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QuantiGene Plex 基因表达检测
QuantiGene Plex 基因表达检测的独特优势
- 提高效率—统一的基因和蛋白质多重 检测解决方案— QuantiGene 和 Procartaplex matched panel 是互补的，高度关联的，在同一个 Luminex 平台上运行，无缝集成，以获得多维度数据
- QuantiGene与 与金标准技术qPCR 具有高度相关性
- 适用于困难的样本类型，包括 FFPE 组织中的降解和交联 RNA，以及直接用于血液，无需 RNA 纯化。
- 真正的多重检测—可在同一孔中测量多达 80 个靶标基因和管家基因，无需交叉反应，且所需的样品数量少
- 标准化平台— 96 孔板规格与 Luminex 200 ， MAGPIX 和 FlexMap3D 系统兼容， 384 孔板适用 FlexMap3D 系统
- 简单的工作流程—无需反转录，只需进行靶标杂交和信号放大的类似ELISA的工作流程
- 大量经过验证的基因库—从超过 22000 种基因中进行选择，以创建通路和疾病相关的检测 panels
- 定制—如果我们没有您的基因，我们可以在 3-4 周内创建您的定制检测panels
QuantiGene Plex 检测的工作原理
QuantiGene Plex 检测利用 xMAP Luminex 微珠进行 3 到 80 种 RNA 靶标的多重检测，随后进行基于分支 DNA 的信号扩增。该检测在96孔板中进行，使用 Luminex 仪器检测信号。
视频：QuantiGene Plex –工作原理动画
QuantiGene Plex Assays结合了分支DNA技术和Luminex xMAP技术，用于准确的多重基因表达分析。分支 DNA 检测通过信号放大而不是靶标扩增直接测量 RNA 转录本。
QuantiGene Plex 基因表达流程
QuantiGene Plex 基因表达检测是一种使用 xMAP Luminex 微珠进行的基于杂交的检测，可在 96 或 384 孔板中进行。该检测试剂盒基于对 RNA 靶标的直接定量，用于多通路分析 3 至 80 个 RNA 靶标以及分支 DNA (bDNA) 信号放大技术。在第一天，将样品裂解以释放 RNA ，并与靶标特异性探针组和 Luminex 捕获微珠一起孵育过夜。在第二天，通过前置放大器，放大器和标记探针的顺序杂交构建信号扩增树。每个扩增装置均可提供 400 倍信号扩增，每个靶标 RNA 拷贝有 6 个扩增单位，每个拷贝 RNA 产生 2 ， 400 x 信号扩增。通过在 Luminex 仪器上使用荧光报告分子藻红蛋白检测信号，以便进行读数和分析。
QuantiGene Plex 检测流程
第 1 步：样品制备：裂解样品以释放并稳定 RNA。RNA 检测适用于多种样品，例如：培养细胞，病毒，细菌，植物和动物组织， FFPE 组织，全血和 PAXgene 血液或纯化 RNA。
第 2 步：靶标杂交：使用靶标特异性探针组检测板 (捕获延长器– CES ，标签延长器– LES 和封闭探针) 在 96 孔或 384 孔板中过夜杂交。
第 3 步：信号放大使用分支 DNA (bDNA) 技术实现信号放大。首先，一个单独的预放大器分子与每对标记延长器杂交。然后，多个放大器分子与每个前置放大器杂交。最后，多个生物素化标记探针寡核苷酸与每个放大器杂交。
第 4 步：检测：添加链霉亲和素藻红蛋白（SAPE）会产生信号，该信号与样本中目标RNA的数量成正比。通过 Luminex 仪器可以读取这些信号。
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第 5 步：数据分析：使用 Thermo Fisher Connect 云 QuantiGene 数据分析 应用程序可随时随地从任何计算机分析数据。如需高级分析和可视化功能，可使用免费的桌面应用软件 Applied Biosystems 转录组分析控制台 (TAC) 软件进行数据分析。TAC 使用散点图和火山图，分层群集等工具提供可视化和解释，并提供指向公开可用注释的链接。
QuantiGene Plex 高通量检测
QuantiGene Plex 384 孔检测形式可实现高通量形式的多重基因表达分析。该检测方法使用目标特异性探针来捕获目标的RNA，并使用分支 DNA 技术来放大荧光信号，这些信号由FLEXMAP 3D，Luminex平台读取。这种检测形式的自动化和批次处理选项可增加样品处理量，缩短手动操作时间，同时可快速获得筛选项目结果。
