高分辨率熔解曲线 (HRM) 分析是一种相对较新的PCR后分析方法，可用于鉴别核酸序列的差异。 这种方法的核心是检测PCR熔解 (解离) 曲线上的微小差异。 这是借助高亮度的dsDNA结合染料和实时荧光定量PCR仪实现的，后者可精确控制温度变化，且具备高级数据采集功能。 数据用专为HRM设计的软件进行分析和操作。

HRM优点

  • 低试剂消耗量，低废物率： HRM仅需 (20 µL) PCR反应体积即可分析单个样本，无需使用HPLC溶剂或DGGE凝胶
  • 简单、快速的工作流程： PCR扩增后无需额外的仪器设备 在扩增结束时可添加高分辨率熔解曲线，并在完成后立即分析
  • 快速优化： 与DHPLC技术不同，其不需要热优化
  • 低样本消耗： HRM后续分析中，PCR扩增物可直接用于Sanger测序反应
 

HRM

Read how Dr. Birgit Ebner identifies variants by HRM in difficult samples.

选择您感兴趣的领域：

teaser-landscape.par.22157.image.50.45.1

甲基化分析

HRM分析还可用于检测基因之间的甲基化差异；这称为甲基化特异性高分辨率熔解 (MS-HRM) 分析。

teaser-landscape.par.48648.image.50.45.1

突变筛查

高分辨率熔解分析可用于筛查靶基因突变，在测序分析前鉴别变异样本。

快速，准确地找出更多的新变种

高分辨率熔解曲线 (HRM) 分析可替代新基因变体的 dHPLC 测序筛查。 HRM软件现已用于Applied Biosystems ViiA™ 7、7900HT 快速、7500快速、StepOnePlus™和StepOne™实时荧光定量PCR系统。 StepOne™ (48孔) 和StepOnePlus™ (96孔) 实时荧光定量PCR系统操作极其简单，它采用了易于使用但功能强大的用户界面设计，无论新手还是经验丰富的研究人员均适合使用。 7500 快速实时荧光定量PCR系统可在标准的96孔规格中进行快速热循环，并提供精确的结果。 采用384孔ViiA™ 7和7900HT——金标准的高通量系统，实现高通量HRM分析。 AB HRM应用无需温度变化，与需要温度变化的检测方法相比，它更易鉴别出新纯合突变。 
图1： 在另外一张平板上生成的不同点，基于实时HRM系统。

能很容易地鉴别出新的变异体是成功应用HRM技术的关键 只有10％的人能够区分出他们是否来自竞争对手的R (Fig 1)HRM系统。

By eliminating the temperature shift step, the Applied Biosystems HRM solution (Fig 2) was able to clearly distinguish homozygous variant samples from homozygous wild type samples in 97.5% of the population.

 

通过各软件包自动检出所有基因型，且不会因操作人员而变动。 第1类SNP（A / G的），9种DNA样品多种技术的复制品，代表3种基因型： 纯野生型 (G/G), 纯变异型 (A/A) 和杂合型 (A/G).

监管状态： 仅供研究使用。 这些产品不用于诊断。