利用TOPO快速高效地完成PCR克隆

将PCR扩增的DNA片段 (带有A突出端或平末端) 直接连接至超过40种亚克隆、测序或表达载体内，只需5分钟即可完成——获得多达95%的重组克隆。

 
  • 快速——避免了低效率的连接反应，省去了费力的限制性酶搜索工作
  • 高效——可以获得多达95%的重组克隆，最大程度减少了集落筛选
  • Troubleshooting tool - if it can’t be cloned with TOPO, it can't be cloned

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TOPO cloning protocol


图1. TOPO克隆步骤。 TOPO PCR克隆只需三个简单的步骤。 将PCR产物与TOPO克隆载体混合，等待五分钟，然后转化入大肠杆菌。

步骤 Topo TA 克隆试剂盒 TA/UA 克隆 限制性酶切连接法
使用现有引物？是是否
载体是否可直接用于克隆？是是否
包含连接试剂？是是否
单独制备或购买感受态细胞吗？不，已包括在内购买： 0小时
制备： 长达　6 小时		购买： 0小时
制备： 长达　6 小时
连接时间5 分钟，1 小时）。2 - 23小时
重组效率高达　95%60 - 80%~60%
克隆所需时间5 分钟，1 - 12小时2 - 23小时

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仅供科研使用，不可用于诊断目的。