QuantiGene Plex 384孔检测试剂盒（货号 QP1016) 包含在 384 孔板中进行 QuantiGene Plex 检测的所有必需试剂，缓冲液和板。使用我们的 检测 panels 选择工具设计适合您 的特定靶标 QuantiGene Plex 检测 panels，或联系您当地的技术销售专员获取更多信息。
QuantiGene Plex 384 孔示例数据
QuantiGene Plex 384 孔检测设计用于提高样品处理量，缩短手动操作时间，同时可快速获得筛选项目结果。以下是使用以下推荐设备的 384 孔检测试剂盒生成的示例数据。
刺激 Hela 细胞产生细胞因子
使用细胞刺激混合物刺激培养的 HeLa 细胞中的细胞因子产生，并监测长达 24 小时的不同时间点。在该实验中，使用全套 80-plex 检测 panels 用于专注于细胞因子和趋化因子生物标记物的筛选目的。
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图 1.在细胞刺激混合物刺激后的不同时间点分别对 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达。Y 轴平均标准化表达； x 轴： mRNA 靶标； z 轴：刺激时间点。只显示经测试的基因靶标的子集。HeLa 细胞用 384 孔规格培养，并用细胞刺激混合物刺激长达 24 小时 (1 小时， 2 小时， 4 小时， 24 小时)。未刺激的细胞用作基线对照。在指定时间点，根据 使用液体处理法 (Thermo Fisher PlateMate) 针对细胞裂解液的 QuantiGene 样品制备方案裂解细胞。在所有时间点的所有样品制备后，均执行 QuantiGene Plex 384 孔检测。图表显示了标准化的基因表达结果。
用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达揭示了上调或下调的程度。平均标准化表达 (y 轴) 代表 x 轴上列出的 mRNA 靶标的基因诱导水平，而刺激的时间点则显示在 z 轴上。值得注意的是，例如 IL1B ， IL8 和 TGFB1 在不同刺激时间点显示出明显的相对基因表达。虽然 TGFB1 的相对表达随着时间的推移而逐渐增加，但 IL1B 的峰值表达在 24 小时左右的稍后时间点会出现。表 1 显示了用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达和倍数变化。
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表 1 和 2用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达和倍数变化。
了解科学家如何在其研究中使用 QuantiGene Plex 384 孔：
- Danahay et. al. Cell Reports 10:239-252.
- Ferrer et al. Stem Cells Transl Med 2:911-922.
- Severyn et al. J Biomol screen 9:989-997.
- Neilsen et al.
适用于高通量和批量处理的 QuantiGene Plex 仪器和设备
查找仪器和设备，简化您的 QuantiGene Plex 384 孔工作流程。有关批量处理 的详细选择和建议，请参阅 QuantiGene Plex 384 孔手册 或 联系 您当地的技术销售专员。
| 流程步骤 | 推荐设备 | 描述 | |
|---|---|---|---|
| 样品孵育和靶标杂交 | 温度调节型轨道振荡器：MaxQ 4450 台式轨道摇床 |  | 多功能摇床适用于少量容器和细胞培养及许多其他应用的培养。 |
| 孔板清洗 | 磁力架 | 适用于 384 孔板的自动磁力架。 | |
| 样品孵育 | 板封膜ALPS 50 V 手动热封仪 |  | 通过各个孔周围的一致性紧密密封，避免样品的蒸发损失和孔之间的交叉污染。 |
| 样品和板添加 | Versette 自动化液体工作站 |  | 紧凑型液体处理器，具有用户友好性程序，可靠的性能，可选96或384通道吸头。 |
