Protein Thermal Shift 软件和试剂

适用于差示扫描荧光计的 Protein Thermal Shift™ 解决方案

Applied Biosystems® Protein Thermal Shift™ 软件和试剂盒加上实时荧光定量 PCR 系统，只需 < 1 µg 样本/孔即可进行高通量蛋白熔解分析，成本显著低于替代方法。

索取报价 ›   下载试用版软件 ›

Protein Thermal Shift™ 概述

蛋白通常是药物开发过程中所研究的关键靶分子。对与蛋白靶标结合的小分子和配体文库进行高通量筛选通常是该过程中一个重要且耗时的部分—需要在数月内通过各种检测对数千份样本进行筛选。然而，蛋白靶标因易发生降解和聚集而难以处理，所以蛋白稳定性筛选通常是先导物生成计划的重要组成部分。

蛋白稳定性筛选可使用研究天然蛋白的研究项目中常用的蛋白熔解方法进行。蛋白熔解有助于确定配体和缓冲液条件，使蛋白在纯化、结晶和功能表征过程中较大化其稳定性。

过去，蛋白熔解筛选方法不是效率低下就是价格昂贵，要么一次仅能分析一份样本，要么受限于需要毫克量蛋白样本且试剂成本较高的高通量方法。我们的 Protein Thermal Shift™ 软件和试剂盒 提供了一种经济高效的蛋白熔解分析方法，使用很小的样本量即可进行高通量分析，以确定可提高其 Tm 和相对稳定性的配体、突变、修饰和缓冲液条件。还可用于筛选抗体-配体结合（作为抗体优化过程的一部分）。

Protein Thermal Shift™ 测定方法

蛋白稳定性会随缓冲液 pH 值、盐含量以及因储存或反应缓冲液中存在的各种辅因子而变化。使用蛋白结合染料（如 PTS）和我们的实时荧光定量 PCR 系统进行实时熔解实验，可在特定检测缓冲液环境中产生特定于目标蛋白的荧光表达谱。pH 值、盐含量或检测缓冲液组分的变化会在荧光表达谱（熔解曲线）中出现变化。可将其转换为根据熔解曲线拐点计算的 Tm。

  1. 混合蛋白、缓冲液、配体（如适用）和 PTS 染料
  2. 在实时荧光定量 PCR 仪上运行熔解曲线实验
  3. 蛋白在加热时会展开
  4. 对环境敏感的 PTS 染料可结合疏水区域和荧光
  5. 可从熔解曲线计算出熔解温度 (Tm)
  6. Tm 的变化与蛋白稳定性或配体结合的变化相关
Protein Thermal Shift™ 应用

蛋白稳定性筛选：

  • 改进蛋白制备（缓冲液、pH 值、盐、赋形剂）
  • 有利于结晶的表达谱分析条件
  • 开发蛋白制剂和储存缓冲液
  • 分析突变或修饰的影响
  • 进行蛋白制备质量控制

高通量配体筛选：

  • 小分子和片段文库筛选
  • 抗体-靶标特异性
  • 蛋白间相互作用
  • 抑制剂结合筛选


放大图像

Protein Thermal Shift™ 表达谱。

概述
Protein Thermal Shift™ 概述

蛋白通常是药物开发过程中所研究的关键靶分子。对与蛋白靶标结合的小分子和配体文库进行高通量筛选通常是该过程中一个重要且耗时的部分—需要在数月内通过各种检测对数千份样本进行筛选。然而，蛋白靶标因易发生降解和聚集而难以处理，所以蛋白稳定性筛选通常是先导物生成计划的重要组成部分。

蛋白稳定性筛选可使用研究天然蛋白的研究项目中常用的蛋白熔解方法进行。蛋白熔解有助于确定配体和缓冲液条件，使蛋白在纯化、结晶和功能表征过程中较大化其稳定性。

过去，蛋白熔解筛选方法不是效率低下就是价格昂贵，要么一次仅能分析一份样本，要么受限于需要毫克量蛋白样本且试剂成本较高的高通量方法。我们的 Protein Thermal Shift™ 软件和试剂盒 提供了一种经济高效的蛋白熔解分析方法，使用很小的样本量即可进行高通量分析，以确定可提高其 Tm 和相对稳定性的配体、突变、修饰和缓冲液条件。还可用于筛选抗体-配体结合（作为抗体优化过程的一部分）。

方法
Protein Thermal Shift™ 测定方法

蛋白稳定性会随缓冲液 pH 值、盐含量以及因储存或反应缓冲液中存在的各种辅因子而变化。使用蛋白结合染料（如 PTS）和我们的实时荧光定量 PCR 系统进行实时熔解实验，可在特定检测缓冲液环境中产生特定于目标蛋白的荧光表达谱。pH 值、盐含量或检测缓冲液组分的变化会在荧光表达谱（熔解曲线）中出现变化。可将其转换为根据熔解曲线拐点计算的 Tm。

  1. 混合蛋白、缓冲液、配体（如适用）和 PTS 染料
  2. 在实时荧光定量 PCR 仪上运行熔解曲线实验
  3. 蛋白在加热时会展开
  4. 对环境敏感的 PTS 染料可结合疏水区域和荧光
  5. 可从熔解曲线计算出熔解温度 (Tm)
  6. Tm 的变化与蛋白稳定性或配体结合的变化相关
应用
Protein Thermal Shift™ 应用

蛋白稳定性筛选：

  • 改进蛋白制备（缓冲液、pH 值、盐、赋形剂）
  • 有利于结晶的表达谱分析条件
  • 开发蛋白制剂和储存缓冲液
  • 分析突变或修饰的影响
  • 进行蛋白制备质量控制

高通量配体筛选：

  • 小分子和片段文库筛选
  • 抗体-靶标特异性
  • 蛋白间相互作用
  • 抑制剂结合筛选


放大图像

Protein Thermal Shift™ 表达谱。

视频
文献
Protein Thermal Shift™ 软件
Protein Thermal Shift 软件

Protein Thermal Shift™ 软件的开发是w为了分析从 Applied Biosystems® 实时荧光定量 PCR 仪文件中直接得出的蛋白熔解荧光读数。不同的蛋白具有不同的 Protein Thermal Shift 表达谱，各自具有独特的熔解曲线形状、斜率、信噪比和温度熔解范围。Protein Thermal Shift™ 软件可通过以下两种方法根据这些曲线生成一个或多个 Tm 值：Boltzmann 推导的 Tm 和以衍生曲线确定的 Tm。该软件可轻松地将不同检测条件或配体之间的 Tm 偏移值（δTm 或 ΔTm）与参比样本进行快速对比，提供了一种可使与目标蛋白结合的蛋白或配体保持稳定（或去稳定）的条件进行筛选和确定的工具。

Protein Thermal Shift™ 测定

Protein Thermal Shift™ (PTS) 试剂可用于蛋白熔解测定，该测定可用作测量蛋白热稳定性、确定恰当缓冲液条件和测量蛋白-配体相互作用的高效筛选工具。该测定非常易于设置和运行，通常在 0.5-2 小时之间得出结果（具体取决于实时系统和测定条件）。