。
CultureOne添加剂可以改善成像、RNA表达及电生理检测结果。相对于传统的分化方法，采用CultureOne添加剂分化2周后，成像结果显示神经细胞分布均匀(MAP2+)，NSCs (SOX1+)和细胞结块减少75%以上(A)。这些细胞具有更高的神经元mRNA表达，更低的神经干细胞 mRNA表达(B)，多电极阵列(MEA)测定时具有更高的发放频率。
A. 分化2周后呈像
传统分化
CultureOne添加剂
B. 2周后 qPCR测定mRNA表达
采用CultureOne添加剂从神经干细胞分化得到的神经元细胞在接受KCI去极化刺激时观察到细胞内钙增加，这意味着培养的细胞表达了更高的电压门控钙离子通道——这一神经元成熟和可兴奋的重要标志。与此同时，分化2周后神经突起更长的现象表明CultureOne添加剂促进了神经元成熟。
与通过抑制有丝分裂进行富集的方法（包括Ara-C和丝裂霉素C）进行比较。采用CultureOne添加剂分化得到的神经元细胞培养物表现出了更显著的神经突触生长和更低的细胞聚集和死亡现象。
CultureOne添加剂的作用机制
点击图片放大
点击图片放大
神经元分化培养基的经典配方（基于100 mL的终体积）
| 试剂 | 货号 | 体积 | |
|---|---|---|---|
| Gibco™ Neurobasal™ Medium | 21103049 | 96 mL | |
| Gibco™ B-27™ Supplement (50x) | 17504044 | 2 mL | |
| Gibco™ GlutaMAX™ Supplement (100x) | 35050061 | 1 mL | |
| Gibco™ CultureOne™ Supplement (100x) | A3320201 | 1 mL | |
| Ascorbic acid (200 mM, e.g., Sigma-Aldrich™ Cat. No. A8960) | NA | 100 µL | |
| 可将10-20 ng/mL的胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和10-20 ng/mL脑源神经营养因子(BDNF)加入到神经元分化培养基（NDMC）之中，以提升由不同神经干细胞细胞系得到的神经元的存活率。 | |||
常规的两周神经干细胞分化方案所需的NDMC体积（采用CultureOne添加剂的神经元分化培养基）
| 多聚赖氨酸和层粘连蛋白包被的培养平板（孔数#） | 孔表面积(cm2) | 每孔建议的NSCs(5 x 104 细胞/cm2) | NDMC之中的NSCs浓度(细胞/mL) | 每孔铺盘的NSC/NDMC悬液体积(mL) | 每孔的NDMC营养物体积(mL) | 每孔总的NDMC营养物补充次数（每周饲养2-3次） | 每板的总NDMC体积(mL) | 每500 mL NDMC（对应1单位的CultureOne添加剂）对应的板数 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 96 | 0.32 | 16,000 | 160 | 0.1 | 0.1 | 5 | 57.6 | 8 |
| 48 | 0.95 | 47,500 | 238 | 0.2 | 0.2 | 5 | 57.6 | 8 |
| 24 | 1.90 | 95,000 | 190 | 0.5 | 0.5 | 5 | 72.0 | 6 |
| 12 | 3.80 | 190,000 | 190 | 1.0 | 1.0 | 5 | 72.0 | 6 |
| 6 | 9.60 | 480,000 | 240 | 2.0 | 2.0 | 5 | 72.0 | 6 |
采用CultureOne添加剂获得的细胞产量
在我们的实验室，在96孔板的每个孔中接种16,000个H9 胚胎干细胞源神经干细胞，并采用CultureOne添加剂分化2周后通常得到富集了的分化神经元约9000个，也就是神经干细胞起始数目的60%的数量。请注意，不同神经干细胞系的产量可能存在差异。
我们提供单独试剂形式的CultureOne添加剂，使您可轻松地搭配Gibco™神经细胞培养入门试剂盒，实现简单、易于扩展规模的出色神经元细胞培养。
资源
支持
仅供科研使用，不可用于诊断目的。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。