| 多因子检测 | Luminex FLEXMAP 3D 仪器系统 |  | 最先进的多功能多重检测仪器，可以在单次反应体积中同时测量多达 80 次检测。 |
QuantiGene Plex 特点
| 参数 | 96孔 | 384孔 | |
|---|---|---|---|
| 产品特点 | 灵敏度（检测限） | 1000 – 2000 个转录本 / 检测孔 | 2000 – 4000 个转录本 / 检测孔 |
| 变异性 (C.V.) | ≤15% | ≤20% | |
| 线性 | ≥3 logarithmic units | ||
| 多重检测水平 | 3–80 | 3–80 | |
| 样品 | 培养细胞，细菌，全血， PAXgene 血液或干血斑，新鲜 / 冷冻组织 (动物或植物) ， FFPE 样品，纯化 RNA | ||
| 兼容的 Luminex 仪器 | |||
| 检测体积 | 目标探针杂交 | 100 µL | 70 µL |
| 预杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| AMP 杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| 标记探针杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| SAPE | 100 µL | 30 µL | |
QuantiGene Plex FAQs
- QuantiGene Plex 检测兼容哪些样本类型？
全血，新鲜组织，培养细胞和纯化 RNA 均经过验证。其他样品类型&，包括 Tempus 血液，细菌， H E 染色 / 未染色 FFPE 和血斑也应适用。 - QuantiGene Plex 检测提供哪些数据分析软件解决方案？
可从任何计算机，任何地方使用 QuantiGene 基于云的应用程序分析数据。如需高级分析和可视化，可使用免费的桌面应用软件 Applied Biosystems 转录组分析控制台 (TAC) 软件分析数据。 - VorTemp ™ 56 振荡培养箱可以用于杂交吗？
我们强烈建议使用 MaxQ 振荡培养箱以获得最佳检测性能。可以使用 Vortemp ，但建议使用 800 rpm。 - 建议的杂交温度是多少？
第 1 天的温度为 54°C ，而第 2 天的温度为 50°C 请使用 QuantiGene 培养箱温度校验套件 (QS0517) 验证培养箱温度。 - QuantiGene Plex 试剂的正确储存条件是什么？
试剂盒到达后，请按照说明储存单一组分。Preamp /Amp/LP 稀释液，微珠混合物， SAPE ， SAPE 稀释液应储存在 4°C 下，而探针组混合物，蛋白酶 K 和封闭试剂应储存在 -20°C 下 其他室温储存。有关详细信息，请参阅产品说明书。 - 试剂盒中包括哪些组分？
试剂盒提供进行检测所需的所有试剂，但单独订购的靶标探针和微珠混合物除外。有关试剂列表，请参阅用户手册。 - QuantiGene Plex 384 孔检测是否可用于 miRNA 或 DNA 分析？
否，仅 QuantiGene 单重检测可用于 miRNA 和 DNA 分析。 - 如果我的 Panel 中使用了任何质控 / 管家基因
建议使用三个或更多的对照 / 管家基因来对基因表达结果进行标准化。 - 可以使用热封仪在检测的第 2 天密封板
不需要，建议使用提供的密封件手动密封。热密封会变形平板，导致清洗问题。 - 该如何稀释样本呢？
对于细胞裂解物或血液裂解物，请使用稀释的裂解混合物 (DLM) ；对于组织匀浆，请使用均质溶液。 - 如何密封第 1 天平板以进行靶标探针杂交？
第 1 天板可手动密封或使用热封仪密封。用于手动密封的压力密封件和 Thermo Fisher ALPS 50 V (AB-1443A) 的热封 ab-0757 都提供在套件中。如果要使用不同的热封仪，请咨询制造商以获得合适的密封。
技术指南
用户手册
使用检测试剂盒 QP1013 ， QP1014 ， QP10115 和 QP1016 的用户手册
QuantiGene 样品制备处理
应用说明
QuantiGene Plex 基因表达检测的独特优势
- 提高效率—统一的基因和蛋白质多重 检测解决方案— QuantiGene 和 Procartaplex matched panel 是互补的，高度关联的，在同一个 Luminex 平台上运行，无缝集成，以获得多维度数据
- QuantiGene与 与金标准技术qPCR 具有高度相关性
