实时荧光定量 PCR 的性能可靠,数据可信

Applied Biosystems PowerUp SYBR Green 预混液是一种预配制、经过优化的通用型 2 倍浓度预混液,适用于实时荧光定量 PCR (qPCR)。该预混液具有卓越的性能,可以用于最具有挑战性的 qPCR 应用。PowerUp SYBR Green 预混液的特点包括双重热启动机制、出色的抗污染能力、持续 72小时的预混反应稳定性、优异的仪器兼容性,可以为所有基因表达分析、NGS 文库定量、其他定量分析应用提供可靠结果。


特点

PowerUp SYBR Green 预混液的主要特点如下:

双重热启动机制的特异性更出色

双重热启动机制提供了卓越的特异性,有助于防止聚合酶在低温下出现不需要的早期活性,从而避免非特异性扩增。

预混反应稳定性长达 72 小时

为进行 qPCR 预先制备的反应板,可在室温下保持长达 72小时的稳定性。

在较宽动态范围内具有优异的可重现性

在分析低丰度转录本和较小的相对表达差异时,具有更大的统计学意义。

优异的仪器兼容性

与标准循环模式或快速循环模式兼容。

 

采用标准循环模式时,可在 60 分钟内获得检测结果;采用快速循环模式时,可在 30 分钟内获得检测结果。

较强的抗污染能力

该预混液中加入了 UNG 和 dUTP,可以降解之前扩增的 PCR 产物,以免其污染后续的 qPCR 反应。


样本数据

卓越的特异性

PowerUp SYBR Green 预混液采用了独家 Dual-Lock Taq DNA 聚合酶,结合了两种热启动机制,便于控制其活性。该双重热启动机制可以严格控制 Taq 的激活,有助于防止较低温度下聚合酶过早激活而导致的非特异性扩增。Dual-Lock Taq 制成了方便的 2 倍浓度的预混液,含有一套经过优化的缓冲液体系、独特的添加剂和除垢剂成分,可进一步提高 PowerUp SYBR Green 预混液的特异性。

 

在使用 PowerUp SYBR Green 预混液评估 24 个不同引物组的实验中,所有反应中均可获得单一熔解曲线,无需优化或重新设计引物。PowerUp SYBR Green 预混液具有较高的特异性,可以缩短您的引物优化和重新设计时间,从而获得高质量的数据。

熔解曲线分析和比较

在使用 PowerUp SYBR Green 预混液评估 24 个不同引物组的实验中,所有反应中均可获得单一熔解曲线,无需优化或重新设计引物。相比之下,在使用其他供应商的几种预混液时,可以观察到部分相同靶标上出现了非特异性扩增,即熔解曲线中出现了多个峰。

预先组装反应的稳定性长达 72 小时

PowerUp SYBR Green 预混液采用了 Dual-Lock Taq DNA 聚合酶,经证明在预组装反应中可保持长达 72 小时的一致性能。该预混液的稳定性使用户能够在进行循环前灵活设置反应板,而不会影响检测结果。

靶标

T-0 hr

T-72 hr

∆Ct

ADAM10

25.2

25.6

0.4

APOA1

24.9

24.9

0.0

CCNB1

26.0

26.1

0.1

COL1A1

23.9

23.9

0.1

CTGF

24.3

24.7

0.3

METTL3

26.3

26.7

0.3

 

PCR 前的稳定性。在选择反应设置和室温避光培养 72 小时后,立即使用 PowerUp SYBR Green 预混液在 Applied Biosystems StepOnePlus 实时荧光定量 PCR 系统上对 1 ng 人类 cDNA 中的几个靶标进行扩增。这些检测在 0 时和 72 时均可以获得单一熔解曲线。

卓越的可重现性

在分析低丰度转录本时和较小的倍数变化时,更出色的可重现性具有更大的统计学意义。PowerUp SYBR Green 预混液采用了双重热启动 Taq DNA 聚合酶,在使用多种靶标进行检测后证明,在较宽的动态范围内具有优异的可重现性。

在较宽的动态范围内具有优异的可重现性

使用两批 PowerUp SYBR 预混液,在 Applied Biosystems 7900 实时荧光定量 PCR 系统上,以 300 nM 的引物浓度对 24 个靶标完成了四次重复检测,绘制了 Ct 标准差与平均 Ct 的对比图。(本次分析中 Ct 平均值大于 34 的不包括在内。)

在较宽的动态范围内提供可靠的检测结果

在较宽动的态范围内进行一致扩增对于 qPCR 法和使用 ΔΔCt 法进行基因表达分析至关重要。与其他制造商的预混液不同,在动态范围实验中,PowerUp SYBR Green 预混液没有在高 cDNA 样品量和较低的关联系数下出现抑制作用,而是在 6个对数级上样量下保持了高效扩增,从而最大程度地确保了数据的可靠性。

PowerUp SYBR Green 预混液在较宽动态范围内的稳健性能

通过 6 个对数级连续稀释的通用型人类参考 cDNA 获得 PGK1 基因的扩增曲线。按照制造商推荐的实验方案,在 Applied Biosystems QuantStudio 7 仪器上以循环条件重复进行三次反应。曲线形状和最高稀释点之间狭窄的间距表明,其他制造商的预混液出现了较大的抑制作用。


完成您的工作流程

将 PowerUp SYBR Green 预混液与序列检测引物配合使用,完成您的 qPCR 工作流程:将优质未标记的寡核苷酸与 SYBR 染料配合使用,用于所有实时荧光定量 PCR 研究应用。序列检测引物使用与 TaqMan 探针相同的原材料和严格受控的流程进行合成,确保所有批次的一致性和质量。

订购信息


仅供科研使用。不可用于诊断程序。