- 适用于困难的样本类型，包括 FFPE 组织中的降解和交联 RNA，以及直接用于血液，无需 RNA 纯化。
- 真正的多重检测—可在同一孔中测量多达 80 个靶标基因和管家基因，无需交叉反应，且所需的样品数量少
- 标准化平台— 96 孔板规格与 Luminex 200 ， MAGPIX 和 FlexMap3D 系统兼容， 384 孔板适用 FlexMap3D 系统
- 简单的工作流程—无需反转录，只需进行靶标杂交和信号放大的类似ELISA的工作流程
- 大量经过验证的基因库—从超过 22000 种基因中进行选择，以创建通路和疾病相关的检测 panels
- 定制—如果我们没有您的基因，我们可以在 3-4 周内创建您的定制检测panels
QuantiGene Plex 检测的工作原理
QuantiGene Plex 检测利用 xMAP Luminex 微珠进行 3 到 80 种 RNA 靶标的多重检测，随后进行基于分支 DNA 的信号扩增。该检测在96孔板中进行，使用 Luminex 仪器检测信号。
视频：QuantiGene Plex –工作原理动画
QuantiGene Plex Assays结合了分支DNA技术和Luminex xMAP技术，用于准确的多重基因表达分析。分支 DNA 检测通过信号放大而不是靶标扩增直接测量 RNA 转录本。
QuantiGene Plex 基因表达流程
QuantiGene Plex 基因表达检测是一种使用 xMAP Luminex 微珠进行的基于杂交的检测，可在 96 或 384 孔板中进行。该检测试剂盒基于对 RNA 靶标的直接定量，用于多通路分析 3 至 80 个 RNA 靶标以及分支 DNA (bDNA) 信号放大技术。在第一天，将样品裂解以释放 RNA ，并与靶标特异性探针组和 Luminex 捕获微珠一起孵育过夜。在第二天，通过前置放大器，放大器和标记探针的顺序杂交构建信号扩增树。每个扩增装置均可提供 400 倍信号扩增，每个靶标 RNA 拷贝有 6 个扩增单位，每个拷贝 RNA 产生 2 ， 400 x 信号扩增。通过在 Luminex 仪器上使用荧光报告分子藻红蛋白检测信号，以便进行读数和分析。
QuantiGene Plex 检测流程
第 1 步：样品制备：裂解样品以释放并稳定 RNA。RNA 检测适用于多种样品，例如：培养细胞，病毒，细菌，植物和动物组织， FFPE 组织，全血和 PAXgene 血液或纯化 RNA。
第 2 步：靶标杂交：使用靶标特异性探针组检测板 (捕获延长器– CES ，标签延长器– LES 和封闭探针) 在 96 孔或 384 孔板中过夜杂交。
第 3 步：信号放大使用分支 DNA (bDNA) 技术实现信号放大。首先，一个单独的预放大器分子与每对标记延长器杂交。然后，多个放大器分子与每个前置放大器杂交。最后，多个生物素化标记探针寡核苷酸与每个放大器杂交。
第 4 步：检测：添加链霉亲和素藻红蛋白（SAPE）会产生信号，该信号与样本中目标RNA的数量成正比。通过 Luminex 仪器可以读取这些信号。
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第 5 步：数据分析：使用 Thermo Fisher Connect 云 QuantiGene 数据分析 应用程序可随时随地从任何计算机分析数据。如需高级分析和可视化功能，可使用免费的桌面应用软件 Applied Biosystems 转录组分析控制台 (TAC) 软件进行数据分析。TAC 使用散点图和火山图，分层群集等工具提供可视化和解释，并提供指向公开可用注释的链接。
QuantiGene Plex 高通量检测
QuantiGene Plex 384 孔检测形式可实现高通量形式的多重基因表达分析。该检测方法使用目标特异性探针来捕获目标的RNA，并使用分支 DNA 技术来放大荧光信号，这些信号由FLEXMAP 3D，Luminex平台读取。这种检测形式的自动化和批次处理选项可增加样品处理量，缩短手动操作时间，同时可快速获得筛选项目结果。
QuantiGene Plex 384孔检测试剂盒（货号 QP1016) 包含在 384 孔板中进行 QuantiGene Plex 检测的所有必需试剂，缓冲液和板。使用我们的 检测 panels 选择工具设计适合您 的特定靶标 QuantiGene Plex 检测 panels，或联系您当地的技术销售专员获取更多信息。
QuantiGene Plex 384 孔示例数据
QuantiGene Plex 384 孔检测设计用于提高样品处理量，缩短手动操作时间，同时可快速获得筛选项目结果。以下是使用以下推荐设备的 384 孔检测试剂盒生成的示例数据。
刺激 Hela 细胞产生细胞因子
使用细胞刺激混合物刺激培养的 HeLa 细胞中的细胞因子产生，并监测长达 24 小时的不同时间点。在该实验中，使用全套 80-plex 检测 panels 用于专注于细胞因子和趋化因子生物标记物的筛选目的。
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图 1.在细胞刺激混合物刺激后的不同时间点分别对 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达。Y 轴平均标准化表达； x 轴： mRNA 靶标； z 轴：刺激时间点。只显示经测试的基因靶标的子集。HeLa 细胞用 384 孔规格培养，并用细胞刺激混合物刺激长达 24 小时 (1 小时， 2 小时， 4 小时， 24 小时)。未刺激的细胞用作基线对照。在指定时间点，根据 使用液体处理法 (Thermo Fisher PlateMate) 针对细胞裂解液的 QuantiGene 样品制备方案裂解细胞。在所有时间点的所有样品制备后，均执行 QuantiGene Plex 384 孔检测。图表显示了标准化的基因表达结果。
用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达揭示了上调或下调的程度。平均标准化表达 (y 轴) 代表 x 轴上列出的 mRNA 靶标的基因诱导水平，而刺激的时间点则显示在 z 轴上。值得注意的是，例如 IL1B ， IL8 和 TGFB1 在不同刺激时间点显示出明显的相对基因表达。虽然 TGFB1 的相对表达随着时间的推移而逐渐增加，但 IL1B 的峰值表达在 24 小时左右的稍后时间点会出现。表 1 显示了用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达和倍数变化。
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表 1 和 2用细胞刺激混合物刺激后不同时间点 HeLa 细胞中各种靶标的标准化基因表达和倍数变化。
了解科学家如何在其研究中使用 QuantiGene Plex 384 孔：
- Danahay et. al. Cell Reports 10:239-252.
- Ferrer et al. Stem Cells Transl Med 2:911-922.
- Severyn et al. J Biomol screen 9:989-997.
- Neilsen et al.
适用于高通量和批量处理的 QuantiGene Plex 仪器和设备
查找仪器和设备，简化您的 QuantiGene Plex 384 孔工作流程。有关批量处理 的详细选择和建议，请参阅 QuantiGene Plex 384 孔手册 或 联系 您当地的技术销售专员。
| 流程步骤 | 推荐设备 | 描述 | |
|---|---|---|---|
| 样品孵育和靶标杂交 | 温度调节型轨道振荡器：MaxQ 4450 台式轨道摇床 | | 多功能摇床适用于少量容器和细胞培养及许多其他应用的培养。 |
| 孔板清洗 | 磁力架 | 适用于 384 孔板的自动磁力架。 | |
| 样品孵育 | 板封膜ALPS 50 V 手动热封仪 | | 通过各个孔周围的一致性紧密密封，避免样品的蒸发损失和孔之间的交叉污染。 |
| 样品和板添加 | Versette 自动化液体工作站 | | 紧凑型液体处理器，具有用户友好性程序，可靠的性能，可选96或384通道吸头。 |
| 多因子检测 | Luminex FLEXMAP 3D 仪器系统 | | 最先进的多功能多重检测仪器，可以在单次反应体积中同时测量多达 80 次检测。 |
QuantiGene Plex 特点
| 参数 | 96孔 | 384孔 | |
|---|---|---|---|
| 产品特点 | 灵敏度（检测限） | 1000 – 2000 个转录本 / 检测孔 | 2000 – 4000 个转录本 / 检测孔 |
| 变异性 (C.V.) | ≤15% | ≤20% | |
| 线性 | ≥3 logarithmic units | ||
| 多重检测水平 | 3–80 | 3–80 | |
| 样品 | 培养细胞，细菌，全血， PAXgene 血液或干血斑，新鲜 / 冷冻组织 (动物或植物) ， FFPE 样品，纯化 RNA | ||
| 兼容的 Luminex 仪器 | |||
| 检测体积 | 目标探针杂交 | 100 µL | 70 µL |
| 预杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| AMP 杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| 标记探针杂交 | 100 µL | 30 µL | |
| SAPE | 100 µL | 30 µL | |
QuantiGene Plex FAQs
- QuantiGene Plex 检测兼容哪些样本类型？
全血，新鲜组织，培养细胞和纯化 RNA 均经过验证。其他样品类型&，包括 Tempus 血液，细菌， H E 染色 / 未染色 FFPE 和血斑也应适用。 - QuantiGene Plex 检测提供哪些数据分析软件解决方案？
可从任何计算机，任何地方使用 QuantiGene 基于云的应用程序分析数据。如需高级分析和可视化，可使用免费的桌面应用软件 Applied Biosystems 转录组分析控制台 (TAC) 软件分析数据。 - VorTemp ™ 56 振荡培养箱可以用于杂交吗？
我们强烈建议使用 MaxQ 振荡培养箱以获得最佳检测性能。可以使用 Vortemp ，但建议使用 800 rpm。 - 建议的杂交温度是多少？
第 1 天的温度为 54°C ，而第 2 天的温度为 50°C 请使用 QuantiGene 培养箱温度校验套件 (QS0517) 验证培养箱温度。 - QuantiGene Plex 试剂的正确储存条件是什么？
试剂盒到达后，请按照说明储存单一组分。Preamp /Amp/LP 稀释液，微珠混合物， SAPE ， SAPE 稀释液应储存在 4°C 下，而探针组混合物，蛋白酶 K 和封闭试剂应储存在 -20°C 下 其他室温储存。有关详细信息，请参阅产品说明书。 - 试剂盒中包括哪些组分？
试剂盒提供进行检测所需的所有试剂，但单独订购的靶标探针和微珠混合物除外。有关试剂列表，请参阅用户手册。 - QuantiGene Plex 384 孔检测是否可用于 miRNA 或 DNA 分析？
否，仅 QuantiGene 单重检测可用于 miRNA 和 DNA 分析。 - 如果我的 Panel 中使用了任何质控 / 管家基因
建议使用三个或更多的对照 / 管家基因来对基因表达结果进行标准化。 - 可以使用热封仪在检测的第 2 天密封板
不需要，建议使用提供的密封件手动密封。热密封会变形平板，导致清洗问题。 - 该如何稀释样本呢？
对于细胞裂解物或血液裂解物，请使用稀释的裂解混合物 (DLM) ；对于组织匀浆，请使用均质溶液。 - 如何密封第 1 天平板以进行靶标探针杂交？
第 1 天板可手动密封或使用热封仪密封。用于手动密封的压力密封件和 Thermo Fisher ALPS 50 V (AB-1443A) 的热封 ab-0757 都提供在套件中。如果要使用不同的热封仪，请咨询制造商以获得合适的密封。
技术指南
用户手册
使用检测试剂盒 QP1013 ， QP1014 ， QP10115 和 QP1016 的用户手册
QuantiGene 样品制备处理
应用说明
QuantiGene Plex 检测服务
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通过将您的基因表达谱分析项目外包给我们的威斯康星州麦迪逊分校科学家来加速您的研究。我们的检测服务旨在帮助您满足特定项目靶标和时间线，以便您腾出宝贵的资源用于其他发现研究。
检测服务的特点和优势：
设计支持—使用我们的生物信息学团队，定制探针和检测板设计，节省时间；快速获得高质量数据
一致性—在我们团队在售后服务中使用的后续研究中使用相同的定制化检测
灵活性—样品类型包括在 Invitrogen QuantiGene 缓冲液中预裂解的纯化 RNA ，培养细胞或组织 (全血，新鲜或冷冻组织或 FFPE)
选项—靶区的综合列表，包括免疫学，炎症，癌症信号传导，毒理学， 神经病，心脏学，骨生物学，代谢，内分泌学， 干细胞生物学，细胞凋亡和自噬
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仅供科研使用，不可用于诊断目的。